反轉(zhuǎn)錄酶的選擇:
1. Money 鼠白血病病毒(MMLV)反轉(zhuǎn)錄酶:有強(qiáng)的聚合酶活性,,RNA酶H活性相對較弱,。最適作用溫度為37℃。! Z T3 Z: v% Y$ P* ?
2. 禽成髓細(xì)胞瘤病毒(AMV)反轉(zhuǎn)錄酶:有強(qiáng)的聚合酶活性和RNA酶H活性,。最適作用溫度為42℃,。) F# O8 W9 A% O
3. Thermus thermophilus、Thermus flavus等嗜熱微生物的熱穩(wěn)定性反轉(zhuǎn)錄酶:在Mn2+存在下,,允許高溫反轉(zhuǎn)錄RNA,,以消除RNA模板的二級結(jié)構(gòu)。
4. MMLV反轉(zhuǎn)錄酶的RNase H-突變體:Invitrogen公司商品名為SuperScript 和SuperScriptⅡ,。此種酶較其它酶能多將更大部分的RNA轉(zhuǎn)換成cDNA,,這一特性允許從含二級結(jié)構(gòu)的、低溫反轉(zhuǎn)錄很困難的mRNA模板合成較長cDNA,。
擴(kuò)增酶的選擇:
1. 對于小于4kb的產(chǎn)物使用Taq DNA聚合酶或Platinum Taq DNA聚合酶,。' o1 U3 |8 F* C$ B
2. 對于小于12kb的產(chǎn)物使用Platinum Pfx Taq DNA聚合酶或Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity。
3. 對于大于12kb的產(chǎn)物使用ELONGAE或Enzyme Mix,。
4. 對于一步法RT-PCR,,如果產(chǎn)物小于3.5kb,使用Taq DNA聚合酶或Platinum Taq DNA聚合酶,;如果產(chǎn)物小于9kb,,使用Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity。
1. Money 鼠白血病病毒(MMLV)反轉(zhuǎn)錄酶:有強(qiáng)的聚合酶活性,,RNA酶H活性相對較弱,。最適作用溫度為37℃。! Z T3 Z: v% Y$ P* ?
2. 禽成髓細(xì)胞瘤病毒(AMV)反轉(zhuǎn)錄酶:有強(qiáng)的聚合酶活性和RNA酶H活性,。最適作用溫度為42℃,。) F# O8 W9 A% O
3. Thermus thermophilus、Thermus flavus等嗜熱微生物的熱穩(wěn)定性反轉(zhuǎn)錄酶:在Mn2+存在下,,允許高溫反轉(zhuǎn)錄RNA,,以消除RNA模板的二級結(jié)構(gòu)。
4. MMLV反轉(zhuǎn)錄酶的RNase H-突變體:Invitrogen公司商品名為SuperScript 和SuperScriptⅡ,。此種酶較其它酶能多將更大部分的RNA轉(zhuǎn)換成cDNA,,這一特性允許從含二級結(jié)構(gòu)的、低溫反轉(zhuǎn)錄很困難的mRNA模板合成較長cDNA,。
擴(kuò)增酶的選擇:
1. 對于小于4kb的產(chǎn)物使用Taq DNA聚合酶或Platinum Taq DNA聚合酶,。' o1 U3 |8 F* C$ B
2. 對于小于12kb的產(chǎn)物使用Platinum Pfx Taq DNA聚合酶或Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity。
3. 對于大于12kb的產(chǎn)物使用ELONGAE或Enzyme Mix,。
4. 對于一步法RT-PCR,,如果產(chǎn)物小于3.5kb,使用Taq DNA聚合酶或Platinum Taq DNA聚合酶,;如果產(chǎn)物小于9kb,,使用Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity。