兩步法RT-PCR比較常見,，在使用一個樣品檢測多個mRNA時比較有用,。然而一步法RT-PCR具有其他優(yōu)點。一步法RT-PCR在處理大量樣品時易于操作,，有助于減少殘余污染,，因為在cDNA合成和擴增之間不需要打開管蓋。一步法可以得到更高的靈敏度,，最低可以達(dá)到0.1pg總RNA,，這是因為整個cDNA樣品都被擴增。對于成功的一步法RT-PCR,，一般使用反義的基因特異性引物起始cDNA合成,。
一步法和兩步法各有其特點，按照試驗的對象具體確定用那一種方法,，對不適合于提取mRNA的樣品只能用一步法RT-PCR方法
