丙烯酰胺凝膠電泳即聚丙烯酰胺凝膠電泳

   聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺(acrylamide,，簡(jiǎn)稱(chēng)Acr)和N-甲叉雙丙烯酰胺(N,，N—methylene-bisacylamide，簡(jiǎn)稱(chēng)Bis)在加速劑N,，N,，N¢，N¢—四甲基乙二胺(N,，N,，N¢，N¢—tetramethyl ethylenedia mine,，簡(jiǎn)稱(chēng)TEMED)和催化劑過(guò)硫酸銨(ammonium persulfate (NH4)2S2O8,，簡(jiǎn)稱(chēng)AP)或核黃素(ribofavin即vita min B2，C17H20O6N4)的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠,，以此凝膠為支持物的電泳稱(chēng)為聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamide gel electrophoresis,，簡(jiǎn)稱(chēng)PAGE)。

    聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)的電泳方法,。在這種支持介質(zhì)上可根據(jù)被分離物質(zhì)分子大小和分子電荷多少來(lái)分離,。
    聚丙烯酰胺凝膠有下列特性：
(1)在一定濃度時(shí)，凝膠透明,，有彈性,，機(jī)械性能好,；
(2)化學(xué)性能穩(wěn)定，與被分離物不起化學(xué)反應(yīng),，在很多溶劑中不溶,；
(3)對(duì)pH和溫度變化較穩(wěn)定；
(4)幾乎無(wú)吸附和電滲作用,，只要Acr純度高,，操作條件一致，則樣品分離重復(fù)性好,；
(5)樣品不易擴(kuò)散,，且用量少，其靈敏度可達(dá)10-6g
(6)凝膠孔徑可調(diào)節(jié),，根據(jù)被分離物的分子量選擇合適的濃度,，通過(guò)改變單體及交聯(lián)劑的濃度調(diào)節(jié)凝膠的孔徑；
(7)分辨率高,，尤其在不連續(xù)凝膠電泳中,，集濃縮、分子篩和電荷效應(yīng)為一體,。因而較醋酸纖維薄膜電泳,、瓊脂糖電泳等有更高的分辨率。  
  

    聚丙烯酰胺凝膠電泳可分為連續(xù)的和不連續(xù)的兩類(lèi),，前者指整個(gè)電泳系統(tǒng)中所用緩沖液,，pH值和凝膠網(wǎng)孔都是相同的，后者是指在電泳系統(tǒng)中采用了兩種或兩種以上的緩沖液,，pH值和孔徑,，不連續(xù)電泳能使稀的樣品在電泳過(guò)程中濃縮成層，從而提高分辨能力,。

    蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠  中電泳時(shí),，它的遷移率取決于它所帶凈電荷以及分子的大小和形狀等因素。如果加入一種試劑使電荷因素消除,，那電泳遷移率就取決于分子的大小,，就可以用電泳技術(shù)測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量。1967年,，Shapiro等發(fā)現(xiàn)陰離子去污劑十二烷基硫酸鈉（SDS）具有這種作用,。當(dāng)向蛋白質(zhì)溶液中加入足夠量SDS和巰基乙醇，SDS可使蛋白質(zhì)分子中的二硫鍵還原,。由于十二烷基硫酸根帶負(fù)電,，使各種蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物都帶上相同密度的負(fù)電荷，它的量大大超過(guò)了蛋白質(zhì)分子原的電荷量,，因而掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間原有的電荷差別,，SDS與蛋白質(zhì)結(jié)合后,，還可引起構(gòu)象改變，蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物形成近似“雪茄煙”形的長(zhǎng)橢圓棒,，不同蛋白質(zhì)的SDS復(fù)合物的短軸長(zhǎng)度都不一樣,，約為18A，這樣的蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物,，在凝膠中的遷移率,，不再受蛋白質(zhì)原的電荷和形狀的影響，而取決于分子量的大小,，因而SDS FONT FACE聚丙烯酰胺凝膠電泳可以用于測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量,。