1細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基的成分有哪些,？
答：動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存時(shí)最常使用的冷凍培養(yǎng)基是含9-10%DMSO(dimethylsulfoxide)和90-95 %原來(lái)細(xì)胞生長(zhǎng)用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之,。注意：由于DMSO稀釋時(shí)會(huì)放出大量熱能,，故不可將DMSO直接加入細(xì)胞液中,，必須使用前先行配制完成,。
2細(xì)胞欲冷凍保存時(shí),，細(xì)胞冷凍管內(nèi)應(yīng)有多少細(xì)胞濃度,？
答：冷凍管內(nèi)細(xì)胞數(shù)目一般為1-8×106 cells/ml vial,。
3如何用臺(tái)盼蘭計(jì)數(shù)活細(xì)胞,？
答：將樣品適當(dāng)稀釋后，用稀釋后的樣品和0.4％的臺(tái)盼蘭溶液按1:1混合后,，用移液槍點(diǎn)樣到血球計(jì)數(shù)板,，置于倒置顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù),，其中藍(lán)色細(xì)胞是死細(xì)胞,，因活細(xì)胞排斥臺(tái)盼蘭,，不被染色。
4冷凍管應(yīng)如何解凍,？
答：取出冷凍管后,，須立即放入37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1－2分鐘內(nèi)大部分融化,，特別注意,，需殘留一小塊冰塊，就可拿到超凈工作臺(tái)操作細(xì)胞,，用75％消毒凍存管,，用新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí),，必須注意安全,，預(yù)防冷凍管之爆裂。
5細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí),，是否應(yīng)馬上去除DMSO,？
答：除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO敏感之細(xì)胞外，絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞）,，在解凍之后,，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)方瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可,，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)或貼附之問(wèn)題,。
6培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5%還是10%CO2，或者根本沒(méi)有影響,？
答：一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng),，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時(shí),，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10%CO2,；當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g 時(shí)，則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細(xì)胞
