1欲將一般動(dòng)物細(xì)胞離心下來，其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速,？
答：欲回收動(dòng)物細(xì)胞,，其離心速率一般為300×g(約1,000rpm)，5-10分鐘,，過高之轉(zhuǎn)速過長時(shí)間都將造成細(xì)胞死亡,。合適的離心轉(zhuǎn)速是根據(jù)相對離心決定。
2懸浮細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理,？
答：一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)瓶中，稀釋細(xì)胞濃度即可,。若培養(yǎng)液太多時(shí)可分瓶取出一部份含細(xì)胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)瓶中,，加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度，重復(fù)上述步驟即可,。
3冷凍保存細(xì)胞之方法,？
答：冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃（30－60分鐘）→–20℃(30分鐘) →–80℃（16－18小時(shí)或隔夜）→ 液氮罐長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下,，再放入液氮中長期儲(chǔ)存,。
4支原體污染會(huì)對細(xì)胞培養(yǎng)有何影響？
答：支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞之生長參數(shù),、代謝及研究之任一數(shù)據(jù),。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義,。
5購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因？
答：研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳，原因比較復(fù)雜,，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳,；血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳；解凍過程錯(cuò)誤,；冷凍細(xì)胞解凍后,，加以洗滌細(xì)胞和離心；懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞,；培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤,；細(xì)胞置于–80℃太久等。建議嚴(yán)格參照ATCC或ECACC的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇,、凍存等工作,。
6購買的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后，為什么有時(shí)會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少,？
答：研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,，大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤，造成細(xì)胞的物理性損傷,，以及細(xì)胞流失,。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心，應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可,。但對于DMSO敏感的細(xì)胞,，還是復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)，用離心去除DMSO比較好
