1欲將一般動(dòng)物細(xì)胞離心下來(lái),，其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速？
答：欲回收動(dòng)物細(xì)胞,，其離心速率一般為300×g(約1,000rpm),，5-10分鐘，過(guò)高之轉(zhuǎn)速過(guò)長(zhǎng)時(shí)間都將造成細(xì)胞死亡。合適的離心轉(zhuǎn)速是根據(jù)相對(duì)離心決定,。
2懸浮細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理,？
答：一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)瓶中，稀釋細(xì)胞濃度即可,。若培養(yǎng)液太多時(shí)可分瓶取出一部份含細(xì)胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)瓶中,，加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度，重復(fù)上述步驟即可,。
3冷凍保存細(xì)胞之方法,？
答：冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃（30－60分鐘）→–20℃(30分鐘) →–80℃（16－18小時(shí)或隔夜）→ 液氮罐長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下,，再放入液氮中長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
4支原體污染會(huì)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有何影響？
答：支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞之生長(zhǎng)參數(shù),、代謝及研究之任一數(shù)據(jù),。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義,。
5購(gòu)買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因？
答：研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,，原因比較復(fù)雜,，常見(jiàn)原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳；血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳,；解凍過(guò)程錯(cuò)誤,；冷凍細(xì)胞解凍后，加以洗滌細(xì)胞和離心,；懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞,；培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤；細(xì)胞置于–80℃太久等,。建議嚴(yán)格參照ATCC或ECACC的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇,、凍存等工作。
6購(gòu)買的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,，為什么有時(shí)會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少,？
答：研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少，大都是因?yàn)殡x心過(guò)程操作上的失誤,，造成細(xì)胞的物理性損傷,，以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,，應(yīng)待細(xì)胞生長(zhǎng)隔夜后再更換培養(yǎng)基即可,。但對(duì)于DMSO敏感的細(xì)胞，還是復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)，用離心去除DMSO比較好
