一個(gè)實(shí)驗(yàn)室測定結(jié)果的可靠性是由其精密度,、準(zhǔn)確性及可比性所決定的，一般必需從下面幾方面著手,。
一． 選好測定方法,；
二． 購買質(zhì)量過硬的試劑盒；
三． 要有質(zhì)優(yōu)的測試儀器,；
四． 必需進(jìn)行正確的校準(zhǔn),；
五． 還要規(guī)范化操作；
六． 搞好過硬的室內(nèi)質(zhì)量控制,；
七． 積極參加室間質(zhì)評活動,；
八． 還要有一支素質(zhì)高的隊(duì)伍。
現(xiàn)就生化分析儀的校準(zhǔn)問題提出個(gè)人看法,。
一,、 校準(zhǔn)的重要性和必要性
首先必須明確生化分析儀不論如何先進(jìn)，它還是一個(gè)比較器,，它測試出來的標(biāo)本結(jié)果是隨著標(biāo)準(zhǔn)限的設(shè)置不同而變化的,。所以，在衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心擬定的“臨床實(shí)驗(yàn)室（定量測定）室內(nèi)質(zhì)控工作指南”中明確指出“對測定標(biāo)本的儀器一定要求進(jìn)行校準(zhǔn),，校準(zhǔn)時(shí)要選擇合適的（配套的）標(biāo)準(zhǔn)品/校準(zhǔn)品,；如有可能，校準(zhǔn)品應(yīng)能溯源到參考方法或/和參考物質(zhì),；對不同的分析項(xiàng)目要根據(jù)其特性確立各自的校準(zhǔn)頻率,。”這說明校準(zhǔn)儀器是室內(nèi)質(zhì)控的重要部分，強(qiáng)調(diào)了校準(zhǔn)工作的必要性和重要性,，同時(shí)指出了校準(zhǔn)的方法和要求,。
二、 確立測定系統(tǒng)的概念
對于一個(gè)臨床檢測項(xiàng)目,，如果所用方法的測定原理,、試劑、儀器,、校準(zhǔn)品中任何一個(gè)不同,，都可能得到不同的測定結(jié)果。因此,，測定系統(tǒng)包括測定原理,、試劑,、儀器、校準(zhǔn)品四要素,。如果我們想要得到準(zhǔn)確可靠的測定結(jié)果,，而該結(jié)果又具有與國際、國內(nèi)其他實(shí)驗(yàn)室的可比性,，應(yīng)該自己建立一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)測定系統(tǒng),。在全自動生化分析儀上使用配套的試劑和標(biāo)準(zhǔn)品，即日立7170使用寶靈曼的試劑和校準(zhǔn)品（c.f.a.s）,，在貝克曼CX-7生化分析儀上使用貝克曼的試劑和校準(zhǔn)品等,。各儀器廠家均有自己的標(biāo)準(zhǔn)測定系統(tǒng)。對于校準(zhǔn)品不能亂用,，如絕對不能用貝克曼的校準(zhǔn)品校準(zhǔn)日立生化儀,，同樣也不能用寶靈曼的校準(zhǔn)品去校準(zhǔn)貝克曼生化儀。
三,、 校準(zhǔn)品和質(zhì)控品
校準(zhǔn)品（Calibration materials）含有已知量的欲測物,，用以校準(zhǔn)該測定方法的數(shù)值，它與該方法及試劑,、儀器是相關(guān)聯(lián)的,。校準(zhǔn)品的作用是為了減少或消除儀器、試劑等造成的系統(tǒng)誤差,。因此最好為人血清基質(zhì),，以減少基質(zhì)效應(yīng)造成的誤差。
質(zhì)控品（Control materials）只用于和待測標(biāo)本同時(shí)測定的,，為了控制標(biāo)本的測定誤差,，因此要求保存時(shí)間十分穩(wěn)定。前者是校準(zhǔn)其值而后者是控制誤差用的,。
四,、 校準(zhǔn)前準(zhǔn)備
1 .了解燈泡已使用多久？檢查飄移是否合乎要求,；
2． 檢查比色杯的清潔及磨損情況,？必要時(shí)進(jìn)行更換；
3． 用清潔劑泡洗管道
4． 測定儀器的精密度及線性是否達(dá)到儀器性能要求,？
五,、 定值質(zhì)控血清是否可以校準(zhǔn)儀器？
我們在相同條件下,，同時(shí)用五個(gè)進(jìn)口產(chǎn)品,，每家兩種不同濃度的定值如TP、ALB、UREA,、UA、ALP,、GGT,、CK、HBDH,、LD,、AMY等，在日立7170A上進(jìn)行測定(用常規(guī)試劑),，詳見質(zhì)控血清對部份常規(guī)測定項(xiàng)目（如T,、ALB、UREA,、Cr,、UA、K,、Na,、Cl、AST,、ALT）結(jié)果與靶值比較：
表 不同廠家定值質(zhì)控對TP,、ALB、,、AST,、ALP結(jié)果與靶值比較
TPALBUREAASTALP
T偏差%T偏差%T偏差%T偏差%T偏差%
汽巴康寧1574.392905.04.543-10.5964.2
汽巴康寧2464.89242.0819.3-5.76184-11.72650.2
寶靈曼1502.034.8-5.178.960.4558.3-11.2-2422.7
寶靈曼248.62.8833.7-5.0424-6.77140-12.33842.7
RANDOX159.76.3640.83.887.674.362-17.7214-16.1
RANDOX2398.3326.95.9821.6-5.67144-12.7394-17.1
Human1724.1846.7-4.183.785.1633.5-7.5168-2.2
Human229.8-2.6829.8-2.7625.1-5.08151-11.7287-9.1
Bio-Red1630391.287.1024-14.62522
Bio-Red2421.7927018.0-4.44201-14.32980.84
* 從總蛋白結(jié)果來看RANBOX與Bio-Red 相差為6.45%，而寶靈曼與Bio-Red 較為接近,；
* 從白蛋白結(jié)果分析,，寶靈曼與Bio-Red相對相差5.75%，與總蛋白結(jié)果明顯不同,。Bio-Red則與汽巴康寧比較接近,。
* UREA結(jié)果中凡是高值均上不去，分析其原因很可能與我們采用試劑盒的質(zhì)量有關(guān),，所以試劑盒的線性范圍理應(yīng)成為選擇試劑盒的重要依據(jù)之一,。但從低值結(jié)果分析，也有5%的偏差（Bio-Red與Human）
* AST與ALT測定值均低于靶值,，這就涉及我們選用什么K值問題,。
* ALP測定中RANDOX（-16.6%）與寶靈曼（2.7%）靶值之間竟相差19.3%，這可能涉及試劑盒選用緩沖液種類,，PH值以及所用ε值等有關(guān),。
通過上述結(jié)果比較，說明不同廠家生產(chǎn)的定值質(zhì)控血清靶值之間有的相差較大，提示我們決不能用定值質(zhì)控血清代替校準(zhǔn)品作校準(zhǔn)用,。
六,、 校準(zhǔn)方法
例如日立(Hitachi)系列您必須購買寶靈曼(Boehringer)的試劑及其校準(zhǔn)的說明書設(shè)置參數(shù)，用c.f.a.s.校準(zhǔn)血清進(jìn)行校準(zhǔn),，即可獲得各項(xiàng)目的校準(zhǔn)K值,，同時(shí)觀察一下各項(xiàng)目測定時(shí)反應(yīng)進(jìn)程圖，檢查各項(xiàng)目參數(shù)設(shè)置是否在最佳位置,，如不在最佳位置應(yīng)予以重新設(shè)置并測定,。此時(shí)得到的K值即為準(zhǔn)確的校準(zhǔn)K值，然后測定待測的10至20份新鮮血清三次取其平均值,，應(yīng)該說此結(jié)果是用Hitachi-Boehringer檢測系統(tǒng)所獲的測定值,。然后用此血清值校準(zhǔn)其它測定系統(tǒng)。
表 日立7170,、BM試劑連續(xù)四個(gè)月每天進(jìn)行校正(n=81)K值的變化
TPALBALTASTCreaUreaUATGCholGluCaCKGGT
Mean301769430232274147562673154312721449174459238642603
SD 866.69 6349.7 144850.216.116.917.418.456.861.1167.9
CV% 2.8 1.0 2.1 1.7 9.8 1.9 1.1 1.4 1.2 1.09.6 1.6 6.9
七,、 關(guān)于酶活性測定校準(zhǔn)問題
有的主張不進(jìn)行校準(zhǔn)而采用固定K值，有的作者以為應(yīng)該進(jìn)行校準(zhǔn),。酶活力計(jì)算公式如下：
酶活力（u/l）=△A/min×V×106/(ε×v×1)
令k=V×106/（ε×v）
則酶活力（u/l）=△A/min×k
常用K值有以下幾種：
a) 理論K值：根據(jù)理論摩爾消光系數(shù)（ε）來計(jì)算,，如NADH為6.22×103
b) 實(shí)測K值：由于儀器波長的精密及半寬度不同，而應(yīng)根據(jù)實(shí)測ε值來設(shè)定K值
c) 廠家給的K值：廠家生產(chǎn)試劑盒說明書上提供的K值（有的廠家提供6.3×103）
d) 校準(zhǔn)K值：通過校準(zhǔn)物直接校準(zhǔn)得到的K值
在日立7170A全自動生化分析儀上,，可以得到幾種不同的酶K值,，見下表
表 日立7170A全自動生化分析儀上用不同方法得到幾種酶的K值
指示物波長理論K值實(shí)測K值校準(zhǔn)K值
ALTNADH340nm24442642（8.1%）3026（23.8%）
ASTNADH340mm24442642（8.1%）2775（13.5%）
CKNADPH340mm38783878（8.1%）3886（8.3%）
GGT4NA405mm14181539（8.5%）1612（13.7%）
GGT4NB405mm14751739（17.9%）——
ALP4NA（PH10）405mm757825（8.9%）——
注：1校準(zhǔn)物為寶靈曼c(diǎn).f.a.s，試劑也用寶靈曼的配套試劑,。
2括號內(nèi)數(shù)字是該K值與理論K值相比的變化率
以上摘自張克堅(jiān)文章中
* 從上述K值中不難發(fā)現(xiàn)實(shí)測K值大于理論K值,，這說明生化分析儀的測光系統(tǒng)還存在著一定誤差，如波長,、半寬度及光徑等偏差,，使儀器達(dá)不到理論上的最佳狀態(tài)；
* 校準(zhǔn)K值與實(shí)測K值之間也存在一定的差距,，即使指示物和儀器相同,，其差異可能由試劑及校準(zhǔn)品造成的；
* 作者認(rèn)為最好使用校準(zhǔn)K值,，但必須由兩個(gè)先決條件：1必須使用配套的試劑,；2必須使用配套的高質(zhì)量的校準(zhǔn)品，但校準(zhǔn)K值應(yīng)有其溯源性,。
關(guān)于酶活標(biāo)準(zhǔn)品,，歐洲標(biāo)準(zhǔn)局（BCR）和美國國家標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究院（NIST）均發(fā)表了人血清基質(zhì)的酶活性標(biāo)準(zhǔn)物，相信不久將會有公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)（校準(zhǔn)）品問世,。
八,、 必須擬訂校準(zhǔn)計(jì)劃（文件）
校準(zhǔn)工作不是僅進(jìn)行一次就可萬事無憂一勞永逸,，而必須經(jīng)常化,。按照“臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制（QC）的要求（草案）”必須要求擬定校準(zhǔn)計(jì)劃,，其內(nèi)容包括：
1．建立校準(zhǔn)方法
⑴選擇合適（配套）的校準(zhǔn)品，包括校準(zhǔn)品數(shù)目,、類型和濃度,；
⑵如有可能校準(zhǔn)品應(yīng)溯源到參考方法或參考物質(zhì)；
⑶確定校準(zhǔn)的頻度,。至少每六個(gè)月進(jìn)行一次校準(zhǔn)；
⑷如有下列情況發(fā)生時(shí),，必須進(jìn)行校準(zhǔn)
* 改變試劑的種類,，或者批號更換了。如果實(shí)驗(yàn)室能說明改變試劑批號并不影響結(jié)果的范圍,，則可以不進(jìn)行校準(zhǔn),；
* 儀器或者檢驗(yàn)系統(tǒng)進(jìn)行一次大的預(yù)防性維護(hù)或者更換了重要部件，這些都有可能影響檢驗(yàn)性能,；
* 質(zhì)控反映出異常的趨勢或偏移,，或者超出了實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的接受限，采取一般性糾正措施后,，不能識別和糾正問題時(shí),；
2．每個(gè)實(shí)驗(yàn)室對每臺儀器必需要有校準(zhǔn)計(jì)劃。每次校準(zhǔn)必須有詳情的記錄和分析,。每次校準(zhǔn)記錄必須保存?zhèn)洳椤?nbsp;
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