艾滋病因危害巨大,,其檢測結果稍有偏差都會給受檢者帶來難以承受的災難。為便于HIV樣本的保存,,降低運輸費用及HIV抗體確證費用,,世界各國艾滋病防控領域的學者,、研究人員紛紛探索解決方案,。來自我國基層的學者經過十幾年的鉆研,提出的新方法得到了國內多位該領域專家的認可,。
血液樣本運送須大動干戈
艾滋病的診斷,、疫情監(jiān)測、療效觀察等項目的檢測,,絕大多數(shù)是在我國市或省疾病預防控制中心進行的,。基層醫(yī)療衛(wèi)生單位篩查出的HIV抗體呈陽性反應的樣本,,須由2人或專車送至市或省疾控中心檢測,。由于用于HIV項目檢測的多為血液、血清、血漿等液體樣本且具有傳染性,,運輸過程中存在著包裝破損,、溢漏、滲出等潛在危險,,所以需要用密閉而堅固的包裝容器,。為防萬一,還須在內包裝周圍墊上緩沖吸水材料,;又由于血液樣本為液體并富含營養(yǎng),,微生物易于繁殖使其腐敗變質,因而需要冷藏,;再按有關規(guī)定進行3層包裝,。這樣,其包裝不僅復雜笨重,,也浪費了大量的人力,、物力與財力。
濾紙干血斑準確性難保證
為解決傳統(tǒng)方法在樣本保存,、運輸過程中的繁復,,美國食品和藥物管理局批準并推廣應用“濾紙干血斑技術(DBS)”。
濾紙干血斑技術是將受檢人員的血液樣本滴在濾紙上,,經干燥后即為“濾紙干血斑”,。化驗時,,將干血斑用打孔器從濾紙上取下,,放入試管等容器中,加入樣本提取液溶解提取一定時間,,然后取其中的液體進行HIV項目檢測,。該技術的優(yōu)點是將血液滴于濾紙上制成干血斑后,HIV樣本失去了感染性,,不易腐敗變質,,便于保存、運輸?shù)?。但在我國及盧旺達,、肯尼亞等國家的實際應用中,卻發(fā)現(xiàn)在制備干血斑的過程中會有約10%的合格樣本變成不合格,,從而導致漏診和誤診,。此外,濾紙干血斑樣本溶解洗脫時間須24~48小時,,且檢測時須提前準備,。
干血棉球易運輸結果準
受濾紙干血斑方法的啟發(fā),,筆者研究了新的方法——血棉球技術。該技術是將受檢人員的血液樣本滴在滅菌的醫(yī)用脫脂棉球上,,經干燥后,,即成為干血棉球樣本。
棉球載體形態(tài)為立體球狀,,柔軟蓬松,,吸水性極強,每克棉球可容納12克血液,,是濾紙的6倍,。所制成的干血棉球樣本載量可多可少,少至數(shù)微升,,多達數(shù)毫升,,可滿足艾滋病、性病等多種疾病項目的檢測與復檢要求,;干血棉球樣本溶解洗脫時間只需數(shù)十分鐘,,可當天隨時檢測。重要的是,,含100μl血液的干血棉球樣本用100μl提取液提取時,,可獲取約50μl原濃度血液樣本,用原濃度樣本檢測,,提高了檢測結果的準確性,。
干血棉球技術集合了液態(tài)血液樣本容量較大、檢測結果準確,,而濾紙干血斑樣本便于保存運輸,、病毒失去感染性的優(yōu)點,使二者的優(yōu)勢得到了完美的結合,。
聯(lián)合確證技術簡化確診流程
HIV抗體確證試驗也是艾滋病確診的關鍵環(huán)節(jié),。對于篩查試驗呈陽性反應的血液樣本,再用免疫印跡(WB)等方法做確證試驗,。只有當確證試驗陽性時,,才能確診為艾滋病。實驗時,,無論每次檢測樣本是1個還是10個,,同樣都需要一個檢測程序、1個陰性對照,、1個弱陽性對照和1個強陽性對照。因而檢測樣本數(shù)量越少,,平均每個樣本的檢測費用越高,。所以,,為收集較多數(shù)量的樣本,以降低確證試驗費用,,確證試驗多為每兩周檢測1次,。這樣,雖然確證試驗費用相對降低,,卻延長了受檢測人員的結果等待時間,,并可能造成HIV檢測范圍的縮小。
針對這種情況,,筆者研究設計出“HIV抗體聯(lián)合確證”技術,。這種技術是對篩查試驗HIV抗體呈陽性反應的樣本進行稀釋,通過與WB等確證試驗進行對比實驗研究,,確定當樣本稀釋多少(X)倍篩查試驗仍呈陽性反應時確診為艾滋病,,其假陽性率與WB等確證試驗的假陽性率相當。當獲得X值后,,在實際工作中,,將篩查試驗呈陽性反應的樣本稀釋X倍,然后用篩查試劑檢測,,若仍呈陽性反應便直接確診為艾滋?。蝗舫赎幮苑磻?,再用WB等確證試驗進行確證,。為使篩查試驗確證HIV抗體結果更加準確,亦可將樣本稀釋倍數(shù)提高到2~4X倍,。由于本法在HIV抗體較高濃度時用篩查試驗確證,,而在HIV抗體較低濃度時用WB等確證試驗確證,故稱其為“HIV抗體聯(lián)合確證”,。實驗證明,,該方法確保了HIV抗體聯(lián)合確證技術與傳統(tǒng)HIV抗體確證試驗假陽性率一致的極低效果。
干血棉球與HIV抗體聯(lián)合確證“兩項新技術”經評價后,,70%以上篩查試驗HIV抗體呈陽性反應的樣本,,可用費用較低的篩查試驗在24~48小時獲得確證結果?;鶎雍Y查室篩查出的70%以上HIV抗體呈陽性反應的樣本可在篩查室確證而不必送往確證室,。剩余30%以下的篩查試驗HIV抗體呈陽性反應而濃度較低不能確證的樣本,以及嬰幼兒早期診斷,、新發(fā)感染,、病毒載量、病毒耐藥性等樣本均可以通過郵寄干血棉球的方式運送至省,、市疾病預防控制中心檢測,。
應該說,,上述兩項成果的設計思路并不復雜,但如果能夠經過進一步深入研究加以驗證,,或許可為我們應對HIV病毒提供幫助,。
血液樣本運送須大動干戈
艾滋病的診斷,、疫情監(jiān)測、療效觀察等項目的檢測,,絕大多數(shù)是在我國市或省疾病預防控制中心進行的,。基層醫(yī)療衛(wèi)生單位篩查出的HIV抗體呈陽性反應的樣本,,須由2人或專車送至市或省疾控中心檢測,。由于用于HIV項目檢測的多為血液、血清、血漿等液體樣本且具有傳染性,,運輸過程中存在著包裝破損,、溢漏、滲出等潛在危險,,所以需要用密閉而堅固的包裝容器,。為防萬一,還須在內包裝周圍墊上緩沖吸水材料,;又由于血液樣本為液體并富含營養(yǎng),,微生物易于繁殖使其腐敗變質,因而需要冷藏,;再按有關規(guī)定進行3層包裝,。這樣,其包裝不僅復雜笨重,,也浪費了大量的人力,、物力與財力。
濾紙干血斑準確性難保證
為解決傳統(tǒng)方法在樣本保存,、運輸過程中的繁復,,美國食品和藥物管理局批準并推廣應用“濾紙干血斑技術(DBS)”。
濾紙干血斑技術是將受檢人員的血液樣本滴在濾紙上,,經干燥后即為“濾紙干血斑”,。化驗時,,將干血斑用打孔器從濾紙上取下,,放入試管等容器中,加入樣本提取液溶解提取一定時間,,然后取其中的液體進行HIV項目檢測,。該技術的優(yōu)點是將血液滴于濾紙上制成干血斑后,HIV樣本失去了感染性,,不易腐敗變質,,便于保存、運輸?shù)?。但在我國及盧旺達,、肯尼亞等國家的實際應用中,卻發(fā)現(xiàn)在制備干血斑的過程中會有約10%的合格樣本變成不合格,,從而導致漏診和誤診,。此外,濾紙干血斑樣本溶解洗脫時間須24~48小時,,且檢測時須提前準備,。
干血棉球易運輸結果準
受濾紙干血斑方法的啟發(fā),,筆者研究了新的方法——血棉球技術。該技術是將受檢人員的血液樣本滴在滅菌的醫(yī)用脫脂棉球上,,經干燥后,,即成為干血棉球樣本。
棉球載體形態(tài)為立體球狀,,柔軟蓬松,,吸水性極強,每克棉球可容納12克血液,,是濾紙的6倍,。所制成的干血棉球樣本載量可多可少,少至數(shù)微升,,多達數(shù)毫升,,可滿足艾滋病、性病等多種疾病項目的檢測與復檢要求,;干血棉球樣本溶解洗脫時間只需數(shù)十分鐘,,可當天隨時檢測。重要的是,,含100μl血液的干血棉球樣本用100μl提取液提取時,,可獲取約50μl原濃度血液樣本,用原濃度樣本檢測,,提高了檢測結果的準確性,。
干血棉球技術集合了液態(tài)血液樣本容量較大、檢測結果準確,,而濾紙干血斑樣本便于保存運輸,、病毒失去感染性的優(yōu)點,使二者的優(yōu)勢得到了完美的結合,。
聯(lián)合確證技術簡化確診流程
HIV抗體確證試驗也是艾滋病確診的關鍵環(huán)節(jié),。對于篩查試驗呈陽性反應的血液樣本,再用免疫印跡(WB)等方法做確證試驗,。只有當確證試驗陽性時,,才能確診為艾滋病。實驗時,,無論每次檢測樣本是1個還是10個,,同樣都需要一個檢測程序、1個陰性對照,、1個弱陽性對照和1個強陽性對照。因而檢測樣本數(shù)量越少,,平均每個樣本的檢測費用越高,。所以,,為收集較多數(shù)量的樣本,以降低確證試驗費用,,確證試驗多為每兩周檢測1次,。這樣,雖然確證試驗費用相對降低,,卻延長了受檢測人員的結果等待時間,,并可能造成HIV檢測范圍的縮小。
針對這種情況,,筆者研究設計出“HIV抗體聯(lián)合確證”技術,。這種技術是對篩查試驗HIV抗體呈陽性反應的樣本進行稀釋,通過與WB等確證試驗進行對比實驗研究,,確定當樣本稀釋多少(X)倍篩查試驗仍呈陽性反應時確診為艾滋病,,其假陽性率與WB等確證試驗的假陽性率相當。當獲得X值后,,在實際工作中,,將篩查試驗呈陽性反應的樣本稀釋X倍,然后用篩查試劑檢測,,若仍呈陽性反應便直接確診為艾滋?。蝗舫赎幮苑磻?,再用WB等確證試驗進行確證,。為使篩查試驗確證HIV抗體結果更加準確,亦可將樣本稀釋倍數(shù)提高到2~4X倍,。由于本法在HIV抗體較高濃度時用篩查試驗確證,,而在HIV抗體較低濃度時用WB等確證試驗確證,故稱其為“HIV抗體聯(lián)合確證”,。實驗證明,,該方法確保了HIV抗體聯(lián)合確證技術與傳統(tǒng)HIV抗體確證試驗假陽性率一致的極低效果。
干血棉球與HIV抗體聯(lián)合確證“兩項新技術”經評價后,,70%以上篩查試驗HIV抗體呈陽性反應的樣本,,可用費用較低的篩查試驗在24~48小時獲得確證結果?;鶎雍Y查室篩查出的70%以上HIV抗體呈陽性反應的樣本可在篩查室確證而不必送往確證室,。剩余30%以下的篩查試驗HIV抗體呈陽性反應而濃度較低不能確證的樣本,以及嬰幼兒早期診斷,、新發(fā)感染,、病毒載量、病毒耐藥性等樣本均可以通過郵寄干血棉球的方式運送至省,、市疾病預防控制中心檢測,。
應該說,,上述兩項成果的設計思路并不復雜,但如果能夠經過進一步深入研究加以驗證,,或許可為我們應對HIV病毒提供幫助,。