大量研究表明,無論是老年人群還是中青年人群,無論是患有心血管疾病人群還是健康人群,動(dòng)脈僵硬度都能很好地預(yù)測(cè)冠心病,、卒中等心腦血管事件,是心腦血管疾病獨(dú)立預(yù)測(cè)因子,已被歐洲高血壓指南列為常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目.年齡,、血壓水平和性別等重要影響因素只能部分解釋動(dòng)脈僵硬度變異性,提示可能有遺傳的影響.
大量研究表明過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisomeproliferator-activatedreceptor,PPAR)影響血糖、血脂代謝,并且有抗炎,、抗增殖等作用,PPAR基因部分單核昔酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphisms,SNP)位點(diǎn)不僅影響糖尿病的發(fā)生、發(fā)展,還能直接影響動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生,、發(fā)展,但PPAR基因是否影響動(dòng)脈僵硬度還未見報(bào)道.本研究旨在通過檢測(cè)PPAR及PPAR協(xié)同子等候選基因內(nèi)的部分SNP位點(diǎn),觀察其與動(dòng)脈僵硬度的關(guān)系.
資料與方法
1.對(duì)象:在2007年至2009年在北京地區(qū)進(jìn)行的旨在早期發(fā)現(xiàn)心血管疾病的流行病學(xué)調(diào)查人群基礎(chǔ)上[9],本研究篩選出完成了頸股段脈搏波傳導(dǎo)速度(carotid-femoralPWV,cfPWV)測(cè)定,并留取了血液樣本的50歲以上漢族居民1545例.惡性腫瘤,、精神病等患者除外.所有參與者簽署知情同意書.
由于基因分型時(shí)所有位點(diǎn)均成功的有1374例,為便于同步分析心血管危險(xiǎn)因素和遺傳因素對(duì)動(dòng)脈僵硬度的影響,本研究舍去了171例分型不夠理想的參與者.
2.動(dòng)脈僵硬度的測(cè)定:本研究使用法國(guó)Colson和LesLilas公司生產(chǎn)的Complior系統(tǒng),按照標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量方法檢測(cè)受試者cfPWV,以cfPWV作為金標(biāo)準(zhǔn)判斷動(dòng)脈僵硬度.按2007年歐洲高血壓防治指南,將cfPWV,12m/s定為動(dòng)脈僵硬度增高組,共530例,其中女性275例(占51.9%);cfPWV<12m/s為動(dòng)脈僵硬度正常組,共844例,其中女性511例(占60.5%).檢測(cè)時(shí),檢測(cè)人員不知道被檢測(cè)人員心血管危險(xiǎn)因素等情況.
3.主要試劑和儀器:TaqMan基因分型預(yù)混液(AppliedBiosystems公司,美國(guó)),基因分型探針(上海基康生物技術(shù)有限公司).ABI7900HT熒光實(shí)時(shí)定量PCR儀(AppliedBiosystems公司,美國(guó)).
4.DNA提取:按已建立的方法以Wizard⑧基因組DNA提取試劑盒(Promega公司,美國(guó))從凍存的血凝塊內(nèi)提取全基因組DNA,純化,、定量后置于一70℃冰箱中保存?zhèn)溆?
5.引物設(shè)計(jì)與合成:根據(jù)基因的目標(biāo)序列和所選擇的多態(tài)性位點(diǎn),利用SequenomMassARRAY)AssayDesign3.1軟件(Sequenom公司,美國(guó))設(shè)計(jì)PCR特異性擴(kuò)增引物和探針序列,由上?；瞪锛夹g(shù)有限公司負(fù)責(zé)引物和探針設(shè)計(jì)、合成(表1,2).
6.基因分型分析:向384孔板內(nèi)加人PCR擴(kuò)增體系及檢測(cè)探針使反應(yīng)物的終濃度如下:lxTaqMan基因分型預(yù)混液,各0.45mmol/L的PCR引物,0.25mmol/L的TaqManFam探針,0.25mmol/L的TaqManHex探針.總反應(yīng)體系為5.0閃.提取純化后的基因組DNA樣品定量稀釋至10ng/} 1,按設(shè)計(jì)順序每孔加2},1基因組DNAoPCR反應(yīng)條件為:50℃2min,95℃10min,然后95℃15s,60℃60s,循環(huán)40次.
7.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:正態(tài)分布計(jì)量資料用,.x士、表示,組間比較用獨(dú)立樣本,檢驗(yàn);偏態(tài)分布計(jì)量資料用中位數(shù)和四分位數(shù)表示,組間比較用Mann-Whitneyt7檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料用例數(shù)和百分率表T,組間比較用f檢驗(yàn).SNP分析使用JAVA版單體型關(guān)聯(lián)研究測(cè)試(testinghaplotypeeffectsinassociationstudies,THESIAS)程序 THESIA程序源于隨機(jī)期望最大化(stochasticexpectation-maximization,SEM)算法,優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)EM算法;Hardy-Weinherg平衡以標(biāo)準(zhǔn)X}擬合度檢驗(yàn)法計(jì)算’3其他數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析雙側(cè)檢驗(yàn),P<0.O5為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.
結(jié)果
1.研究人群的一般特征:動(dòng)脈僵硬度增高組(efPWV}12m/s)中有293例(55.30h)有高t(Il壓病史,115例(21.7%)有糖尿病史,女性275例(51.9%);而動(dòng)脈僵硬度正常組有257例有高I(11壓病史(30.5),93例(11.0%)有糖尿病,女性511例(60.5%),兩組間在年齡,、男性,、吸煙、高血壓,、糖尿病等心血,管危險(xiǎn)因素上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表3).
2.基因型頻率及Hardy-Weinherg平衡:PPARy協(xié)同子基因rs8192678,PPARB基因rs1053049,PPAI}.基因:s1800234等位l氛各自的等位基因頻率,、基因型頻率見表4ors8192678,rs1053049兩個(gè)位點(diǎn)在調(diào)杳人群中的分布符合Hardy-Weinberg平衡,但:s1800234不符合Hardy-Weinberg平衡.
3.SNP位點(diǎn)與動(dòng)脈僵硬度的關(guān)系:PPARy協(xié)同子基(}Irs8192678,PPARB基因rs1053049,PPARa基因rsl800234等3個(gè)位點(diǎn)其基因型在動(dòng)脈僵硬度止常和增高組中分布的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表5).
4.單體型的構(gòu)建與動(dòng)脈僵硬度的關(guān)系:由PPARy協(xié)同子基因rs8192678,PPARB基ICIrs1053049,PPAR.基[}}]rs1800234組成的單體型與動(dòng)脈f+}硬度無明確關(guān)系(表6).
討論
在本研究中僅發(fā)現(xiàn)年齡、男性,、吸煙,、高血壓、糖尿病,、同型半眺氨酸等心血管危險(xiǎn)因素在動(dòng)脈僵硬度增高組明顯聚集,并未發(fā)現(xiàn)PPAR及PPAR協(xié)同子基因上的SNP對(duì)動(dòng)脈僵硬度有直接的影響和動(dòng)脈粥樣硬化一樣,動(dòng)脈僵硬度受多種因素的影響各種心血管危險(xiǎn)因素可通過損傷血管內(nèi)皮導(dǎo)致動(dòng)脈內(nèi)中膜鈣化斑塊形成,、彈力纖維減少、膠原纖維增加,、血管平滑肌增生和肥厚,從而一導(dǎo)致血管僵硬度增高但年齡,、血壓等傳統(tǒng)心血管危險(xiǎn)因素只能部分解釋動(dòng)脈僵硬度變異,提不動(dòng)脈僵硬度可能還受遺傳因素影響,Tarnoki等〔is的研究也證實(shí)了這一點(diǎn)大量研究表明PPAR影響血糖、血脂代謝,并且有抗炎,、抗增殖等作用,因此我們推測(cè)PPAR基因可能對(duì)動(dòng)脈僵硬度有影響.另有研究發(fā)現(xiàn)PPAR基因能直接影響動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展,但PPAR基因是否影響動(dòng)脈僵硬度未見報(bào)道在本研究中未發(fā)現(xiàn)PPAR及PPAR協(xié)同子基因上的SNP對(duì)動(dòng)脈僵硬度有直接的影響.盡管如此,遺傳因素對(duì)動(dòng)脈僵硬度有確切影響是不爭(zhēng)的事實(shí),一二候選基因研究,、全基因組研究均發(fā)現(xiàn)位于腎素一血管緊張素一醛固酮系統(tǒng)、基質(zhì)金屬蛋白酶,、內(nèi)皮素及與炎癥相關(guān)的基因上多個(gè)SNP位點(diǎn)與動(dòng)脈僵硬度有密切關(guān)系[n7,較普遍的共識(shí)是遺傳因素對(duì)動(dòng)脈僵硬度變異的影響為20%一60%.由于本研究是陰性結(jié)果,不能進(jìn)一步分析環(huán)境和遺傳因素對(duì)動(dòng)脈僵硬度的交互作用.
本研究未發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果,其原因可能是多方面的.首先,所研究SNP位點(diǎn)可能并不是中國(guó)漢族人PPAR及PPAR協(xié)同子基因內(nèi)真正影響其功能的關(guān)鍵位點(diǎn).本研究所選取的位點(diǎn)rs1800234位于PPAR.亞單位,在外顯子6上,由于CST變異導(dǎo)致227號(hào)密碼子處擷氨酸替代丙氨酸(V227A),為非同義變異,有較高的潛在研究?jī)r(jià)值.但是,多態(tài)性位點(diǎn)的功能機(jī)制很復(fù)雜,在不同人種間的分布有差別,同一基因內(nèi)功能性位點(diǎn)可能也有差別.有很多研究發(fā)現(xiàn)那些處于非編碼區(qū)的SNP反而與某種疾病有很緊密的聯(lián)系〔19],至今不能準(zhǔn)確闡明其機(jī)制.這些不確定性,導(dǎo)致研究候選基因時(shí),特別是研究候選基因內(nèi)取較少的位點(diǎn)時(shí),容易出現(xiàn)陰性結(jié)果.
其次,對(duì)心血管危險(xiǎn)因素有影響的基因未必直接影響心血管疾病.動(dòng)脈粥樣硬化性疾病被認(rèn)為是高血壓,、高脂血癥、吸煙等各種危險(xiǎn)因素導(dǎo)致的一種炎性疾病[20].但是,被寄予厚望的與炎癥因子相關(guān)的候選基因高敏C反應(yīng)蛋白基因,在大樣本,、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难芯恐幸仓话l(fā)現(xiàn)其僅對(duì)高敏C反應(yīng)蛋白濃度有影響,而對(duì)心血管疾病沒有直接的影響.一些針對(duì)動(dòng)脈硬化的研究也發(fā)現(xiàn),部分參與動(dòng)脈粥樣硬化的炎癥因子也參與了動(dòng)脈硬化,但這些與炎癥因子相關(guān)的基因是否參與了動(dòng)脈硬化還需要進(jìn)一步研究[23].
另外,雖然大量的流行病學(xué)研究提示遺傳因素在心血管疾病的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮了非常重要的作用「24],但除2007年用全基因組篩查的方法發(fā)現(xiàn)的rs10757274,rs2383206,rs2383207,rs10757278等少數(shù)幾個(gè)SNP位點(diǎn)在十幾個(gè)國(guó)家得到了驗(yàn)證匯,大部分基因研究的結(jié)果常不能被重復(fù)}.究其原因,既有單個(gè)研究結(jié)果的假陽(yáng)(陰)性,或是真實(shí)的差異造成,更重要的是基因?qū)膊∫赘行杂绊懙膹?fù)雜性.單個(gè)研究的假陽(yáng)(陰)性結(jié)果可能由單個(gè)研究的樣本量不足,、人群分層、基因型或表型的錯(cuò)分以及不適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法等引起,而真實(shí)的差異多是由易感基因頻率不同,與疾病關(guān)聯(lián)特征不同,或是基因與環(huán)境間的復(fù)雜交互作用導(dǎo)致.
由于本研究為針對(duì)候選基因的研究,能選取的SNP位點(diǎn)數(shù)量有限,又沒有對(duì)PPAR及PPAR協(xié)同子進(jìn)行全基因序列檢測(cè),勢(shì)必會(huì)漏掉一些SNP位點(diǎn)在這些沒有檢測(cè)的SNP位點(diǎn)中,是否有對(duì)動(dòng)脈僵硬度有明顯影響的SNP位點(diǎn),本研究不能回答.若使用全基因組測(cè)序的方法,可能會(huì)有陽(yáng)性發(fā)現(xiàn),但所需經(jīng)費(fèi)會(huì)明顯增加.另外,本研究為橫斷面研究,結(jié)論尚需臨床前瞻性研究進(jìn)一步證實(shí).
綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈僵硬度增高組與正常組相比,心血管危險(xiǎn)因素明顯增多,但并未發(fā)現(xiàn)PPAR及PPAR協(xié)同子基因上的SNP對(duì)動(dòng)脈僵硬度有直接的影響.
大量研究表明過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisomeproliferator-activatedreceptor,PPAR)影響血糖、血脂代謝,并且有抗炎,、抗增殖等作用,PPAR基因部分單核昔酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphisms,SNP)位點(diǎn)不僅影響糖尿病的發(fā)生、發(fā)展,還能直接影響動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生,、發(fā)展,但PPAR基因是否影響動(dòng)脈僵硬度還未見報(bào)道.本研究旨在通過檢測(cè)PPAR及PPAR協(xié)同子等候選基因內(nèi)的部分SNP位點(diǎn),觀察其與動(dòng)脈僵硬度的關(guān)系.
資料與方法
1.對(duì)象:在2007年至2009年在北京地區(qū)進(jìn)行的旨在早期發(fā)現(xiàn)心血管疾病的流行病學(xué)調(diào)查人群基礎(chǔ)上[9],本研究篩選出完成了頸股段脈搏波傳導(dǎo)速度(carotid-femoralPWV,cfPWV)測(cè)定,并留取了血液樣本的50歲以上漢族居民1545例.惡性腫瘤,、精神病等患者除外.所有參與者簽署知情同意書.
由于基因分型時(shí)所有位點(diǎn)均成功的有1374例,為便于同步分析心血管危險(xiǎn)因素和遺傳因素對(duì)動(dòng)脈僵硬度的影響,本研究舍去了171例分型不夠理想的參與者.
2.動(dòng)脈僵硬度的測(cè)定:本研究使用法國(guó)Colson和LesLilas公司生產(chǎn)的Complior系統(tǒng),按照標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量方法檢測(cè)受試者cfPWV,以cfPWV作為金標(biāo)準(zhǔn)判斷動(dòng)脈僵硬度.按2007年歐洲高血壓防治指南,將cfPWV,12m/s定為動(dòng)脈僵硬度增高組,共530例,其中女性275例(占51.9%);cfPWV<12m/s為動(dòng)脈僵硬度正常組,共844例,其中女性511例(占60.5%).檢測(cè)時(shí),檢測(cè)人員不知道被檢測(cè)人員心血管危險(xiǎn)因素等情況.
3.主要試劑和儀器:TaqMan基因分型預(yù)混液(AppliedBiosystems公司,美國(guó)),基因分型探針(上海基康生物技術(shù)有限公司).ABI7900HT熒光實(shí)時(shí)定量PCR儀(AppliedBiosystems公司,美國(guó)).
4.DNA提取:按已建立的方法以Wizard⑧基因組DNA提取試劑盒(Promega公司,美國(guó))從凍存的血凝塊內(nèi)提取全基因組DNA,純化,、定量后置于一70℃冰箱中保存?zhèn)溆?
5.引物設(shè)計(jì)與合成:根據(jù)基因的目標(biāo)序列和所選擇的多態(tài)性位點(diǎn),利用SequenomMassARRAY)AssayDesign3.1軟件(Sequenom公司,美國(guó))設(shè)計(jì)PCR特異性擴(kuò)增引物和探針序列,由上?；瞪锛夹g(shù)有限公司負(fù)責(zé)引物和探針設(shè)計(jì)、合成(表1,2).
6.基因分型分析:向384孔板內(nèi)加人PCR擴(kuò)增體系及檢測(cè)探針使反應(yīng)物的終濃度如下:lxTaqMan基因分型預(yù)混液,各0.45mmol/L的PCR引物,0.25mmol/L的TaqManFam探針,0.25mmol/L的TaqManHex探針.總反應(yīng)體系為5.0閃.提取純化后的基因組DNA樣品定量稀釋至10ng/} 1,按設(shè)計(jì)順序每孔加2},1基因組DNAoPCR反應(yīng)條件為:50℃2min,95℃10min,然后95℃15s,60℃60s,循環(huán)40次.
7.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:正態(tài)分布計(jì)量資料用,.x士、表示,組間比較用獨(dú)立樣本,檢驗(yàn);偏態(tài)分布計(jì)量資料用中位數(shù)和四分位數(shù)表示,組間比較用Mann-Whitneyt7檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料用例數(shù)和百分率表T,組間比較用f檢驗(yàn).SNP分析使用JAVA版單體型關(guān)聯(lián)研究測(cè)試(testinghaplotypeeffectsinassociationstudies,THESIAS)程序 THESIA程序源于隨機(jī)期望最大化(stochasticexpectation-maximization,SEM)算法,優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)EM算法;Hardy-Weinherg平衡以標(biāo)準(zhǔn)X}擬合度檢驗(yàn)法計(jì)算’3其他數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析雙側(cè)檢驗(yàn),P<0.O5為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.
結(jié)果
1.研究人群的一般特征:動(dòng)脈僵硬度增高組(efPWV}12m/s)中有293例(55.30h)有高t(Il壓病史,115例(21.7%)有糖尿病史,女性275例(51.9%);而動(dòng)脈僵硬度正常組有257例有高I(11壓病史(30.5),93例(11.0%)有糖尿病,女性511例(60.5%),兩組間在年齡,、男性,、吸煙、高血壓,、糖尿病等心血,管危險(xiǎn)因素上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表3).
2.基因型頻率及Hardy-Weinherg平衡:PPARy協(xié)同子基因rs8192678,PPARB基因rs1053049,PPAI}.基因:s1800234等位l氛各自的等位基因頻率,、基因型頻率見表4ors8192678,rs1053049兩個(gè)位點(diǎn)在調(diào)杳人群中的分布符合Hardy-Weinberg平衡,但:s1800234不符合Hardy-Weinberg平衡.
3.SNP位點(diǎn)與動(dòng)脈僵硬度的關(guān)系:PPARy協(xié)同子基(}Irs8192678,PPARB基因rs1053049,PPARa基因rsl800234等3個(gè)位點(diǎn)其基因型在動(dòng)脈僵硬度止常和增高組中分布的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表5).
4.單體型的構(gòu)建與動(dòng)脈僵硬度的關(guān)系:由PPARy協(xié)同子基因rs8192678,PPARB基ICIrs1053049,PPAR.基[}}]rs1800234組成的單體型與動(dòng)脈f+}硬度無明確關(guān)系(表6).
討論
在本研究中僅發(fā)現(xiàn)年齡、男性,、吸煙,、高血壓、糖尿病,、同型半眺氨酸等心血管危險(xiǎn)因素在動(dòng)脈僵硬度增高組明顯聚集,并未發(fā)現(xiàn)PPAR及PPAR協(xié)同子基因上的SNP對(duì)動(dòng)脈僵硬度有直接的影響和動(dòng)脈粥樣硬化一樣,動(dòng)脈僵硬度受多種因素的影響各種心血管危險(xiǎn)因素可通過損傷血管內(nèi)皮導(dǎo)致動(dòng)脈內(nèi)中膜鈣化斑塊形成,、彈力纖維減少、膠原纖維增加,、血管平滑肌增生和肥厚,從而一導(dǎo)致血管僵硬度增高但年齡,、血壓等傳統(tǒng)心血管危險(xiǎn)因素只能部分解釋動(dòng)脈僵硬度變異,提不動(dòng)脈僵硬度可能還受遺傳因素影響,Tarnoki等〔is的研究也證實(shí)了這一點(diǎn)大量研究表明PPAR影響血糖、血脂代謝,并且有抗炎,、抗增殖等作用,因此我們推測(cè)PPAR基因可能對(duì)動(dòng)脈僵硬度有影響.另有研究發(fā)現(xiàn)PPAR基因能直接影響動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展,但PPAR基因是否影響動(dòng)脈僵硬度未見報(bào)道在本研究中未發(fā)現(xiàn)PPAR及PPAR協(xié)同子基因上的SNP對(duì)動(dòng)脈僵硬度有直接的影響.盡管如此,遺傳因素對(duì)動(dòng)脈僵硬度有確切影響是不爭(zhēng)的事實(shí),一二候選基因研究,、全基因組研究均發(fā)現(xiàn)位于腎素一血管緊張素一醛固酮系統(tǒng)、基質(zhì)金屬蛋白酶,、內(nèi)皮素及與炎癥相關(guān)的基因上多個(gè)SNP位點(diǎn)與動(dòng)脈僵硬度有密切關(guān)系[n7,較普遍的共識(shí)是遺傳因素對(duì)動(dòng)脈僵硬度變異的影響為20%一60%.由于本研究是陰性結(jié)果,不能進(jìn)一步分析環(huán)境和遺傳因素對(duì)動(dòng)脈僵硬度的交互作用.
本研究未發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果,其原因可能是多方面的.首先,所研究SNP位點(diǎn)可能并不是中國(guó)漢族人PPAR及PPAR協(xié)同子基因內(nèi)真正影響其功能的關(guān)鍵位點(diǎn).本研究所選取的位點(diǎn)rs1800234位于PPAR.亞單位,在外顯子6上,由于CST變異導(dǎo)致227號(hào)密碼子處擷氨酸替代丙氨酸(V227A),為非同義變異,有較高的潛在研究?jī)r(jià)值.但是,多態(tài)性位點(diǎn)的功能機(jī)制很復(fù)雜,在不同人種間的分布有差別,同一基因內(nèi)功能性位點(diǎn)可能也有差別.有很多研究發(fā)現(xiàn)那些處于非編碼區(qū)的SNP反而與某種疾病有很緊密的聯(lián)系〔19],至今不能準(zhǔn)確闡明其機(jī)制.這些不確定性,導(dǎo)致研究候選基因時(shí),特別是研究候選基因內(nèi)取較少的位點(diǎn)時(shí),容易出現(xiàn)陰性結(jié)果.
其次,對(duì)心血管危險(xiǎn)因素有影響的基因未必直接影響心血管疾病.動(dòng)脈粥樣硬化性疾病被認(rèn)為是高血壓,、高脂血癥、吸煙等各種危險(xiǎn)因素導(dǎo)致的一種炎性疾病[20].但是,被寄予厚望的與炎癥因子相關(guān)的候選基因高敏C反應(yīng)蛋白基因,在大樣本,、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难芯恐幸仓话l(fā)現(xiàn)其僅對(duì)高敏C反應(yīng)蛋白濃度有影響,而對(duì)心血管疾病沒有直接的影響.一些針對(duì)動(dòng)脈硬化的研究也發(fā)現(xiàn),部分參與動(dòng)脈粥樣硬化的炎癥因子也參與了動(dòng)脈硬化,但這些與炎癥因子相關(guān)的基因是否參與了動(dòng)脈硬化還需要進(jìn)一步研究[23].
另外,雖然大量的流行病學(xué)研究提示遺傳因素在心血管疾病的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮了非常重要的作用「24],但除2007年用全基因組篩查的方法發(fā)現(xiàn)的rs10757274,rs2383206,rs2383207,rs10757278等少數(shù)幾個(gè)SNP位點(diǎn)在十幾個(gè)國(guó)家得到了驗(yàn)證匯,大部分基因研究的結(jié)果常不能被重復(fù)}.究其原因,既有單個(gè)研究結(jié)果的假陽(yáng)(陰)性,或是真實(shí)的差異造成,更重要的是基因?qū)膊∫赘行杂绊懙膹?fù)雜性.單個(gè)研究的假陽(yáng)(陰)性結(jié)果可能由單個(gè)研究的樣本量不足,、人群分層、基因型或表型的錯(cuò)分以及不適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法等引起,而真實(shí)的差異多是由易感基因頻率不同,與疾病關(guān)聯(lián)特征不同,或是基因與環(huán)境間的復(fù)雜交互作用導(dǎo)致.
由于本研究為針對(duì)候選基因的研究,能選取的SNP位點(diǎn)數(shù)量有限,又沒有對(duì)PPAR及PPAR協(xié)同子進(jìn)行全基因序列檢測(cè),勢(shì)必會(huì)漏掉一些SNP位點(diǎn)在這些沒有檢測(cè)的SNP位點(diǎn)中,是否有對(duì)動(dòng)脈僵硬度有明顯影響的SNP位點(diǎn),本研究不能回答.若使用全基因組測(cè)序的方法,可能會(huì)有陽(yáng)性發(fā)現(xiàn),但所需經(jīng)費(fèi)會(huì)明顯增加.另外,本研究為橫斷面研究,結(jié)論尚需臨床前瞻性研究進(jìn)一步證實(shí).
綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈僵硬度增高組與正常組相比,心血管危險(xiǎn)因素明顯增多,但并未發(fā)現(xiàn)PPAR及PPAR協(xié)同子基因上的SNP對(duì)動(dòng)脈僵硬度有直接的影響.
