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菌 物 學(xué) 報(bào) 15 March 2008, 27(2): 171-176
ISSN1672-6472 CN11-5180Q
2008 Institute of Microbiology, CAS, all rights reserved.
基金項(xiàng)目：2001年國家科技攻關(guān)計(jì)劃引導(dǎo)項(xiàng)目（No. 2001BA744C）,；浙江省自然科學(xué)基金（No. Y304071）
*Corresponding author. Tel: 0571-86971710; E-mail: [email protected]
收稿日期：2007-05-10，接受日期：2007-07-09
1浙江大學(xué)生物技術(shù)研究所 杭州 310029
2西北農(nóng)林科技大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院 楊凌 712100
摘 要：鐵皮石斛疫病2001年發(fā)現(xiàn)在浙江義烏栽培田間,，是由疫霉菌引起的,。在田間，疫霉菌侵染莖基部,，引起當(dāng)年移植苗根腐,、植株枯萎和死亡，但侵染2-3年植株幼嫩頂部僅引起頂枯癥狀,。通過對病原菌形態(tài)學(xué),、交配型的觀察，以及核糖體DNA ITS序列分析,，侵染鐵皮石斛的5個(gè)分離菌株被鑒定為煙草疫霉菌 Phytophthora nicotianae,。致病性試驗(yàn)表明,，鐵皮石斛是煙草疫霉菌的寄主,。
關(guān)鍵詞：卵菌，鑒定,，煙草疫霉菌
The causal agent of Dendrobium candidum blight disease
LI Jing1 ZHANG Jing-Ze1* WU Xiao-Peng1 SHAN Wei-Xing2 XU Tong1
1Biotechnology Institute, Zhejiang University, Hangzhou 310029, China
2College of Plant Protection, Northwest Agriculture & Forestry University, Yangling 712100, China
Abstract：Dendrobium candidum blight caused by Phytophthora species was found for the first time in cultivated field in Yiwu city, Zhejiang province of China in 2001. One-year-old infected transplanting seedlings demonstrate typical symptoms of Phytophthora root rot, wilting and death,，whereas 2- to 3-year-old infected plants only have die-back symptoms with almost no root and basal stem rot. Morphological observation, mating types and DNA sequences analyses proved that five isolates of the causal agent were all P. nicotianae. Pathogenicity tests confirmed that D. candidum is a natural host of P. nicotianae.
Key words: Oomycota, identification, Phytophthora nicotianae
鐵皮石斛Dendrobium candidum Wall. ex Lindl.是傳統(tǒng)的中藥材，也作為保健品的原料,，有巨大的市場需求和重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值,。由于近年來過度挖掘，目前野生資源已瀕臨枯竭,，人工栽培鐵皮石斛已越來越受到重視,。浙江省在義烏、天臺(tái),、富陽,、臨安、紹興和蕭山等地相繼建立了具有一定栽培規(guī)模的石斛生產(chǎn)基地,。然而,，在人工栽培條件下,，鐵皮石斛經(jīng)常受到真菌病害的危害（張敬澤和鄭小軍 2004）。自從2001年來,，鐵皮石斛疫病在浙江義烏等地不同苗齡上發(fā)生,，病原菌引起根腐、莖基部腐和頂枯等癥狀,。
鐵皮石斛疫病是一種毀滅性的病害,，石斛栽培田間一旦發(fā)生，常造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,。然而,，在自然條件下絕沒有觀察到石斛疫病的發(fā)生。本文主要報(bào)道石斛疫病在人工栽培條件下的發(fā)生情況以及其病原菌的鑒定結(jié)果,。
1材料和方法
1.1病害的調(diào)查
鐵皮石斛疫病的調(diào)查是義烏石斛研究所進(jìn)行的,。調(diào)查分為普查和定點(diǎn)觀察。普查主要對不同地點(diǎn),、不同苗齡,、不同環(huán)境條件和不同年份疫病發(fā)生情況進(jìn)行系統(tǒng)觀察。定點(diǎn)觀察選擇在疫病發(fā)生過的田塊中進(jìn)行,。每年在病害發(fā)生季節(jié)觀察病害發(fā)生,、發(fā)展和癥狀的變化。
1.2 病原菌的分離和保藏
選擇性培養(yǎng)基的制備：用玉米粉培養(yǎng)基（corn meal agar,，CMA）作為基本培養(yǎng)基,，在滅菌冷卻到約45℃后，每升培養(yǎng)基加入匹馬菌素（pimaricin）5mg,、氨比西林（ampicillin） 250mg,、利福霉素（rifampicin）10mg、五氯硝基苯（pentachloronitrobenzene）125mg和惡霉靈（hymexazol）50mg,，搖勻后倒平皿,，制備成選擇性培養(yǎng)基。
從田間采集有典型疫病癥狀的根,、莖和葉用于病原菌的分離,。將供試樣品用自來水沖洗干凈后，在室內(nèi)晾干,。從發(fā)病部位的病健交界處切取5mm × 5mm的組織塊,，將組織塊移到含選擇性培養(yǎng)基的平皿中，在25℃黑暗條件下培養(yǎng),。待長出菌落后,，通過挑取菌絲尖端方法對分離的病原菌進(jìn)行純化。純化后的病原菌，保存在含液體石蠟的PDA斜面試管中（室溫）,。
