微生物學(xué)報(bào)Acta Microbiologica Sinica

48(5)：602~607;4 May 2008

球形芽胞桿菌C3-41磷酸果糖激酶的克隆,、表達(dá)及基本生物活性

韓蓓1,2,蔡亞君1,胡曉敏1,袁志明1*

(1中國科學(xué)院武漢病毒研究所,武漢430071)
(2西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院,西安710061)

基金項(xiàng)目:中國科學(xué)院前沿方向性項(xiàng)目(950121)

*通訊作者,。Tel:+86-27-97198195;Fax:+86-27-87198120;E-mail:[email protected]

作者簡介:韓蓓(1980?),女,陜西渭南人,講師,博士,主要從事微生物分子生物學(xué)研究,。E-mail:[email protected]

摘要：

【目的】球形芽孢桿菌缺乏EMP,、HMP,、ED途徑的關(guān)鍵酶,，如磷酸果糖激酶等被認(rèn)為是其不能以糖類物質(zhì)進(jìn)行生長的主要原因,。殺蚊球形芽孢桿菌C3-41全基因組序列分析表明,，在染色體DNA上存在的磷酸果糖激酶基因pfk，為了進(jìn)一步分析球形芽孢桿菌糖酵解途徑,，進(jìn)一步確定磷酸果糖激酶在糖酵解途徑中的功能,。

【方法】通過pfk基因在球形芽孢桿菌菌株中的Southern-blot拷貝數(shù)鑒定，在C3-41 pfk基因克隆的基礎(chǔ)上進(jìn)行pfk基因在大腸桿菌中的融合表達(dá),、序列分析和序列比對等方法進(jìn)行研究,。

【結(jié)果】證明了球形芽孢桿菌pfk基因由960 bp核苷酸組成，表達(dá)42 kDa的PFK融合蛋白,，有保守的底物結(jié)合域和ATP結(jié)合域,，同時pfk基因重組表達(dá)質(zhì)粒可以回復(fù)大腸桿菌pfk缺陷型菌株DF1020代謝糖的能力。

【結(jié)論】殺蚊球形芽孢桿菌C3-41的pfk表達(dá)產(chǎn)物具有磷酸果糖激酶活性,，為今后深入研究球形芽孢桿菌產(chǎn)能代謝機(jī)理奠定了基礎(chǔ),。

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