微生物學報Acta Microbiologica Sinica

48(5)：602~607;4 May 2008

球形芽胞桿菌C3-41磷酸果糖激酶的克隆,、表達及基本生物活性

韓蓓1,2,蔡亞君1,胡曉敏1,袁志明1*

(1中國科學院武漢病毒研究所,武漢430071)
(2西安交通大學醫(yī)學院,西安710061)

基金項目:中國科學院前沿方向性項目(950121)

*通訊作者。Tel:+86-27-97198195;Fax:+86-27-87198120;E-mail:[email protected]

作者簡介:韓蓓(1980?),女,陜西渭南人,講師,博士,主要從事微生物分子生物學研究,。E-mail:[email protected]

摘要：

【目的】球形芽孢桿菌缺乏EMP,、HMP、ED途徑的關(guān)鍵酶,，如磷酸果糖激酶等被認為是其不能以糖類物質(zhì)進行生長的主要原因,。殺蚊球形芽孢桿菌C3-41全基因組序列分析表明，在染色體DNA上存在的磷酸果糖激酶基因pfk,，為了進一步分析球形芽孢桿菌糖酵解途徑,，進一步確定磷酸果糖激酶在糖酵解途徑中的功能。

【方法】通過pfk基因在球形芽孢桿菌菌株中的Southern-blot拷貝數(shù)鑒定,，在C3-41 pfk基因克隆的基礎(chǔ)上進行pfk基因在大腸桿菌中的融合表達,、序列分析和序列比對等方法進行研究。

【結(jié)果】證明了球形芽孢桿菌pfk基因由960 bp核苷酸組成,，表達42 kDa的PFK融合蛋白,，有保守的底物結(jié)合域和ATP結(jié)合域，同時pfk基因重組表達質(zhì)?？梢曰貜痛竽c桿菌pfk缺陷型菌株DF1020代謝糖的能力,。

【結(jié)論】殺蚊球形芽孢桿菌C3-41的pfk表達產(chǎn)物具有磷酸果糖激酶活性，為今后深入研究球形芽孢桿菌產(chǎn)能代謝機理奠定了基礎(chǔ),。

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