微生物學報Acta Microbiologica Sinica

48(5)：589~595;4 May 2008

一株產(chǎn)紫杉醇羅漢松內(nèi)生真菌的分離和鑒定

孫端方1,冉雪琴1,王嘉福1,2*

(1貴州大學動物科學學院,2農(nóng)業(yè)生物工程省級重點實驗室,貴陽550025)

摘要：

【目的】紫杉醇是重要的抗癌藥物，主要從羅漢松等植物中提取,，為了保護羅漢松等種質(zhì)資源,，本文從羅漢松植株中分離產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌，并對內(nèi)生真菌所產(chǎn)紫杉醇的抗腫瘤活性進行了分析,。

【方法】采用組織塊法自羅漢松的根,、莖、葉等組織中分離內(nèi)生真菌,；通過四唑藍（Methyl Thiazolyl Tetrazolium,MTT）比色法篩選有抗腫瘤活性的內(nèi)生真菌菌株,，通過薄層層析（Thin Layer Chromatography,TLC）和高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography,HPLC）對內(nèi)生真菌所產(chǎn)活性物質(zhì)進行鑒定；采用抽提法抽提內(nèi)生真菌所產(chǎn)紫杉醇,，應用Vero細胞對抽提的紫杉醇的活性進行了分析,。

【結果】從羅漢松屬（Podocrapus）植物中分離到155株內(nèi)生真菌，其中28株內(nèi)生真菌具有較高的抑癌活性,。將其中一株菌株A2命名為EPTP-1,，經(jīng)形態(tài)學和分子分類學分析鑒定為

煙曲霉（Aspergillus fumigatus）,。菌株EPTP-1中抽提的紫杉醇5.553μg/L~555.3μg/L作用24h表現(xiàn)出明顯的致細胞凋亡作用。菌株EPTP-1發(fā)酵5天時紫杉醇的產(chǎn)率為0.5578±0.0294 mg/L,。

【結論】從羅漢松中分離到了一株產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌EPTP-1,，可作為紫杉醇類藥物工業(yè)化生產(chǎn)的候選菌株。

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