微生物學(xué)報(bào)Acta Microbiologica Sinica 48(10)：1330~1338; 4 October 2008
煙曲霉蛋白質(zhì)分泌載體的構(gòu)建及酸性磷酸酯酶的細(xì)胞定位
陳曉敏,，歐陽浩淼，唐國敏,，王敖全,，金城*
（中國科學(xué)院微生物研究所微生物資源國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100101）
摘要：【目的】在酵母細(xì)胞中蛋白質(zhì)的糖基磷酸肌醇化（GPI）修飾是將GPI定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞壁的信號(hào),。目前已對(duì)酵母GPI蛋白的細(xì)胞定位信號(hào)有一定了解,，但對(duì)絲狀真菌GPI蛋白的定位則了解甚少。AfPhoA是絲狀真菌煙曲霉（Aspergillus fumigatus）的酸性磷酸酯酶,，是GPI修飾的蛋白,。該蛋白首先分離自細(xì)胞膜，隨后又發(fā)現(xiàn)該蛋白與細(xì)胞壁結(jié)合,。分析其C-端序列也未發(fā)現(xiàn)已知的定位信號(hào),，因此目前還不能確定其細(xì)胞定位?！痉椒ā课覀円跃G色熒光蛋白（GFP）作為報(bào)告分子,，將AfPhoA的C-端序列與GFP的C-端融合后檢測融合GFP的細(xì)胞定位?！窘Y(jié)果】我們用煙曲霉幾丁質(zhì)酶AfChiB1的啟動(dòng)子和N-端信號(hào)肽構(gòu)建了可在煙曲霉中分泌表達(dá)GFP的表達(dá)載體pchiGFP,。在此基礎(chǔ)上將AfPhoA的C-端與GFP融合，融合質(zhì)粒與pCDA14共轉(zhuǎn)化煙曲霉后篩選到一株轉(zhuǎn)化子,。該轉(zhuǎn)化子可表達(dá)融合GFP,，在誘導(dǎo)和非誘導(dǎo)條件下，融合GFP均主要分布在細(xì)胞膜上,，隨培養(yǎng)時(shí)間的延長,，融合GFP在細(xì)胞壁上也有少量分布；在培養(yǎng)上清液中只能檢出約30KD的GFP融合蛋白,，而沒有完整的GFP融合蛋白,，推測為從GPI錨上水解釋放的?！窘Y(jié)論】我們的研究結(jié)果表明,，AfPhoA蛋白GPI修飾的作用是使該蛋白定位于細(xì)胞膜。本研究不僅初步確定了AfPhoA蛋白GPI修飾的細(xì)胞膜定位功能,，而且為煙曲霉基因與蛋白質(zhì)功能的研究建立了一個(gè)有效表達(dá)系統(tǒng),。
關(guān)鍵詞：煙曲霉,；信號(hào)；GPI錨,；蛋白定位
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