(二)分離液
1,、肌細(xì)胞分離液
配方一 馬克凱郎(Maccallum)液
取1份濃硝酸、2份甘油,、3份水,,混合后就得到馬克凱郎液。
把新鮮的肌肉組織小塊(橫紋肌,、心肌和平滑?。┩度脒@種溶液里浸漬,分離時(shí)間需1~3日,。這種溶液尤其適于分離橫紋肌核心肌細(xì)胞,。
配方二 氫氧化鉀溶液
取35克氫氧化鉀,放在100毫升蒸餾水中,,加熱,,使它完全溶解后,在室溫下冷卻,。
把新鮮的肌肉組織塊投入氫氧化鉀溶液中,,浸泡15~30分鐘后,肌細(xì)胞便可分離,。
2,、上皮細(xì)胞分離液
配方一 福爾馬林-氯化鉀溶液
稱取58.44克氯化鈉,用蒸餾水溶解,,再稀釋到1000毫升,,加入2毫升福爾馬林,。
這種溶液是很好的上皮細(xì)胞分離液,,分離很迅速,而且能保護(hù)纖細(xì)的上皮細(xì)胞纖毛,。小腸和氣管的上皮組織小塊,,放在此溶液里2小時(shí)即可分離,口腔和皮膚上皮組織小塊的細(xì)胞分離一般需3日左右,。
配方二 水和氯醛溶液
稱取5克水和氯醛,,用蒸餾水溶解,再稀釋到100毫升,,就得到5%水合氯醛溶液,。
從洗凈的動(dòng)物胃、腸和口腔內(nèi)壁上取下上皮組織一小塊,,投入以上溶液中,,浸泡24~48小時(shí)。
3、神經(jīng)細(xì)胞分離液
配方一 可以用上皮細(xì)胞分離液配方一福爾馬林-氯化鈉溶液來分離神經(jīng)細(xì)胞(見2),。
配方二 硼酸生理鹽水溶液
在生理鹽水溶液內(nèi)加入一些硼酸,,攪拌到不再溶解時(shí)為止,使成為飽和溶液,。
把脊椎灰質(zhì)和腦皮質(zhì)部位的神經(jīng)組織一小塊投入這種溶液中分離,。
4、植物莖細(xì)胞分離液
杰弗里氏(Jeffrey's)液
取等量的10%鉻酸溶液和10%硝酸溶液混合,,成鉻酸-硝酸溶液,。
這種溶液用來分離木本植物莖部的導(dǎo)管、管胞,、篩管,、伴胞和韌皮纖維等。把材料切成小塊放在水里,,加熱煮沸,,冷卻后再加熱煮沸。這樣重復(fù)幾次,,到材料全部沉于水底后,,投入分離液內(nèi),分離時(shí)間是24~48小時(shí),。
5,、植物根尖細(xì)胞分離液
配方一 鹽酸-酒精溶液
在1份95%酒精中慢慢的加入1份濃鹽酸,即成鹽酸-酒精溶液,,裝瓶密閉保存,。
把植物根尖部位截下一小段,投入以上溶液中分離,。
配方二 4%鹽酸溶液
配制4%鹽酸溶液,。
截下植物根尖部位,投入盛有4%鹽酸溶液的小燒杯內(nèi),,在60攝氏度溫水中隔水溫?zé)?~2分鐘,,使根尖軟而不酥,這時(shí)分離效果最好,。
6,、植物纖維分離液
取10克氫氧化鈉(或氫氧化鉀),溶解在90毫升水里,,制成10%氫氧化鈉(或氫氧化鉀)溶液,,放在瓶里密閉保存。
把植物莖縱切成細(xì)條,,剪成小段后,,投入分離液內(nèi),。
7、植物細(xì)胞質(zhì)壁分離液
配方一 30%蔗糖溶液
取30克蔗糖,,溶解在70毫升蒸餾水里,,裝瓶備用。
配方二 5%氯化鈉溶液
取5克食鹽,,溶解在95毫升蒸餾水里,,裝瓶備用。
配方三 5%硝酸鉀溶液
取5克硝酸鉀,,溶解在95毫升蒸餾水里,,裝瓶備用。
(三)生理鹽水
配方一 各種動(dòng)物需用的生理鹽水
哺乳類 需用生理鹽水濃度是0.9%,。稱取0.9克氯化鈉,,溶解在少量蒸餾水中,稀釋到100毫升,。
鳥類 需用的生理鹽水濃度是0.75%,。稱取0.75克氯化鈉,溶解后用蒸餾水稀釋到100毫升,。
兩棲類 需用的生理鹽水濃度是0.65%,。稱取0.65克氯化鈉,溶解后用蒸餾水稀釋到100毫升,。
配方二 任氏(Ringer's)生理鹽水
氯化鈉 6.5克 碳酸氫鈉 0.2克
氯化鉀 0.14克 磷酸二氫鈉 0.01克
氯化鈣 0.12克
先把氯化鈉,、氯化鉀、碳酸氫鈉,、磷酸二氫鈉分別溶解在少量蒸餾水中,,混合后用蒸餾水稀釋到980毫升。然后取氯化鈣溶解在20毫升蒸餾水中,,把氯化鈣溶液逐滴加入到上述溶液內(nèi),,邊滴、邊攪拌,,以免產(chǎn)生不溶解的磷酸鈣沉淀,。
此溶液用于變溫動(dòng)物,,尤其常用于兩棲類,。
配方三 樂氏(Locke's)生理鹽水
氯化鈉 9.0克 碳酸氫鈉 0.1~0.3克
氯化鉀 0.42克 氯化鈣 0.24克
把氯化鈉、氯化鉀,、碳酸氫鈉分別用少量蒸餾水溶解,,混合后加蒸餾水到980毫升。把氯化鈣溶解在20毫升蒸餾水里,,逐滴加入上述溶液中,。
以上溶液用于恒溫動(dòng)物,,尤其常用于哺乳類。
(四)培養(yǎng)液
1,、人造海水
配方一
氯化鈉( ) 24.72克
氯化鉀( ) 0.67克
氯化鈣( ) 1.36克
氯化鎂( ) 4.66克
硫酸鎂( ) 6.29克
碳酸氫鈉( ) 0.18克
蒸餾水 加到1升
把上述各種鹽溶解在少量蒸餾水中,,再加入碳酸氫鈉,最后用蒸餾水稀釋到1000毫升,。
配方二
氯化鈉 45.0克 硫酸鎂 0.1克
氯化鎂 5.0克 氯化鐵(1%溶液) 1滴
先把硫酸鎂,、磷酸一氫鉀、氯化鐵用少量蒸餾水溶解,,加蒸餾水到980毫升,。隨后取硝酸鈣溶解在20毫升蒸餾水里,把此溶液逐滴加到上述溶液內(nèi),,裝瓶保存,。
配方二 克諾普氏(Knop's)溶液
硝酸鉀 1克 硫酸鎂 1克
磷酸二氫鉀 1克 硝酸鈣 3克
先把硝酸鉀、硫酸鎂,、磷酸二氫鉀用少量蒸餾水溶解,,加蒸餾水到980毫升。隨后取硝酸鈣,,用20毫升蒸餾水溶解,,加入到上述溶液內(nèi)。溶液灰形成白色沉淀,,在使用是必須搖動(dòng),。
在以上溶液中加入蔗糖溶液(1~4%),能刺激某些藻類形成游動(dòng)孢子,。該液用于培養(yǎng)綠藻,。
3、植物無土培養(yǎng)液
配方 霍格倫德(Hoagland)和斯納德(Snyder)液
硝酸鈣 0.821克 硝酸鉀 0.506克
磷酸二氫鉀 0.136克 硫酸鎂 0.120克
酒石酸鐵 0.005克
把上述鹽類溶解在少量蒸餾水里,,然后稀釋到1000毫升,。
(五)培養(yǎng)基
1、細(xì)菌培養(yǎng)基
配方一 牛肉膏瓊脂培養(yǎng)基
牛肉膏 0.3克 蛋白胨 1.0克
氯化鈉 0.5克 瓊脂 1.5克
水 1000毫升
在燒杯內(nèi)加水100毫升,,放入牛肉膏,、蛋白胨和氯化鈉,用蠟筆在燒杯外作上記號后,,放在火上加熱,。待燒杯內(nèi)各組分溶解后,加入瓊脂,,不斷攪拌以免粘底,。等瓊脂完全溶解后補(bǔ)足失水,用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調(diào)整pH值到7.2~7.6,分裝在各個(gè)試管里,,加棉花塞,,用高壓蒸汽滅菌30分鐘,。
配方二 馬鈴薯培養(yǎng)基
取新鮮牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀細(xì)細(xì)剁成肉末后,,加入500毫升蒸餾水和5克蛋白胨,。在燒杯上做好記號,煮沸,,轉(zhuǎn)用文火燉2小時(shí),。過濾,濾出的肉末干燥處理,,濾液pH值調(diào)到7.5左右,。每支試管內(nèi)加入10毫升肉湯和少量碎末狀的干牛心,滅菌,,備用,。
配方四 根瘤菌培養(yǎng)基
葡萄糖 10克 磷酸氫二鉀 0.5克
碳酸鈣 3克 硫酸鎂( ) 0.2克
酵母粉 0.4克 瓊脂 20克
水 1000毫升 1%結(jié)晶紫溶液 1毫升
先把瓊脂加水煮沸溶解,然后分別加入其他組分,,攪拌使溶解后,,分裝,滅菌,,備用,。
2、放線菌培養(yǎng)基
配方一 淀粉瓊脂培養(yǎng)基(高氏培養(yǎng)基)
可溶性淀粉 2克 硝酸鉀 0.1克
磷酸氫二鉀 0.05克 氯化鈉 0.05克
硫酸鎂 0.05克 硫酸亞鐵 0.001克
瓊脂 2克 水 1000毫升
先把淀粉放在燒杯里,,用5毫升水調(diào)成糊狀后,,倒入95毫升水,攪勻后加入其他藥品,,使它溶解,。在燒杯外做好記號,加熱到煮沸時(shí)加入瓊脂,,不停攪拌,,待瓊脂完全溶解后,補(bǔ)足失水,。調(diào)整pH值到7.2~7.4,,分裝后滅菌,備用,。
配方二 面粉瓊脂培養(yǎng)基
面粉 60克 瓊脂 20克
水 1000毫升
把面粉用水調(diào)成糊狀,,加水到500毫升,放在文火上煮30分鐘,。另取500毫升水,,放入瓊脂,加熱煮沸到溶解后,,把兩液調(diào)勻,,補(bǔ)充水分,調(diào)整pH值到7.4,,分裝,,滅菌,備用,。
3,、真菌培養(yǎng)基
配方一 薩市(Sabouraud's)培養(yǎng)基
蛋白胨 10克 瓊脂 20克
麥芽糖 40克 水 1000毫升
先把蛋白胨、瓊脂加水后,,加熱,,不斷攪拌,待瓊脂溶解后,,加入40克麥芽糖(或葡萄糖),,攪拌,使它溶解,,然后分裝,,滅菌,備用,。
本培養(yǎng)菌是培養(yǎng)許多種類真菌所常用的,。
配方二 馬鈴薯糖瓊脂培養(yǎng)基
把馬鈴薯洗凈去皮,取200克切成小塊,,加水1000毫升,,煮沸半小時(shí)后,補(bǔ)足水分,。在濾液中加入10克瓊脂,,煮沸溶解后加糖20克(用于培養(yǎng)霉菌的加入蔗糖,用于培養(yǎng)酵母菌的加入葡萄糖),,補(bǔ)足水分,,分裝,滅菌,,備用,。
把這培養(yǎng)基的pH值調(diào)到7.2~7.4,配方中的糖,,如用葡萄糖還可用來培養(yǎng)放線菌和芽孢桿菌,。
配方三 黃豆芽汁培養(yǎng)基
黃豆芽 100克 瓊脂 15克
葡萄糖 20克 水 1000毫升
洗凈黃豆芽,加水煮沸30分鐘,。用紗布過濾,,濾液中加入瓊脂,加熱溶解后放入糖,,攪拌使它溶解,,補(bǔ)足水分到1000毫升,,分裝,滅菌,,備用,。
把這培養(yǎng)基的pH值調(diào)到7.2~7.4,可用來培養(yǎng)細(xì)菌和放線菌,。
配方四 豌豆瓊脂培養(yǎng)基
豌豆 80粒 瓊脂 5克
水 200毫升
取80粒干豌豆加水,,煮沸1小時(shí),用紗布過濾后,,在濾液中加入瓊脂,,煮沸到溶解,分裝,,滅菌,,備用。
4,、食用菌菌種培養(yǎng)基
配方一 馬鈴薯-蔗糖--瓊脂培養(yǎng)基
20%馬鈴薯煮汁 1000毫升
蔗糖 20克 瓊脂 18克
把馬鈴薯洗凈去皮后,,切成小塊。稱取馬鈴薯小塊200克,,加水1000毫升,,煮沸20分鐘后,過濾,。在濾汁中補(bǔ)足水分到1000毫升,,即成20%馬鈴薯煮汁。在馬鈴薯煮汁中加入瓊脂和蔗糖,,煮沸,,使它溶解后,補(bǔ)足水分,,分裝,,滅菌,備用,。使用該培養(yǎng)基對pH值要求不嚴(yán)格,,可以不測定。
配方二 綜合馬鈴薯培養(yǎng)基
20%馬鈴薯煮汁 1000毫升
磷酸二氫鉀 3克 硫酸鎂 1.5克
葡萄糖 20克 維生素 10毫克
瓊脂 18克
先配制20%馬鈴薯煮汁,,方法同上,。在煮汁中加入上述各種組分,加熱溶解后補(bǔ)足水分,,調(diào)整pH值到6,。分裝,滅菌,備用,。
該培養(yǎng)基用于培養(yǎng)和保存靈芝,、平菇、香菇等食用菌菌種,。
(六)染色劑
1,、細(xì)菌染色劑
配方一 齊氏(Ziehl)石炭酸品紅染液
甲液 取石炭酸5克,,溶解在95毫升蒸餾水中,。
乙液 取0.3克堿性品紅,放入研缽中研磨,,逐漸加入10毫升95%酒精,,繼續(xù)淹沒,使它溶解,。
將甲液和乙液混合后,,搖勻,過濾,,裝瓶,,備用。
配方二 羅氏(Loeffler's)美藍(lán)染液
甲液 取5克美藍(lán),,溶于100毫升95%酒精中,,制成美藍(lán)-酒精飽和液。
乙液 取氫氧化鉀0.01克(或1%氫氧化鉀溶液1毫升),,溶液也可用于放線菌染色,,0.1%濃度可用于酵母菌染色。
配方三 革蘭氏(Gram's)染液
用此液染色因先用甲液染色,,再加乙液固定,,用丙液處理,最后用丁液復(fù)染,。四種液體的配方如下:
甲液(結(jié)晶紫液)
(1)結(jié)晶紫 2克 95%酒精 20毫升
(2)草酸銨 0.8克 蒸餾水 80毫升
使用錢江(1),、(2)液相混,靜置48小時(shí)后使用,。
乙液(碘液)
碘 1克 碘化鉀 2克 蒸餾水 300毫升
將碘化鉀溶于少量蒸餾水中,,然后加入碘,待碘全部溶解后,,加水稀釋至300毫升,。
丙液 95%酒精溶液
丁液(番紅花紅液)
2.5%番紅花紅酒精溶液 10毫升 蒸餾水 100毫升
2、細(xì)菌特殊染色劑
配方一 芽孢染液 用此配方染色是用甲液染色后,,用乙液復(fù)染,。
甲液 取5克孔雀綠,加入少量蒸餾水,使它溶解后,,用蒸餾水稀釋到100毫升,,即成孔雀綠染液。
乙液 取番紅花紅0.5克,,加入少量蒸餾水,,使它溶解后,用蒸餾水稀釋到100毫升,,集成番紅花紅復(fù)染液,。
配方二 莢膜染液 此配方先用甲液染色,后用乙液復(fù)染,。
甲液 取結(jié)晶紫0.1克,,溶于少量蒸餾水后,加水稀釋到100毫升,,再加入0.25毫升冰醋酸一結(jié)晶紫染液,。
乙液 取硫酸銅( )31.3克,溶于少量蒸餾水后,,加水稀釋到100毫升,,即成20%硫酸銅脫色劑。
配方三 鞭毛染液
甲液
飽和明礬溶液 2毫升 5%石炭酸溶液 5毫升
20%丹寧酸溶液 2毫升
乙液
堿性品紅 11克 95%酒精 100毫升
使用前取甲液9毫升和乙液1毫升相混,,過濾即可,。
3、植物細(xì)胞壁染色劑
配方一 纖維素細(xì)胞壁染液(Ⅰ)
取固綠0.1克,,溶于100毫升95%酒精中,,即成0.1%固綠-酒精溶液。
該液能染色纖維素細(xì)胞壁,,還用于動(dòng)植物中作漿質(zhì)染色劑,。
配方二 纖維素細(xì)胞壁染液(Ⅱ)
氯化鋅 20克 碘化鉀 6.5克
碘 1.5克 蒸餾水加至100毫升
先把氯化鋅溶于少量蒸餾水中,再加入6.5克碘化鉀,,在碘完全溶解后,,用蒸餾水稀釋到100毫升,即成碘-氯化鋅溶液,。
該染液能把細(xì)胞壁染成紫色,,胞質(zhì)染成淡黃色,胞核染成棕色,。
配方一 纖維素細(xì)胞壁染液(Ⅲ)
甲液 取1克碘和1.5克碘化鉀,,溶于100毫升蒸餾水中,即成1%碘液,。
乙液 取7份硫酸和3份蒸餾水相混,,即成66.5%硫酸溶液,。
染色時(shí),在材料上滴加甲液,,再加一滴乙液,,纖維素細(xì)胞壁就染成黃色。
配方四 木質(zhì)化細(xì)胞壁染液(Ⅰ)
硫酸化苯胺(或鹽酸話本安) 1份
蒸餾水 70份 95%酒精 30份
硫酸 30份
將上述各組分相混,,將細(xì)胞材料放入混合液里染色,,可是木質(zhì)化細(xì)胞壁呈鮮黃或姜黃色。
配方五 木質(zhì)化細(xì)胞壁染液(Ⅱ)
取間苯三酚4~5克,,溶于100毫升95%酒精中,,即成間苯三酚-酒精液。
先在材料上滴上1滴濃鹽酸,,然后滴上間苯三酚-酒精液1滴,,木質(zhì)化的細(xì)胞壁就染上櫻紅或紫紅色,。