關于HPLC主成分自身對照法檢查有關物質時檢測波長確定的討論
http://www.cde.org.cn 發(fā)布時間：2003/05/16 09:21:56 AM
關于HPLC主成分自身對照法檢查有關物質時檢測波長確定的討論
審評二部
張玉琥
有關物質檢查，包括對產品中殘留合成原料,、中間體,、副產物及可能的降解產物的檢查,，是控制藥品質量的重要指標,，目的是檢查藥品中所含的上述雜質是否符合安全性的要求,同時也是藥品穩(wěn)定性評價中需重點考察的項目,。
有關物質檢查常用的方法之一是HPLC主成分自身對照法（紫外檢測器）,，即將HPLC色譜圖中雜質峰面積與主成分自身對照液峰面積進行比較,，以確定雜質限度是否合格。采用此方法時確定的檢測波長是否合理直接影響到方法的可行性,，因此檢測波長的選擇是方法學研究的重要內容,。
在審評中發(fā)現一些申報單位在采用HPLC主成分自身對照法檢查有關物質時直接或間接地以主成分的最大吸收波長作為檢測波長，由于有關物質檢查的對象是雜質,，若將主藥的最大吸收波長確定為檢測波長,，則雜質在此波長下的吸收可能偏低，某些雜質甚至無吸收,，這樣會造成對雜質含量的低估甚至漏檢,，從而不能反映產品的真實質量，影響了對品種質量可控性及穩(wěn)定性的評價,。
在有關物質檢測波長確定方面,，申報資料中比較常見的做法有：
1．直接將主藥的最大吸收波長選作檢測波長,。
2．簡單地套用含量測定的色譜條件。在HPLC法進行含量測定時,，為提高方法的靈敏度,，降低干擾，往往選用主成分的最大吸收波長作為檢測波長,。若套用含量測定的色譜條件,，實際仍是以主藥的最大吸收波長作為有關物質檢測波長。
3．以樣品進行破壞性試驗（酸,、堿,、熱、光照,、氧化等）后的溶液做紫外掃描,，將掃描圖譜中最大吸收波長確定為有關物質的檢測波長。因破壞性試驗后溶液中存在尚未破壞的主藥,、降解產物、輔料等,，此溶液的紫外吸收為各成分紫外吸收的加和,，并不能反映降解產物的紫外吸收特性。由于未破壞主藥所占比例較大,，故破壞性試驗后溶液的最大吸收波長一般仍為主藥的最大吸收波長,。
采用HPLC主成分自身對照法檢查有關物質，其前提之一是需檢查的雜質與主成分在確定的檢測波長下應有相近的紫外吸收（響應值接近）,，選擇檢測波長時需對產品中可能存在的雜質（合成原料,、中間體、副產物以及降解產物）的紫外吸收特性進行研究,。已知雜質的紫外吸收特性可采用對其流動相溶液直接進行掃描的方法考察,，未知雜質（如未知降解產物等）可通過二極管陣列檢測器考察其紫外吸收情況，根據各主要雜質及主成分的紫外吸收特性,，選取響應值基本一致的波長作為有關物質的檢測波長,。若對不同雜質難于找到均適宜的檢測波長，可考慮選擇在不同波長下分別測定,，也可考慮采用加校正因子的主成分自身對照法,。只有經試驗研究確認主成分的最大吸收波長符合有關物質檢查對測定波長的要求時，為方便操作,，可選作有關物質的檢測波長,，以與含量測定的色譜條件一致。
另外,，HPLC主成分自身對照法檢查有關物質比較適用于對微量雜質總量的控制,，也可用于單個雜質的限度（一般不超過0.5%）控制,。對于具有明確歸屬的已知雜質，建議采用雜質對照品法進行檢查,。對于有毒有害雜質,，更應采用雜質對照品法單獨測定，并制定嚴格的限度,。
