關(guān)于HPLC主成分自身對照法檢查有關(guān)物質(zhì)時檢測波長確定的討論
http://www.cde.org.cn 發(fā)布時間：2003/05/16 09:21:56 AM
關(guān)于HPLC主成分自身對照法檢查有關(guān)物質(zhì)時檢測波長確定的討論
審評二部
張玉琥
有關(guān)物質(zhì)檢查,，包括對產(chǎn)品中殘留合成原料、中間體,、副產(chǎn)物及可能的降解產(chǎn)物的檢查,，是控制藥品質(zhì)量的重要指標(biāo),，目的是檢查藥品中所含的上述雜質(zhì)是否符合安全性的要求,同時也是藥品穩(wěn)定性評價中需重點考察的項目,。
有關(guān)物質(zhì)檢查常用的方法之一是HPLC主成分自身對照法（紫外檢測器）,，即將HPLC色譜圖中雜質(zhì)峰面積與主成分自身對照液峰面積進(jìn)行比較,，以確定雜質(zhì)限度是否合格。采用此方法時確定的檢測波長是否合理直接影響到方法的可行性,，因此檢測波長的選擇是方法學(xué)研究的重要內(nèi)容,。
在審評中發(fā)現(xiàn)一些申報單位在采用HPLC主成分自身對照法檢查有關(guān)物質(zhì)時直接或間接地以主成分的最大吸收波長作為檢測波長，由于有關(guān)物質(zhì)檢查的對象是雜質(zhì),，若將主藥的最大吸收波長確定為檢測波長,，則雜質(zhì)在此波長下的吸收可能偏低，某些雜質(zhì)甚至無吸收,，這樣會造成對雜質(zhì)含量的低估甚至漏檢,，從而不能反映產(chǎn)品的真實質(zhì)量，影響了對品種質(zhì)量可控性及穩(wěn)定性的評價,。
在有關(guān)物質(zhì)檢測波長確定方面,，申報資料中比較常見的做法有：
1．直接將主藥的最大吸收波長選作檢測波長。
2．簡單地套用含量測定的色譜條件,。在HPLC法進(jìn)行含量測定時,，為提高方法的靈敏度，降低干擾,，往往選用主成分的最大吸收波長作為檢測波長,。若套用含量測定的色譜條件，實際仍是以主藥的最大吸收波長作為有關(guān)物質(zhì)檢測波長,。
3．以樣品進(jìn)行破壞性試驗（酸,、堿、熱,、光照,、氧化等）后的溶液做紫外掃描，將掃描圖譜中最大吸收波長確定為有關(guān)物質(zhì)的檢測波長,。因破壞性試驗后溶液中存在尚未破壞的主藥,、降解產(chǎn)物、輔料等,，此溶液的紫外吸收為各成分紫外吸收的加和,，并不能反映降解產(chǎn)物的紫外吸收特性。由于未破壞主藥所占比例較大,，故破壞性試驗后溶液的最大吸收波長一般仍為主藥的最大吸收波長,。
采用HPLC主成分自身對照法檢查有關(guān)物質(zhì),，其前提之一是需檢查的雜質(zhì)與主成分在確定的檢測波長下應(yīng)有相近的紫外吸收（響應(yīng)值接近）,，選擇檢測波長時需對產(chǎn)品中可能存在的雜質(zhì)（合成原料、中間體,、副產(chǎn)物以及降解產(chǎn)物）的紫外吸收特性進(jìn)行研究,。已知雜質(zhì)的紫外吸收特性可采用對其流動相溶液直接進(jìn)行掃描的方法考察,，未知雜質(zhì)（如未知降解產(chǎn)物等）可通過二極管陣列檢測器考察其紫外吸收情況，根據(jù)各主要雜質(zhì)及主成分的紫外吸收特性,，選取響應(yīng)值基本一致的波長作為有關(guān)物質(zhì)的檢測波長,。若對不同雜質(zhì)難于找到均適宜的檢測波長，可考慮選擇在不同波長下分別測定,，也可考慮采用加校正因子的主成分自身對照法,。只有經(jīng)試驗研究確認(rèn)主成分的最大吸收波長符合有關(guān)物質(zhì)檢查對測定波長的要求時，為方便操作,，可選作有關(guān)物質(zhì)的檢測波長,，以與含量測定的色譜條件一致。
另外,，HPLC主成分自身對照法檢查有關(guān)物質(zhì)比較適用于對微量雜質(zhì)總量的控制,，也可用于單個雜質(zhì)的限度（一般不超過0.5%）控制。對于具有明確歸屬的已知雜質(zhì),，建議采用雜質(zhì)對照品法進(jìn)行檢查,。對于有毒有害雜質(zhì)，更應(yīng)采用雜質(zhì)對照品法單獨測定,，并制定嚴(yán)格的限度,。
