脂質體靶向制劑及質量控制評價淺談
 
  http://www.cde.org.cn 發(fā)布時間：2002/11/29 04:15:31 PM
 
脂質體靶向制劑及質量控制評價淺談
審評二部 張學農(nóng)
一,、靶向制劑的定義與分類
靶向制劑亦稱靶向給藥系統(tǒng)(targeting drug delivery system,，TDDS)。系指載體將藥物通過局部給藥或全身血液循環(huán)而選擇性地濃集定位于靶組織、靶器官、靶細胞或細胞內結構的給藥系統(tǒng)。
靶向制劑特點：定位濃集,、控制釋藥、無毒及生物可降解性等。
靶向制劑主要有如下幾類：
1,、被動靶向制劑(passive targeting preparation) 又稱為淋巴系統(tǒng)靶向性,。利用脂質體進入體內即被巨噬細胞作為異物吞噬特點形成天然傾向的富集作用。
2,、主動靶向制劑 (active targeting preparation)系指用經(jīng)過修飾的藥物載體作為“導彈”,，將藥物定向地運送到靶區(qū)濃集發(fā)揮藥效。
3,、物理化學靶向制劑 (Physical and chemical targeting preparation) 應用物理化學方法使靶向制劑在特定部位發(fā)揮藥效,。
二、脂質體(liposome)
（一）,、脂質體 (liposome): 系指將藥物包封于類脂質雙分子層內而形成的微型泡囊體,。
（二）、脂質體的分類
脂質體按照所包含類脂質雙分子層的層數(shù)不同,，分為單室脂質體和多室脂質體,。
小單室脂質體(SUV)：粒徑約0.02～0.08m；大單室脂質體 (LUV）為單層大泡囊,，粒徑在0.1～lm,。
多層雙分子層的泡囊稱為多室脂質體 (MIV)，粒徑在1～5m之間,。
（三）,、脂質體的組成與結構
脂質體的組成：類脂質（磷脂）及附加劑。
1,、磷脂類：包括天然磷脂和合成磷脂二類,。磷脂的結構特點為一個磷酸基和一個季銨鹽基組成的親水性基團，以及由兩個較長的烴基組成的親脂性基團,。
天然磷脂以卵磷脂（磷脂酰膽堿,，PC）為主，來源于蛋黃和大豆,，顯中性,。
合成磷脂主要有DPPP（二棕櫚酰磷脂酰膽堿）、DPPE（二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺）,、DSPC（二硬脂酰磷脂酰膽堿）等,，其均屬氫化磷脂類，具有性質穩(wěn)定,，抗氧化性強,，成品穩(wěn)定等特點，是目前國外首選的輔料,。
2,、膽固醇：膽固醇與磷脂是共同構成細胞膜和脂質體的基礎物質。膽固醇具有調節(jié)膜流動性的作用，故可稱為脂質體“流動性緩沖劑”,。
（四）,、脂質體的制備
1、注入法:主要用于制備單室脂質體,，少數(shù)為多室脂質體,，其粒徑絕大多數(shù)在2m以下。
2,、薄膜分散法：主要用于制備多室或大單室脂質體,，超聲后以單室脂質體為主。
3,、超聲波分散法：主要用于制備以單室為主單室脂質體,。
4、逆相蒸發(fā)法：將磷脂溶于有機溶劑,，加入含藥物的緩沖液,，超聲使成穩(wěn)定w/o乳劑，減壓除去有機溶劑在旋轉器壁上形成薄膜,，加入緩沖液使凝膠脫落,，制得水性混懸液，通過凝膠色譜法或超速離心法,，除去未包入的藥物,，即得大單室脂質體。
5,、冷凍干燥法：適合于熱敏感的藥物,。
6、重建脂質體：單室或多室型,。是目前國外應用最為廣泛的制備方法之一,。其具有工藝穩(wěn)定、適合于工業(yè)化生產(chǎn),、質量易于控制,、產(chǎn)品穩(wěn)定性好等特點。
（五）,、脂質體的質量控制與評價
1,、形態(tài)、粒徑及其分布
采用掃描電鏡,、激光散射法或激光掃描法測定。根據(jù)給藥途徑不同要求其粒徑不同,。如注射給藥脂質體的粒徑應小于200nm,，且分布均勻，呈正態(tài)性，跨距宜小,。
2,、包封率和載藥量
包封率：包封率＝（脂質體中包封的藥物/脂質體中藥物總量）×100％
一般采用葡聚糖凝膠、超速離心法,、透析法等分離方法將溶液中游離藥物和脂質體分離,，分別測定，計算包封率,。通常要求脂質體的藥物包封率達80%以上,。
載藥量：載藥量＝[脂質體中藥物量/（脂質體中藥物＋載體總量）]×100％
載藥量的大小直接影響到藥物的臨床應用劑量，故載藥量愈大,，愈易滿足臨床需要,。載藥量與藥物的性質有關，通常親脂性藥物或親水性藥物較易制成脂質體,。
3,、脂質體的穩(wěn)定性
1)、物理穩(wěn)定性:主要用滲漏率表示,。
滲漏率＝（放置前介質中藥物量－放置后介質中的藥量）/制劑中藥量x100%
膽固醇以加固脂質雙分子層膜,，降低膜流動，可減小滲漏率,。
2),、化學穩(wěn)定性：
(1)磷脂氧化指數(shù)：氧化指數(shù)＝A233nm=A215nm；一般規(guī)定磷脂氧化指數(shù)應小于0.2,。
(2)磷脂量的測定：基于每個磷脂分子中僅含1個磷原素,，采用化學法將樣品中磷脂轉變?yōu)闊o機磷后測定磷摩爾量（或重量），即可推出磷脂量,。
4,、防止氧化的措施：
防止氧化的一般措施有充入氮氣，添加抗氧劑-生育酚,、金屬絡合劑等,；也可直接采用氫化飽和磷脂。
5,、脂質體的滅菌：
滅菌的一般方法有過濾除菌,、無菌操作、－射線照射（60鈷15～20kGy）,、121℃熱壓滅菌等,。
（六）、脂質體的特點
1,、靶向性和淋巴定向性：肝,、脾網(wǎng)狀內皮系統(tǒng)的被動靶向性,。用于肝寄生蟲病、利什曼病等單核-巨噬細胞系統(tǒng)疾病的防治,。如肝利什曼原蟲藥銻酸葡胺脂質體,，其肝中濃度比普通制劑提高了200～700倍。
2,、緩釋作用：緩慢釋放,，延緩腎排泄和代謝，從而延長作用時間,。
3,、降低藥物毒性：如兩性霉素B脂質體可降低心臟毒性。
4,、提高穩(wěn)定性：如胰島素脂質體,、疫苗等可提高主藥的穩(wěn)定性。
（七）,、脂質體作為藥物載體的臨床應用
1,、抗腫瘤藥物載體：阿霉素脂質體和順鉑脂質體已在國外上市。
2,、抗寄生蟲藥物載體：苯硫咪唑脂質體和阿苯達唑脂質體等,。利用脂質體的被動靶向性，提高藥物的生物利用度,，減少用量,，降低毒副作用。
3,、抗菌藥物載體：慶大霉素脂質體和兩性霉素B,，可減少藥物的耐藥性，降低心臟毒性,。
4,、激素類藥物載體。
（八）,、給藥途徑
脂質體的給藥途徑主要包括(1)靜脈注射,；(2)肌內和皮下注射；(3)口服給藥,；(4)眼部給藥,；(5)肺部給藥；(6)經(jīng)皮給藥,；(7)鼻腔給藥,。
(九)、脂質體的體內過程
脂質體與細胞之間作用的主要形式包括膜間轉運（細胞膜的脂質交換）,、接觸釋藥,、吸附,、融合和內吞,。
（十）,、脂質體的發(fā)展趨勢及存在問題
1. 趨勢：高效、低毒和靶向,。
2. 問題：穩(wěn)定性較差,，防止?jié)B漏。
國外脂質體的開發(fā)及上市情況
藥 物 適 應 癥 公司 上市情況
制霉菌素
胞壁三肽
紫杉醇脂質體
表阿霉素
兩性霉素B
鹽酸阿霉素
慶大霉素
兩性霉素B
阿霉素
柔紅霉素
甲肝疫苗 霉菌感染
激活殺腫瘤巨噬細胞
非小細胞肺癌等
卡波濟肉瘤
霉菌感染
癌癥
細胞內文原體
霉菌感染
卡波濟肉瘤
癌癥
免疫疫苗 Argus
汽巴－甲基公司（諾華公司）
Science Biotechnology Inc.
Liposome Technology Inc.
The Liposome Company(TLC)
The Liposome Company(TLC)
The Liposome Company(TLC)
Nexstar
Nexstar
Nexstar
Swiss Serum institute II期（美國和印度）

97年美國市場
臨床III期

90年歐洲市場,，
92上市
1996年美國和歐洲
1994年瑞士上市
（十一）,、新型靶向脂質體
1、前體脂質體：將脂質吸附在極細的水溶性載體如氯化鈉,、山梨醇等聚合糖類（增加脂質分散面積）制成前體脂質體,，遇水時脂質溶脹，載體溶解形成多層脂質體,，其中載體的大小直接影響脂質體的大小和均勻性,。前體脂質體可預防脂質體之間相互聚集，且更適合包封脂溶性藥物,。
2,、長循環(huán)脂質體: 經(jīng)過PEG修飾，以增加脂質體的柔順性和親水性,，通過單核-巨噬細胞系統(tǒng)吞噬,，減少脂質體脂膜與血漿蛋白的相互作用，延長循環(huán)時間,，稱為長循環(huán)脂質體(long-circulating liposome),。長循環(huán)脂質體有利于肝脾以外的組織或器官的靶向作用。同時,，將抗體或配體結合在PEG的末端,，既可保持長循環(huán)，又可保持對靶體的識別,。
3,、免疫脂質體：脂質體表面聯(lián)接抗體，對靶細胞進行識別,，提高脂質體的靶向性,。如在絲裂霉素（MMC）脂質體上結合抗胃癌細胞表面抗原的單克隆抗體3G 制成免疫脂質，在體內該免疫脂質體對胃癌靶細胞的M85殺傷作用比游離MMC提高4倍,。
4,、熱敏脂質體：利用在相變溫度時，脂質體的類脂質雙分子層膜從膠態(tài)過渡到液晶態(tài),，脂質膜的通透性增加,，藥物釋放速度增大的原理制成熱敏脂質體,。例如將二棕櫚酸磷脂（DPPC）和二硬脂酸磷脂(DSPC)按一定比例混合，制成的3H甲氨喋呤熱敏脂質體,，再注入荷Lewis肺癌小鼠的尾靜脈后,，再用微波加熱腫瘤部位至42℃，病灶部位的放射性強度明顯的高于非熱敏脂質體對照組,。
5,、pH敏感性脂質體：由于腫瘤間質的pH比周圍正常組織細胞低，選用對pH敏感性的類脂材料,，如二棕櫚酸磷脂或十七烷酸磷脂為膜材制備成載藥脂質體,。當脂質體進入腫瘤部位時，由于pH的降低導致脂肪酸羧基脂質化成六方晶相的非相層結構,，從而使膜融合,，加速釋藥。
總之,，脂質體作為藥物載體是臨床應用較早,，發(fā)展最為成熟的一類新型靶向制劑。目前,，美國FDA批準上市的脂質體產(chǎn)品有兩性霉素B,、阿霉素脂質體。批準進入臨床試驗的脂質體有丁胺卡鈉霉素,。未來脂質體的研究主要集中在以下三個方面:
1,、膜結構與載藥性質之間的關系；
2,、脂質體在體內的靶向特性,；
3、在體外培養(yǎng)中將基因和其他物質導入細胞內有望成為基因藥物載體,。