一,、簡介
T4 DNA連接酶催化dsDNA平末端或粘性末端相鄰核苷酸的5'-磷酸和3'-OH的連接反應(yīng)。依賴ATP將ssRNA或ssDNA連接到ssRNA或ssDNA分子的5'-P末端,, 還能將 [5'-32P]核苷酸、3',,5'-雙(磷酸)加入到RNA上,,但不能和全單鏈核苷酸連接。本公司所生產(chǎn)T4 DNA連接酶比一般T4 DNA連接酶連接效率要高2-4倍,。
二,、來源
大腸桿菌
三、產(chǎn)品用途
· 催化dsDNA分子平端或粘性末端間的連接
· 連接單鏈核苷酸
· 標(biāo)記RNA 3'-末端
· 環(huán)化RNA和DNA寡聚核苷酸
· 克隆長片段cDNA
四,、連接酶反應(yīng)緩沖液:5×
組成:150mM Tris-HCl(pH7.8)
50mM MgCl2
50mM二硫蘇糖醇(DTT)
5mM ATP
注意事項:
1,、二硫蘇糖醇用于保持酶的活性。在10倍濃縮的緩沖液中,,DTT在冷凍時有可能析出,。如果出現(xiàn)這種情況,將緩沖液渦旋,,使沉淀重新溶解即可,,對實驗結(jié)果無影響。
2,、為防止ATP和DTT的降解,,緩沖液應(yīng)小量分裝,-20℃保存,。
五,、酶活性定義:
0.01個Weiss單位T4 DNA連接酶定義為16℃、20分鐘催化連接1微克Lambda DNA中95%以上 的Hind III片段所需的酶的量,。
六,、保存條件:
T4 DNA 連接酶保存于下述緩沖液中,-20℃保存,。
保存緩沖液組成:
10mM Tris-HCl(pH7.0
50 mM KCl
1 mM二硫蘇糖醇(DTT)
0. 1 mM EDTA