一,、簡(jiǎn)介

   T4 DNA連接酶催化dsDNA平末端或粘性末端相鄰核苷酸的5'-磷酸和3'-OH的連接反應(yīng),。依賴ATP將ssRNA或ssDNA連接到ssRNA或ssDNA分子的5'-P末端,， 還能將 [5'-32P]核苷酸,、3',，5'-雙（磷酸）加入到RNA上，但不能和全單鏈核苷酸連接,。本公司所生產(chǎn)T4 DNA連接酶比一般T4 DNA連接酶連接效率要高2-4倍,。

二、來源

大腸桿菌

三,、產(chǎn)品用途

·  催化dsDNA分子平端或粘性末端間的連接

·  連接單鏈核苷酸

·  標(biāo)記RNA 3'-末端

·  環(huán)化RNA和DNA寡聚核苷酸

·  克隆長(zhǎng)片段cDNA

四,、連接酶反應(yīng)緩沖液：5×

組成：150mM Tris-HCl(pH7.8)

        50mM MgCl2

        50mM二硫蘇糖醇（DTT）

        5mM  ATP

注意事項(xiàng):

1、二硫蘇糖醇用于保持酶的活性,。在10倍濃縮的緩沖液中,，DTT在冷凍時(shí)有可能析出。如果出現(xiàn)這種情況,，將緩沖液渦旋,，使沉淀重新溶解即可，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果無影響,。

2,、為防止ATP和DTT的降解,，緩沖液應(yīng)小量分裝,，-20℃保存。

五、酶活性定義：

    0.01個(gè)Weiss單位T4 DNA連接酶定義為16℃,、20分鐘催化連接1微克Lambda DNA中95%以上 的Hind III片段所需的酶的量,。

六、保存條件：

T4 DNA 連接酶保存于下述緩沖液中,，－20℃保存,。

保存緩沖液組成：

10mM Tris-HCl(pH7.0

50 mM KCl

1 mM二硫蘇糖醇（DTT）

0. 1 mM EDTA