目前,，載體主要有病毒和非病毒兩大類,其中質(zhì)粒DNA是一種新的非病毒轉(zhuǎn)基因載體,。一個合格質(zhì)粒的組成要素：
（1）復(fù)制起始位點Ori 即控制復(fù)制起始的位點,。原核生物DNA分子中只有一個復(fù)制起始點,。而真核生物DNA分子有多個復(fù)制起始位點,。
（2）抗生素抗性基因 可以便于加以檢測,，如Amp+ ,Kan+
（3）多克隆位點MCS 克隆攜帶外源基因片段
（4） P/E 啟動子/增強(qiáng)子
（5）Terms 終止信號
（6）加poly（A）信號 可以起到穩(wěn)定mRNA作用

選擇載體主要依據(jù)構(gòu)建的目的,，同時要考慮載體中應(yīng)有合適的限制酶切位點,。如果構(gòu)建的目的是要表達(dá)一個特定的基因，則要選擇合適的表達(dá)載體,。
載體選擇主要考慮下述3點：
【1】構(gòu)建DNA重組體的目的,，克隆擴(kuò)增/表達(dá)表達(dá)，選擇合適的克隆載體/表達(dá)載體,。
【2】.載體的類型：
（1）克隆載體的克隆能力－據(jù)克隆片段大?。ù筮x大，小選?。?。如<10kb選質(zhì)粒。
（2）表達(dá)載體據(jù)受體細(xì)胞類型－原核/真核/穿梭,，E.coli/哺乳類細(xì)胞表達(dá)載體,。
（3）對原核表達(dá)載體應(yīng)該注意：選擇合適的啟動子及相應(yīng)的受體菌，用于表達(dá)真核蛋白質(zhì)時注意克服4個困難和閱讀框錯位；表達(dá)天然蛋白質(zhì)或融合蛋白作為相應(yīng)載體的參考,。
【3】載體MCS中的酶切位點數(shù)與組成方向因載體不同而異,，適應(yīng)目的基因與載體易于鏈接，不產(chǎn)生閱讀框架錯位,。

綜上所述,，選用質(zhì)粒（最常用）做載體的4點要求：
（1）選分子量小的質(zhì)粒，即小載體（1－1.5kb）→不易損壞,，在細(xì)菌里面拷貝數(shù)也多（也有大載體）,；
（2）一般使用松弛型質(zhì)粒在細(xì)菌里擴(kuò)增不受約束，一般10個以上的拷貝,，而嚴(yán)謹(jǐn)型質(zhì)粒<10個,。
（3）必需具備一個以上的酶切位點，有選擇的余地,；
（4）必需有易檢測的標(biāo)記,，多是抗生素的抗性基因，不特指多位Ampr（試一試）,。
無論選用哪種載體,，首先都要獲得載體分子，然后采用適當(dāng)?shù)南拗泼笇⑤d體DNA進(jìn)行切割,，獲得分子,，以便于與目的基因片段進(jìn)行連接。

如何閱讀質(zhì)粒圖譜
第一步：首先看Ori的位置,，了解質(zhì)粒的類型（原核/真核/穿梭質(zhì)粒）
第二步：再看篩選標(biāo)記,，如抗性，決定使用什么篩選標(biāo)記,。
（1）Ampr 水解β－內(nèi)酰胺環(huán),，解除氨芐的毒性。
（2）tetr 可以阻止四環(huán)素進(jìn)入細(xì)胞,。
（3）camr 生成氯霉素羥乙?；苌铮怪ザ拘?。
（4）neor（kanr） 氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶 使G418（長那霉素衍生物）失活
（5）hygr 使潮霉素β失活,。
第三步：看多克隆位點（MCS）。它具有多個限制酶的單一切點,。便于外源基因的插入,。如果在這些位點外有外源基因的插入,，會導(dǎo)致某種標(biāo)志基因的失活,，而便于篩選。決定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步：再看外源DNA插入片段大小,。質(zhì)粒一般只能容納小于10Kb的外源DNA片段,。一般來說，外源DNA片段越長,，越難插入,，越不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)化效率越低,。
第五步：是否含有表達(dá)系統(tǒng)元件,，即啟動子－核糖體結(jié)合位點－克隆位點－轉(zhuǎn)錄終止信號。這是用來區(qū)別克隆載體與表達(dá)載體,?？寺≥d體中加入一些與表達(dá)調(diào)控有關(guān)的元件即成為表達(dá)載體。選用那種載體,，還是要以實驗?zāi)康臑闇?zhǔn)繩,。
第六步：啟動子－核糖體結(jié)合位點－克隆位點－轉(zhuǎn)錄終止信號
（1）啟動子－促進(jìn)DNA轉(zhuǎn)錄的DNA順序，這個DNA區(qū)域常在基因或操縱子編碼順序的上游,，是DNA分子上可以與RNApol特異性結(jié)合并使之開始轉(zhuǎn)錄的部位,，但啟動子本身不被轉(zhuǎn)錄。
（2） 增強(qiáng)子/沉默子－為真核基因組（包括真核病毒基因組）中的一種具有增強(qiáng)鄰近基因轉(zhuǎn)錄過程的調(diào)控順序,。其作用與增強(qiáng)子所在的位置或方向無關(guān),。即在所調(diào)控基因上游或下游均可發(fā)揮作用。/沉默子－負(fù)增強(qiáng)子,，負(fù)調(diào)控序列,。
（3）核糖體結(jié)合位點/起始密碼/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖體的兩個結(jié)合位點，對于原核而言是AUG（起始密碼）和SD序列,。
（4） 轉(zhuǎn)錄終止順序（終止子）/翻譯終止密碼子：結(jié)構(gòu)基因的最后一個外顯子中有一個AATAAA的保守序列,，此位點down－stream有一段GT或T富豐區(qū)，這2部分共同構(gòu)成poly（A）加尾信號,。結(jié)構(gòu)基因的最后一個外顯子中有一個AATAAA的保守序列,，此位點down－stream有一段GT或T富豐區(qū)，這2部分共同構(gòu)成poly（A）加尾信號,。

質(zhì)粒圖譜上有的箭頭順時針有的箭頭逆時針,，那其實是代表兩條DNA鏈，即質(zhì)粒是環(huán)狀雙鏈DNA,，它的啟動子等在其中一條鏈上,，而它的抗性基因在另一條鏈上.

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