Western blot 即western免疫印跡,，是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測,。對(duì)已知表達(dá)蛋白，可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測,，對(duì)新基因的表達(dá)產(chǎn)物,，可通過融合部分的抗體檢測。
其原理如下：
與Southern或Northern雜交方法類似,，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體,，“顯色”用標(biāo)記的二抗,。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上,，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變,。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分,。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá),。
凝膠電泳中一個(gè)關(guān)鍵的指示系統(tǒng)，即蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（Molecular Weight Marker）,，電泳的分離效率,，轉(zhuǎn)膜效率以及電泳泳動(dòng)情況等，皆需通過蛋白標(biāo)準(zhǔn)品來顯示,，因此,，效果好的蛋白marker將極大地提高您實(shí)驗(yàn)的成功率!
其原理如下：
與Southern或Northern雜交方法類似,，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體,，“顯色”用標(biāo)記的二抗,。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上,，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變,。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分,。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá),。
凝膠電泳中一個(gè)關(guān)鍵的指示系統(tǒng)，即蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（Molecular Weight Marker）,，電泳的分離效率,，轉(zhuǎn)膜效率以及電泳泳動(dòng)情況等，皆需通過蛋白標(biāo)準(zhǔn)品來顯示,，因此,，效果好的蛋白marker將極大地提高您實(shí)驗(yàn)的成功率!
