李 寧 譯
遼寧中醫(yī)學(xué)院 研究生部
在準(zhǔn)備進(jìn)行肝移植的人群中,，丙肝患者所占的比例最高。在了解丙肝疾病及肝損傷,，試驗(yàn)可能的治療方法中,，小型動(dòng)物模型的缺乏是主要的障礙。有關(guān)丙肝感染小鼠模型的報(bào)導(dǎo)具有顯著積極的作用,。
一直到幾年前,，病毒性肝炎的alphabet soup 還只有兩個(gè)字母來(lái)標(biāo)志兩種區(qū)別明顯的疾病--甲肝和乙肝,。甲肝,，小型RNA病毒（HAV）引起，是一種潛伏期較短的急性病,，由被排泄物污染的食物和水經(jīng)消化道傳播,。乙肝，由一種DNA病毒（HBV）傳播,，經(jīng)注射和接觸污染的材料傳播,，亦有性傳播。在亞非流行區(qū)也可經(jīng)母親傳播,。急性乙肝感染可持續(xù)達(dá)數(shù)周,，但與甲肝可以完全治愈的情況不同，大約10%的乙肝感染者可以成為慢性攜帶者,。這些人中的一部分可發(fā)展為慢性肝病,，包括肝纖維化或肝硬化，并且羈患肝細(xì)胞癌的幾率增加,。
對(duì)于甲肝和乙肝,，均有有效的疫苗接種和屏障技術(shù)。自從乙肝疫苗在臺(tái)灣接種以來(lái),，乙肝疫苗接種已經(jīng)基本普及并在預(yù)防疾病上顯示了卓有成效的結(jié)果,。然而，這種普遍樂(lè)觀的前景并沒(méi)有適用于丙肝,，這種由一種RNA病毒（HCV）引起的疾病,。此病首先于1989年被發(fā)現(xiàn)。在分離到HCV之前,，診斷丙肝是用排除法,，即非甲非乙型肝炎。HCV的發(fā)現(xiàn)是一座里程碑,，因?yàn)檫@不僅發(fā)現(xiàn)了一種常見的,，重要的疾病的病原體，而且HCV是第一種不用病毒經(jīng)組織培養(yǎng)或感染小型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物而完全應(yīng)用分子技術(shù)得到的病毒,。（完全感染的克隆只在最近才獲得）,。當(dāng)然,，使用實(shí)驗(yàn)技術(shù)的目的并不是為了匆忙的發(fā)表成果。現(xiàn)在,，在HCV感染和復(fù)制中允許的不用組織培養(yǎng)和HCV動(dòng)物模型的方法已經(jīng)妨礙了丙肝的病因?qū)W研究,。在這個(gè)問(wèn)題上，Mercer et al.說(shuō)明在研究此病方面,，用HCV感染小鼠是可行的,，并描述了一個(gè)有價(jià)值的動(dòng)物模型。
丙肝在急性期不易被發(fā)現(xiàn)是因?yàn)槿鄙倜黠@的,、特殊的癥狀,，盡管已經(jīng)有肝損傷和肝轉(zhuǎn)氨酶釋放入血。與乙肝感染只有很少部分轉(zhuǎn)為慢性相反,，有50%或更多的丙肝急性感染患者有持續(xù)感染,。在這些患者中，約20%有慢性肝病,。慢性病肝的這種大規(guī)模流行使得在肝移植中,，丙肝患者占有最高比例。
為使HCV成功感染小鼠,，Mercer et al.將人肝細(xì)胞移植到免疫缺乏的轉(zhuǎn)基因小鼠（SCID/灰色系,，SCID純合子遺傳特性），即攜帶血清蛋白促進(jìn)劑控制的尿激酶型纖溶酶原激活劑基因的小鼠（Alb-uPA小鼠）,。圖1.純合子Alb-uPA小鼠的病毒感染僅持續(xù)4-5周以上,。短持續(xù)期感染是由于將人肝細(xì)胞移植到這些小鼠的低存活率。大約75%接種了丙肝患者血清的純合子Alb-uPA小鼠發(fā)生了HCV效價(jià),，達(dá)到3×10 4～3×10 6倍/毫升血,，并且一般持續(xù)15～17周，甚至在一只小鼠中達(dá)到35周,。作者得出結(jié)論為：在接種后,，病毒效價(jià)大約上升了3log。數(shù)據(jù)顯示,，這種感染可以系列傳代,。
值得一提的是，在很多實(shí)驗(yàn)室均無(wú)成功后,，作者提出了兩個(gè)已被尋找已久的項(xiàng)目,，即小鼠肝臟在人肝細(xì)胞下的再生和有重大意義的小鼠HCV感染模型的建立，Rhim et al. 提出新生Alb-uPA小鼠的受損肝臟可以通過(guò)移植小鼠或大鼠的肝細(xì)胞而再生,。近來(lái),，Dandry et al.報(bào)導(dǎo)將人肝細(xì)胞移植到uPA/RGG-2小鼠肝臟。在聯(lián)合肝臟中，人肝細(xì)胞占大約15%的細(xì)胞,。在Mercer et al.的報(bào)告中,，圖3b顯示，通過(guò)人肝細(xì)胞,，小鼠肝臟有大于50%的再生,。但移植灶的組織學(xué)顯示沒(méi)有足夠細(xì)節(jié)的說(shuō)明與論斷。如果作者使用的抗人肝細(xì)胞抗體確實(shí)很特殊,，那么他們的論文為成功肝移植和移植后人肝細(xì)胞的生長(zhǎng)提供了很好的證據(jù),。作者使用的另外一個(gè)重要指標(biāo)是聯(lián)合肝臟小鼠中，人血清蛋白的生成,。（提示信息：盡管題目給人的印象是感染小鼠中有人的肝臟,，事實(shí)上是小鼠肝臟中含有不同比例的人肝細(xì)胞。）
感染小鼠血中的病毒效價(jià)很高--高于或等同于慢性病肝患者的效價(jià),。對(duì)小鼠肝臟中人細(xì)胞HCV的復(fù)制介導(dǎo)RNA（反ative鏈）的檢測(cè)和對(duì)western-blot的分析顯示：在感染過(guò)程中病毒蛋白的表達(dá)可以為病毒感染人肝細(xì)胞提供有力證據(jù),。
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中的主要困惑是Mercer et a.l檢測(cè)到HCV染色體鏈（正相鏈）存在時(shí)間比復(fù)制鏈的時(shí)間要長(zhǎng)的多,。如果病毒停止復(fù)制,，染色體鏈的長(zhǎng)時(shí)間存在是不正常的。這個(gè)問(wèn)題可以通過(guò)施行連續(xù)測(cè)量不發(fā)生復(fù)制的小鼠（如,，非移植小鼠）的病毒效價(jià)來(lái)決定病毒可以在小鼠中持續(xù)多長(zhǎng)時(shí)間,。這些實(shí)驗(yàn)可以增強(qiáng)裸鼠系列傳代的重要證據(jù)。
Mercer et al.描述的系統(tǒng)是試驗(yàn)性的并且需要特殊的實(shí)驗(yàn)來(lái)分離和移植人肝臟,，需要保持一個(gè)脆弱的免疫缺乏小鼠的種群,。此小鼠由于凝血因子的缺乏，新生死亡率約35%,。
我懷疑不會(huì)有很多的病毒學(xué)家會(huì)因此篇文章而轉(zhuǎn)向丙肝的研究,。無(wú)論如何，這個(gè)結(jié)果會(huì)在試驗(yàn)抗病毒藥物研究上產(chǎn)生重大影響,，并且如果無(wú)錯(cuò)誤,，這是一個(gè)小鼠HCV感染模型可行性原則上的證明。普遍認(rèn)為,，在人類慢性丙肝病例中,，肝細(xì)胞損傷不是由HCV感染直接引起，而是感染的肝細(xì)胞被細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞攻擊而解體的結(jié)果,。我向作者和其他可能使用并優(yōu)化這個(gè)系統(tǒng)的人提出的問(wèn)題是：這些小鼠是僅限于移植了人肝細(xì)胞而發(fā)生了肝疾病,，和免疫抑制的小鼠是否會(huì)感染病毒但不發(fā)病,？
順便提及,，病毒性肝炎的alphabet soup 分型已經(jīng)擴(kuò)展到6個(gè)病毒型。
HCV感染小鼠模型
純合子SCID/灰 × 純合子Alb-uPA
↓
免疫缺陷純合子Alb-uPA
↓
新生肝損傷小鼠
↓ 移植
↓←--------人肝細(xì)胞
接種丙肝患者血清 部分鼠肝有人肝細(xì)胞再生
↓
聯(lián)合肝臟小鼠
↓ 小鼠感染
