微生物學(xué)報(bào) Acta Microbiologica Sinica
48(2)：202~206; 4 February 2008
*通訊作者,。E-mail: [email protected]
作者簡(jiǎn)介: 儲(chǔ)衛(wèi)華(1971. ),男, 江蘇東臺(tái)人, 博士, 副教授, 主要從事微生物學(xué)與免疫學(xué),、生物工程等方面的研究。Tel: +86-25-83271323;
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收稿日期: 2007-10-18; 修回日期: 2007-11-19
ISSN 0001-6209; CN11995/Q
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嗜水氣單胞菌菌蛻的制備及其對(duì)銀鯽的口服免疫
儲(chǔ)衛(wèi)華1, 莊禧懿1, 陸承平2*
(1中國(guó)藥科大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院, 南京 210009) (2南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院, 南京 210095)
摘要：菌蛻系統(tǒng)是一個(gè)自身具有佐劑性質(zhì)的新型疫苗體系, 不含細(xì)胞質(zhì)內(nèi)容物但具有細(xì)菌的完整表面抗原結(jié)構(gòu), 可誘導(dǎo)機(jī)體的體液,、細(xì)胞免疫應(yīng)答及增強(qiáng)黏膜免疫反應(yīng),。本研究通過(guò)將帶有裂解基因E的質(zhì)粒pElysis轉(zhuǎn)化至嗜水氣單胞菌J-1株中, 對(duì)Ah J-1(pElysis)進(jìn)行溫度誘導(dǎo), 溫度從28℃升至42, ℃每隔15min檢測(cè)菌液的OD600值, 測(cè)定其溶菌動(dòng)力學(xué), 并做無(wú)菌檢驗(yàn), 用掃描電鏡觀察裂解后的細(xì)菌形態(tài), 研究其作為口服疫苗對(duì)銀鯽的效果。結(jié)果顯示, 通過(guò)溫度誘導(dǎo), 嗜水氣單胞菌J-1(pElysis)OD值在誘導(dǎo)30min后開始持續(xù)下降, 75min時(shí)開始趨于平穩(wěn), 到120min溶菌效率達(dá)99.99%, 誘導(dǎo)16h后進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn), 證實(shí)其無(wú)活菌,。掃描電鏡觀察絕大部分菌體經(jīng)誘導(dǎo)后形成菌蛻, 細(xì)胞兩端有溶菌通道,。動(dòng)物試驗(yàn)表明, 用菌蛻口服免疫的銀鯽, 在第5周產(chǎn)生較高的凝集抗體, 達(dá)到27, 并能維持2周; 而甲醛滅活苗組為26, 維持時(shí)間僅一周; 生理鹽水對(duì)照組效價(jià)僅2。攻擊試驗(yàn)表明, 菌蛻疫苗組和甲醛滅活疫苗組對(duì)嗜水氣單胞菌強(qiáng)毒株J-1的攻擊均有保護(hù)作用, 其相對(duì)保護(hù)率分別為16/20(78.95%)和12/20(57.9%), 顯示菌蛻疫苗比普通滅活疫苗能更有效地激活機(jī)體的免疫保護(hù),。
關(guān)鍵詞：嗜水氣單胞菌; 菌蛻; 疫苗
中圖分類號(hào)：Q939.91 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0001-6209 (2008) 02-0202-05
嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila, Ah)能夠引致淡水魚等的敗血癥和人的腹瀉等[1],。治療和預(yù)防細(xì)菌性魚病主要依賴抗生素, 這不僅會(huì)引起魚類生理上的障礙及藥物殘留、環(huán)境污染,、水中有益菌群失調(diào)等一系列問(wèn)題發(fā)生, 而且會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌的抗藥性并會(huì)潛在影響人類細(xì)菌性傳染病的防治,。由于魚類已經(jīng)具有專門的免疫器官和初步的特異性免疫防御機(jī)制, 接種疫苗可誘導(dǎo)魚體免疫應(yīng)答, 從而達(dá)到防治魚類細(xì)菌性病害的目的。魚類疫苗免疫主要采用浸泡免疫和肌肉注射免疫兩種方法, 二者各有優(yōu)缺點(diǎn)：浸泡免疫方便, 但效果差; 而肌肉注射免疫效果雖然較好, 但因其既耗費(fèi)時(shí)間, 又耗費(fèi)人力而很難推廣應(yīng)用,。鑒于魚類疫苗免疫方面存在的問(wèn)題, 選擇一種能口服, 并能有效刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的疫苗成為研究 熱點(diǎn),。
菌蛻(Bacterial ghosts, BGs)是一種具有佐劑性質(zhì)并能攜帶外源抗原的新型疫苗遞送體系, 它是革蘭氏陰性菌被噬菌體PhiX174的裂解基因E裂解后形成的完整細(xì)菌空殼, 雖不含有胞漿成分, 但仍保持細(xì)菌細(xì)胞形態(tài)、黏附性,、細(xì)菌表面抗原性等特性,。由于它具有完整的細(xì)菌表面抗原結(jié)構(gòu), 所以它能直接作為疫苗使用, 利用基因工程手段, 可以非常便利地將外源抗原蛋白插入菌蛻的內(nèi)膜、外膜或周質(zhì)等多個(gè)部位, 構(gòu)建重組菌蛻多價(jià)疫苗,。菌蛻疫苗具有制備方法簡(jiǎn)便,、安全性好、不需冷藏, 并可以用來(lái)制備多價(jià)聯(lián)合疫苗等優(yōu)點(diǎn),。因此, 菌蛻技術(shù)已成為一項(xiàng)研究開發(fā)新型基因工程疫苗的平臺(tái)技術(shù)[2~7],。本試驗(yàn)以常用的鯉科魚銀鯽為試驗(yàn)動(dòng)物, 以淡水魚常見(jiàn)的病原菌嗜水
儲(chǔ)衛(wèi)華等：嗜水氣單胞菌菌蛻的制備及其對(duì)銀鯽的口服免疫. / 微生物學(xué)報(bào)(2008) 48(2) 203
氣單胞菌為對(duì)象, 將裂解基因E質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)入, 經(jīng)熱誘導(dǎo)方法高效制備具有完整外膜的菌蛻, 研究其裂解效率、制備條件,、形態(tài)以及作為口服疫苗對(duì)鯽的免疫效果, 為進(jìn)一步研發(fā)有效的菌蛻疫苗和佐劑形式奠定了良好的基礎(chǔ),。
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