微生物學(xué)報(bào)Acta Microbiologica Sinica
48(3): 317~322; 4 March 2008
基金項(xiàng)目: 國(guó)家“973 項(xiàng)目”(2004CB719604); 國(guó)家自然科學(xué)基金(30470386)
*通訊作者,。Tel: +86-531-88362928; E-mail: [email protected]
作者簡(jiǎn)介: 盛多紅(1972.), 男, 山東陽谷人, 博士, 主要從事微生物分子生物學(xué)研究,。E-mail: [email protected]
收稿日期: 2007-07-11; 修回日期: 2007-08-24
ISSN 0001-6209; CN11-1995/Q
盛多紅, 朱珊珊, 李銘峰, 焦建東, 倪金鳳, 申玉龍*
(山東大學(xué)微生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 濟(jì)南 250100)
摘要: RecA/Rad51/RadA 家族蛋白是細(xì)胞內(nèi)重要的重組修復(fù)蛋白, 在功能上非常保守,。研究發(fā)現(xiàn)在細(xì)菌、真核生物,、甲烷古菌和嗜鹽古菌細(xì)胞內(nèi)RecA/Rad51/RadA 均可以受紫外線輻射誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄。而對(duì)極端嗜熱古菌中的RadA 輻射可誘導(dǎo)性仍存在爭(zhēng)議。通過體外表達(dá)極端嗜熱古菌Sulfolobus tokodaii的RadA 蛋白, 制備抗體, 利用免疫學(xué)方法并結(jié)合RT-PCR 分析, 對(duì)嗜熱古菌S. tokodaii 中RadA 的輻射誘導(dǎo)進(jìn)行了研究。經(jīng)過100J/m2 和200J/m2 UV 輻照處理, radA 基因的轉(zhuǎn)錄分別上調(diào)了2 倍和3倍, 同時(shí)RadA 蛋白的表達(dá)分別上升了1.5 倍和1 倍,。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明S. tokodaii 中RadA 可以被紫外線輻射誘導(dǎo)表達(dá), 證實(shí)了極端嗜熱古菌S. tokodaii 細(xì)胞中存在DNA 損傷誘導(dǎo)反應(yīng)的觀點(diǎn)。
關(guān)鍵詞: 嗜熱古菌; RadA; 輻射可誘導(dǎo)性; DNA 修復(fù)
中圖分類號(hào): Q936 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼: A 文章編號(hào): 0001-6209 (2008) 03-0317-06
紫外線(UV)可以造成DNA 損傷, 包括堿基損傷,、單鏈與雙鏈斷裂,、鏈間交聯(lián)及DNA 蛋白質(zhì)交聯(lián)等輻射損傷形式, 如得不到及時(shí)而有效的修復(fù), 或發(fā)生錯(cuò)誤修復(fù), 就會(huì)危害細(xì)胞的生存, 并可能導(dǎo)致人類嚴(yán)重疾病。對(duì)DNA 輻射損傷的修復(fù)涉及到多種修復(fù)蛋白, 其中同源重組修復(fù)蛋白R(shí)ecA/Rad51 在這一過程中扮演重要角色[1,2],。RecA/Rad51 分別是細(xì)菌和真核生物重組修復(fù)的關(guān)鍵酶。當(dāng)DNA 受到損傷時(shí), RecA/Rad51 的表達(dá)受到誘導(dǎo), 因此, RecA/Rad51 的表達(dá)水平常被用作檢測(cè)UV 輻射的指標(biāo)之一[3～5],。RadA 是古菌中RecA/Rad51蛋白同系物, 同樣具有DNA 重組活性, 在DNA 重組修復(fù)中起重要作用[6,7],。研究發(fā)現(xiàn), 和真核生物或細(xì)菌的RecA/Rad51 一樣, 甲烷古菌和嗜鹽古菌中的RadA同樣具有UV 輻射損傷誘導(dǎo)活性[8,9]。極端嗜熱古菌主要生活在熱泉和深?；鹕絿娍诟浇雀邷丨h(huán)境中,分屬于廣古菌和泉古菌,。早在1996 年, Sandler 等[7]
報(bào)道生活于高溫環(huán)境下泉古菌Sulfolobus solfataricus中的RadA 不受UV 損傷誘導(dǎo)表達(dá)。Komori 等[10]發(fā)現(xiàn)廣古菌Pyrococcus furiosus 的RadA 在細(xì)胞內(nèi)組成型表達(dá), 不受UV 輻射的誘導(dǎo), 他們對(duì)此的一種解釋是高溫誘導(dǎo)了RadA 的持續(xù)表達(dá),。然而我們?cè)谘芯苛硪粋€(gè)嗜熱泉古菌S. tokodaii 的損傷修復(fù)系統(tǒng)時(shí)發(fā)現(xiàn)其具有DNA 損傷誘導(dǎo)反應(yīng),。為了進(jìn)一步探明S. tokodaii 細(xì)胞中RadA 的UV 損傷誘導(dǎo)情況, 本文利用大腸桿菌異源表達(dá)S. tokodaii 中的RadA 蛋白, 制備了RadA 抗體。通過免疫學(xué)分析及RT-PCR 分析證實(shí)了S. tokodaii 中的RadA 可以被UV損傷誘導(dǎo)表達(dá),。
全文下載：超嗜熱古菌Sulfolobus tokodaii RadA 蛋白的克隆表達(dá)及其輻射可誘導(dǎo)性
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