微生物學(xué)報(bào)Acta Microbiologica Sinica
48(9)：1227~1233;4 September 2008
志賀毒素2型噬菌體 Min27的stx2基因突變株構(gòu)建及其感染特性
蘇良科1,，嚴(yán)亞賢1,，陸承平1,2*
（1上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院,，上海市獸醫(yī)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200240）
（2南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疫病診斷與免疫重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，南京 210095）
摘要：【目的】通過(guò)構(gòu)建一株stx2基因突變的志賀毒素2型噬菌體，來(lái)觀察它對(duì)不同血清型大腸桿菌的感染特性,。【方法】利用 噬菌體的Red重組系統(tǒng),，將氯霉素抗性基因（cat）插入到大腸桿菌O157:H7 Min27株的stx2基因中,，獲得O157:H7 Min27的突變菌株Min27(Δstx∷cat)。用絲裂霉素對(duì)該突變菌株進(jìn)行誘導(dǎo),，結(jié)合抗性標(biāo)記和PCR方法篩選出一株突變的志賀毒素2型噬菌體, 命名為 Min27(Δstx∷cat),。采用雙層瓊脂平板法和氯霉素抗性篩選的方法，觀察 Min27(Δstx∷cat) 感染21株不同血清型大腸桿菌后的裂解和溶原轉(zhuǎn)換情況,?！窘Y(jié)果】2株血清型分別為Ｏ60和Ｏ138的大腸桿菌可以被 Min27(Δstx∷cat)溶原感染，表現(xiàn)出對(duì)氯霉素的抗性,，但沒(méi)有形成噬菌斑,，而大腸桿菌MG1655株既可以被溶原又可以被裂解。溶原的菌株經(jīng)絲裂霉素誘導(dǎo)后,，能釋放出感染性的 Min27(Δstx∷cat)顆粒,，并對(duì)大腸桿菌MC1061進(jìn)行裂解形成噬菌斑?！窘Y(jié)論】 Min27(Δstx∷cat)可以感染和溶原特定的大腸桿菌,，且溶原菌株能釋放出原感染性的噬菌體，顯示出 Min27噬菌體具有攜帶外源基因在若干不同血清型的大腸桿菌間水平轉(zhuǎn)移的能力,，為進(jìn)一步研究Stx噬菌體的感染機(jī)理和志賀毒素表達(dá)調(diào)控奠定了基礎(chǔ),。
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