微生物學(xué)報(bào)  4 May 2009, 49(5):597-602

重組β-葡萄糖苷酶生產(chǎn)龍膽低聚糖的工藝條件優(yōu)化

劉玲玲 ,，朱松 ,，朱婷 ，張敏 ,，吳敬 ,，陳堅(jiān)

1江南大學(xué)，食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,，無錫 214122

2江南大學(xué)生物工程學(xué)院,，工業(yè)生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，無錫 214122

摘要：【目的】β-葡萄糖苷酶可用于酶法生產(chǎn)龍膽低聚糖,。為了給龍膽低聚糖的生產(chǎn)提供大量的酶來源,，構(gòu)建基因工程菌表達(dá)黑曲霉（CMI CC 324626）β-葡萄糖苷酶基因（bgl ）并研究重組酶生產(chǎn)龍膽低聚糖的工藝條件?！痉椒ā繉gl克隆到表達(dá)載體pPIC9K ,，轉(zhuǎn)化畢赤酵母（Pichia pastoris）KM71 。表達(dá)產(chǎn)物通過HPLC和LC-MS鑒定了其可用于生產(chǎn)龍膽低聚糖的轉(zhuǎn)苷活性,，并對(duì)酶轉(zhuǎn)化葡萄糖生產(chǎn)龍膽低聚糖的反應(yīng)條件進(jìn)行了優(yōu)化,。【結(jié)果】實(shí)現(xiàn)了β-葡萄糖苷酶的過量表達(dá),。當(dāng)?shù)孜锲咸烟菨舛葹?0%,，反應(yīng) pH4.5，溫度為60℃,，加酶量為每克葡萄糖60U,，添加1mmol/L 的K+ ，轉(zhuǎn)化周期為48h ,，龍膽低聚糖累計(jì)達(dá)到最大為 50g/L,。【結(jié)論】本研究是國(guó)內(nèi)外首次利用重組酶酶法生產(chǎn)龍膽低聚糖的報(bào)道,。

關(guān)鍵詞：龍膽低聚糖,；酶轉(zhuǎn)化,；β-葡萄糖苷酶；表達(dá),；畢赤酵母

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