微生物學(xué)報(bào) 4 May 2009, 49(5):597-602
重組β-葡萄糖苷酶生產(chǎn)龍膽低聚糖的工藝條件優(yōu)化
劉玲玲 ,,朱松 ,,朱婷 ,張敏 ,,吳敬 ,,陳堅(jiān)
1江南大學(xué),食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,,無錫 214122
2江南大學(xué)生物工程學(xué)院,,工業(yè)生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,無錫 214122
摘要:【目的】β-葡萄糖苷酶可用于酶法生產(chǎn)龍膽低聚糖,。為了給龍膽低聚糖的生產(chǎn)提供大量的酶來源,,構(gòu)建基因工程菌表達(dá)黑曲霉(CMI CC 324626)β-葡萄糖苷酶基因(bgl )并研究重組酶生產(chǎn)龍膽低聚糖的工藝條件?!痉椒ā繉gl克隆到表達(dá)載體pPIC9K ,,轉(zhuǎn)化畢赤酵母(Pichia pastoris)KM71 。表達(dá)產(chǎn)物通過HPLC和LC-MS鑒定了其可用于生產(chǎn)龍膽低聚糖的轉(zhuǎn)苷活性,,并對(duì)酶轉(zhuǎn)化葡萄糖生產(chǎn)龍膽低聚糖的反應(yīng)條件進(jìn)行了優(yōu)化,。【結(jié)果】實(shí)現(xiàn)了β-葡萄糖苷酶的過量表達(dá),。當(dāng)?shù)孜锲咸烟菨舛葹?0%,,反應(yīng) pH4.5,溫度為60℃,,加酶量為每克葡萄糖60U,,添加1mmol/L 的K+ ,轉(zhuǎn)化周期為48h ,,龍膽低聚糖累計(jì)達(dá)到最大為 50g/L,。【結(jié)論】本研究是國(guó)內(nèi)外首次利用重組酶酶法生產(chǎn)龍膽低聚糖的報(bào)道,。
關(guān)鍵詞:龍膽低聚糖,;酶轉(zhuǎn)化,;β-葡萄糖苷酶;表達(dá),;畢赤酵母
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