1.如果誘餌蛋白對酵母細胞是有毒的,，該怎么辦,？
    在某些情況下,，在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)不好的菌珠可以在固體培養(yǎng)基上生長得很好。首先重懸克隆于1ml的SD/–Trp,，接著將重懸液平鋪于5 個100-mm的SD/–Trp平板,，在30℃下溫浴，直至平板上的克隆相互粘在一起,。用5ml 0.5X YPDA刮下每塊板上的克隆,，并收集到一管中，這樣就可以使用這個細胞重懸液進行正常的雜交反應,。

2.如果誘餌蛋白能直接激活報告基因的表達,，該如何處理？
    該蛋白很可能有轉錄激活域,，是個轉錄因子,。可以通過基因重組切掉轉錄激活域,，然后重新檢測其是否自激活,，但要注意重組也有可能破壞蛋白之間的互作。

3.轉化效率太低怎么辦,？
    可以采用以下方法解決：
1) 檢測一下DNA的純度,，如果可以的話，重新用乙醇純化,。
2) DNA-BD/誘餌蛋白很可能是有毒的,。
3) 不適當的培養(yǎng)基，重新配制培養(yǎng)基,，并做對照轉化,。
4) 檢測pGBT9對照載體的轉化效率，放置于SD/–Trp平板上,，轉化效率應該在1 x 105 colonies/mg DNA以上,。

4.雜交效率不高，該如何處理,？
    在雜交中,，預轉化的誘餌細胞的數量可能不夠。當對誘餌菌株進行液體培養(yǎng)過夜時，應挑選大的,、新鮮的克隆進行培養(yǎng),，經過離心和重懸后，再使用血球計對細胞進行計數,。密度應該在1 x 109/ml,。
    一個甚至兩個融合蛋白對酵母細胞有毒。你可以通過重組方法來減輕毒性,，同時又能保證蛋白的相互作用,。或者使用表達水平較低的載體,。也可以在瓊脂平板或濾膜上進行雜交,。但同時必須作雜交對照實驗。