蛋白質(zhì)的定量,,是生物化學(xué)中最常用,、最基本的分析方法之一,。目前常用的有以下幾種方法:定氮法,、紫外吸收法,、Lowry法(Folin-酚試劑法)、Bradford法(考馬斯亮藍(lán)法),、BCA法等:
定氮法比較繁復(fù),,但較準(zhǔn)確,往往以定氮法測(cè)定的蛋白質(zhì)作為其他方法的標(biāo)準(zhǔn)蛋白,。
紫外吸收法簡(jiǎn)便,、靈敏、快速,,不消耗樣品,,測(cè)定后樣品仍能回收利用。缺點(diǎn)是準(zhǔn)確度較差,,干擾物質(zhì)多,,用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定蛋白質(zhì)含量時(shí),對(duì)于那些與標(biāo)準(zhǔn)蛋白中酪氨酸和色氨酸含量差異大的蛋白質(zhì),,有一定的誤差,。
Lowry法是較早發(fā)展的一種靈敏的檢測(cè)方法,最低靈敏度為5微克,,通常測(cè)定范圍20-250微克,。優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高,缺點(diǎn)是費(fèi)時(shí)較長(zhǎng),,要精確控制操作時(shí)間,,標(biāo)準(zhǔn)曲線不是嚴(yán)格的直線形式,且專一性差,,干擾物質(zhì)較多,。
Bradford法是靈敏度更高的一種方法,優(yōu)點(diǎn)有:靈敏度高,,比lowry法高4倍左右,,最低檢測(cè)達(dá)1-5微克,;測(cè)定快速、簡(jiǎn)便,,染色穩(wěn)定,;干擾物質(zhì)少。確點(diǎn)是用于不同蛋白質(zhì)測(cè)定時(shí)有較大的偏差,;仍有干擾,,如SDS、去污劑,、Triton x100等,;標(biāo)準(zhǔn)曲線有輕微的非線性。