近日,鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)實驗中心李燕杰博士等發(fā)表研究論文,,她們采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)分析法,,在國內(nèi)首次從人胎盤cDNA文庫中,分離出人乙酰肝素酶(HPA)編碼基因全序列,,并成功地構(gòu)建,、篩選出有效的蛋白表達載體和細胞株。這一結(jié)果為進一步研究HPA的功能特性以及臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ),。
據(jù)介紹,,HPA是一種內(nèi)源性β-葡萄糖酸酯酶,,可識別硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)的多糖側(cè)鏈-硫酸肝素鏈(HS)的特異結(jié)構(gòu),并將其降解為10~20個糖單位大小的短糖鏈,。HPA是迄今發(fā)現(xiàn)的惟一作用于細胞外基質(zhì)多聚糖成分的酶——即腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)鍵酶,,可破壞細胞外基質(zhì)和基底膜,削弱細胞間質(zhì)的屏障功能,,促進腫瘤細胞侵入基質(zhì)和血管壁,在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中起重要作用,。
為研究獲取HPA編碼基因全系列,,研究人員選用人胎盤cDNA文庫為模板,通過分離HPA蛋白編碼基因,、構(gòu)建HPA真核表達載體pCDNA4/Myc-His-HPA,、轉(zhuǎn)染COS-7細胞、篩選陽性細胞株及檢測HPA活性等一系列研究,,成功地分離出HPA編碼基因全序列,。經(jīng)將該全長基因克隆入真核表達載體,在哺乳動物細胞中表達出有活性的HPA蛋白,。同時,,檢測HPA在哺乳動物細胞中的表達特性時還發(fā)現(xiàn),該酶的mRNA長度為1.6kb,,顯示細胞完整轉(zhuǎn)錄了HPA全長編碼基因,,可翻譯出完整的HPA蛋白。此結(jié)果進一步驗證了HPA在蛋白水平被加工而成為有活性的酶這一成熟過程,。另據(jù)李燕杰介紹,,經(jīng)對HPA活性反復(fù)檢測顯示,HPA大部分定位于COS-7和CHO細胞內(nèi),,沒有或僅有少數(shù)被分泌到細胞外,,其表達和分泌受生理條件的嚴格調(diào)控,以免過度表達引起各種疾病,。然而,,HPA在腫瘤細胞中,則表達水平增強,,且被分泌到細胞外基質(zhì)中,,從而促進腫瘤轉(zhuǎn)移,這就是其成為腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)鍵酶的關(guān)鍵所在,。對于這一機理,,還有待進一步研究。本研究篩選出穩(wěn)定表達成熟的HPA的CHO細胞株,,將為進一步研究HPA的結(jié)構(gòu)與功能,,研發(fā)其抗體及抑制劑提供嶄新的思路和工具,。