近日,，鄭州大學醫(yī)學實驗中心李燕杰博士等發(fā)表研究論文,，她們采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）分析法，在國內(nèi)首次從人胎盤cDNA文庫中,，分離出人乙酰肝素酶（HPA）編碼基因全序列,，并成功地構(gòu)建、篩選出有效的蛋白表達載體和細胞株,。這一結(jié)果為進一步研究HPA的功能特性以及臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ),。  

        據(jù)介紹，HPA是一種內(nèi)源性β-葡萄糖酸酯酶,，可識別硫酸乙酰肝素蛋白多糖（HSPG）的多糖側(cè)鏈-硫酸肝素鏈（HS）的特異結(jié)構(gòu),，并將其降解為10~20個糖單位大小的短糖鏈。HPA是迄今發(fā)現(xiàn)的惟一作用于細胞外基質(zhì)多聚糖成分的酶——即腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)鍵酶,，可破壞細胞外基質(zhì)和基底膜,，削弱細胞間質(zhì)的屏障功能，促進腫瘤細胞侵入基質(zhì)和血管壁,，在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中起重要作用,。  

        為研究獲取HPA編碼基因全系列，研究人員選用人胎盤cDNA文庫為模板，通過分離HPA蛋白編碼基因,、構(gòu)建HPA真核表達載體pCDNA4/Myc-His-HPA,、轉(zhuǎn)染COS-7細胞、篩選陽性細胞株及檢測HPA活性等一系列研究,，成功地分離出HPA編碼基因全序列,。經(jīng)將該全長基因克隆入真核表達載體，在哺乳動物細胞中表達出有活性的HPA蛋白,。同時,，檢測HPA在哺乳動物細胞中的表達特性時還發(fā)現(xiàn)，該酶的mRNA長度為1.6kb,，顯示細胞完整轉(zhuǎn)錄了HPA全長編碼基因,，可翻譯出完整的HPA蛋白。此結(jié)果進一步驗證了HPA在蛋白水平被加工而成為有活性的酶這一成熟過程,。另據(jù)李燕杰介紹,，經(jīng)對HPA活性反復(fù)檢測顯示，HPA大部分定位于COS-7和CHO細胞內(nèi),，沒有或僅有少數(shù)被分泌到細胞外，其表達和分泌受生理條件的嚴格調(diào)控,，以免過度表達引起各種疾病,。然而，HPA在腫瘤細胞中,，則表達水平增強,，且被分泌到細胞外基質(zhì)中，從而促進腫瘤轉(zhuǎn)移,，這就是其成為腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)鍵酶的關(guān)鍵所在,。對于這一機理，還有待進一步研究,。本研究篩選出穩(wěn)定表達成熟的HPA的CHO細胞株,，將為進一步研究HPA的結(jié)構(gòu)與功能，研發(fā)其抗體及抑制劑提供嶄新的思路和工具,。