近日,，鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心李燕杰博士等發(fā)表研究論文，她們采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）分析法,，在國(guó)內(nèi)首次從人胎盤cDNA文庫(kù)中,，分離出人乙酰肝素酶（HPA）編碼基因全序列，并成功地構(gòu)建,、篩選出有效的蛋白表達(dá)載體和細(xì)胞株,。這一結(jié)果為進(jìn)一步研究HPA的功能特性以及臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。  

        據(jù)介紹,，HPA是一種內(nèi)源性β-葡萄糖酸酯酶,，可識(shí)別硫酸乙酰肝素蛋白多糖（HSPG）的多糖側(cè)鏈-硫酸肝素鏈（HS）的特異結(jié)構(gòu)，并將其降解為10~20個(gè)糖單位大小的短糖鏈,。HPA是迄今發(fā)現(xiàn)的惟一作用于細(xì)胞外基質(zhì)多聚糖成分的酶——即腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)鍵酶,，可破壞細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜,，削弱細(xì)胞間質(zhì)的屏障功能，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵入基質(zhì)和血管壁,，在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中起重要作用,。  

        為研究獲取HPA編碼基因全系列，研究人員選用人胎盤cDNA文庫(kù)為模板,，通過分離HPA蛋白編碼基因,、構(gòu)建HPA真核表達(dá)載體pCDNA4/Myc-His-HPA、轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞,、篩選陽(yáng)性細(xì)胞株及檢測(cè)HPA活性等一系列研究,，成功地分離出HPA編碼基因全序列。經(jīng)將該全長(zhǎng)基因克隆入真核表達(dá)載體,，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)出有活性的HPA蛋白,。同時(shí)，檢測(cè)HPA在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)特性時(shí)還發(fā)現(xiàn),，該酶的mRNA長(zhǎng)度為1.6kb,，顯示細(xì)胞完整轉(zhuǎn)錄了HPA全長(zhǎng)編碼基因，可翻譯出完整的HPA蛋白,。此結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了HPA在蛋白水平被加工而成為有活性的酶這一成熟過程,。另?yè)?jù)李燕杰介紹，經(jīng)對(duì)HPA活性反復(fù)檢測(cè)顯示,，HPA大部分定位于COS-7和CHO細(xì)胞內(nèi),，沒有或僅有少數(shù)被分泌到細(xì)胞外，其表達(dá)和分泌受生理?xiàng)l件的嚴(yán)格調(diào)控,，以免過度表達(dá)引起各種疾病,。然而，HPA在腫瘤細(xì)胞中,，則表達(dá)水平增強(qiáng),，且被分泌到細(xì)胞外基質(zhì)中，從而促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移,，這就是其成為腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)鍵酶的關(guān)鍵所在,。對(duì)于這一機(jī)理，還有待進(jìn)一步研究,。本研究篩選出穩(wěn)定表達(dá)成熟的HPA的CHO細(xì)胞株,，將為進(jìn)一步研究HPA的結(jié)構(gòu)與功能，研發(fā)其抗體及抑制劑提供嶄新的思路和工具,。