日前,廈門伯賽基因轉錄技術有限公司實驗室的研究人員對表達人ω干擾素(IFN-ω)的巴斯德畢赤酵母的發(fā)酵條件進行研究,,確定出最佳發(fā)酵控制條件,,使ω干擾素表達量達到90毫克/升,比搖瓶培養(yǎng)的表達量提高了8倍。
ω干擾素是奧地利科學家Rudelf Hamptman等于1985年發(fā)現(xiàn)的I型干擾素,,其與α干擾素功能相近,,但抗原性不同。近年來,,研究人員發(fā)現(xiàn)人ω干擾素具有同α干擾素,、γ干擾素以及腫瘤壞死因子相似的,較強的抗病毒復制,、抗細胞增殖等作用,,其臨床應用已逐漸展開。如美國Biomedicines公司的重組人ω干擾素用于治療丙型肝炎的臨床試驗已經(jīng)進入Ⅱ期臨床,。軍事醫(yī)學科學院微生物流行病研究所研制的重組人ω干擾素噴鼻劑也已開始臨床試驗,。
近兩年,廈門伯賽基因轉錄技術有限公司實驗室構建了重組人ω干擾素的分泌型畢赤酵母表達系統(tǒng)(pPIC9K IFN-ωGS115),。ω干擾素的搖瓶表達量約為10毫克/升,,并且分離得到糖基化ω干擾素,比活達到1×108國際單位/毫克。目前,,該公司已經(jīng)完成實驗室規(guī)模的分離和純化工作,。為了進一步研究開發(fā),該公司近期對人ω干擾素基因工程菌的發(fā)酵條件進行了實驗研究,。
研究人員設計了三因素三水平正交試驗方案,,采用FBS培養(yǎng)基(二水硫酸鈣0.93克/升,硫酸鉀18.2克/升,,氫氧化鉀4.13克/升,,甘油醇縮丙酮10.0克/升,磷酸26.7毫升/升,,酵母提取物10.0克/升,,七水硫酸鎂14.9克/升,14%的氨水50~70毫升,,PTM4.35毫升/升),,對pPIC9K IFN-ωGS115基因工程畢赤酵母菌進行發(fā)酵培養(yǎng),考察了不同溶氧,、甲醇濃度和pH值對ω干擾素表達量的影響,。發(fā)酵后用ELISA檢測發(fā)酵上清中目的蛋白濃度。根據(jù)檢測結果,,采用直觀分析法對正交試驗結果進行分析,。
研究結果表明,溶氧太低或甲醇濃度太高均容易使生長受抑制,,甚至造成菌體死亡,;而pH值對糖基化有重要影響,適當提高pH值有利于目的蛋白質(zhì)的糖基化修飾,。當發(fā)酵的條件為:用FBS培養(yǎng)基,,在5升的發(fā)酵罐內(nèi),控制溫度28℃,,溶氧50%,,甲醇濃度1%,pH值為7.0時,,ω干擾素表達量可達到90毫克/升,,比搖瓶表達量提高約8倍。