治療老年性癡呆中藥的藥效學(xué)研究評(píng)價(jià)探討
http://www.cde.org.cn 發(fā)布時(shí)間：2003/12/17 03:35:27 PM
治療老年性癡呆中藥的藥效學(xué)研究評(píng)價(jià)探討
審評(píng)一部藥理毒理組 黃芳華
進(jìn)入二十一世紀(jì),，全世界正步入全球老齡化時(shí)代,。老年性癡呆已成為心腦血管疾病和腫瘤之后的第四位疾病,，目前,，全世界65歲以上人群中老年性癡呆患病率約為5%。而老年性癡呆因其復(fù)雜的發(fā)病機(jī)理,，近期在防治上不可能取得突破性進(jìn)展,，故西方有專家預(yù)言，老年性癡呆將是21世紀(jì)人類第一殺手,，目前全球的AD病人估計(jì)在2000-2500萬(wàn)左右,。老年性癡呆對(duì)患者、家庭和社會(huì)都帶來(lái)巨大的壓力,，使得全世界對(duì)其給予眾多的關(guān)注,，抗老年性癡呆的研究成為老年醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的一個(gè)重要課題。
目前,，老年性癡呆的中藥新藥申報(bào)品種出現(xiàn),，而且有日漸增多的趨勢(shì)。在這種情況下,，探討中藥新藥的藥效學(xué)研究評(píng)價(jià)成為必需,。與大部分其它疾病不同的是，老年性癡呆的發(fā)病機(jī)理極其復(fù)雜,，藥效學(xué)研究評(píng)價(jià)尚有一定的難度,，本文根據(jù)現(xiàn)有的研究水平，對(duì)藥效學(xué)評(píng)價(jià)進(jìn)行初步的探索,。以下僅是個(gè)人觀點(diǎn),，錯(cuò)誤及片面之處在所難免，此文的撰寫目的是拋磚引玉,，希望更多的相關(guān)專家對(duì)此問(wèn)題進(jìn)行廣泛的討論,，以使評(píng)價(jià)更趨科學(xué)、合理,。
一,、老年性癡呆的概況
阿爾采末病(Alzheimer’s disease,AD)是一種發(fā)生于老年期或老年前期的一種慢性進(jìn)行性的神經(jīng)變性疾病,，以進(jìn)行性的記憶認(rèn)知障礙、人格改變?yōu)橹饕卣?，AD腦內(nèi)的主要病理改變?yōu)槔夏臧撸╯enile plaque,，SP）、神經(jīng)原纖維纏結(jié)（neurofibrillary tangle,NFT）及大量的神經(jīng)元丟失,，主要發(fā)生在前腦基底,、海馬和大腦皮層。一般稱之為老年性癡呆,。
從1907年報(bào)道第一例老年性癡呆病始,，全世界的醫(yī)學(xué)家為這一病癥進(jìn)行了不懈的探索，但直至21世紀(jì)的今日,，因其病因復(fù)雜,，目前尚未明確。關(guān)于其機(jī)理研究,，現(xiàn)在主要有以下幾種學(xué)說(shuō),，如基因?qū)W說(shuō)、膽堿能學(xué)說(shuō),、傳染學(xué)說(shuō),、鋁中毒學(xué)說(shuō)、自由基學(xué)說(shuō),、炎癥學(xué)說(shuō),、鈣超載學(xué)說(shuō)、代謝紊亂學(xué)說(shuō),，雖然各種假說(shuō)有其合理性的一面,，但均存在其局限性，不能全面解釋AD復(fù)雜,、廣泛的神經(jīng)系統(tǒng)病理變化,。但能肯定的是：AD的發(fā)病與機(jī)體衰老密切相關(guān)。近年來(lái),，對(duì)AD與淀粉樣蛋白的關(guān)系成為研究的熱點(diǎn),。
發(fā)病機(jī)理不明也影響了AD藥物的開(kāi)發(fā)。目前,，AD的治療尚無(wú)特效藥物,，其中乙酰膽堿酯酶抑制劑（Acetylcholinesterase inhibitor,AchEI）一直是開(kāi)發(fā)活躍、成果突出的領(lǐng)域,。它的開(kāi)發(fā)主要源于膽堿能學(xué)說(shuō),。從20世紀(jì)70年代一些科學(xué)家發(fā)現(xiàn)AD患者的膽堿能神經(jīng)元功能有不同比例的嚴(yán)重障礙，膽堿能缺陷反應(yīng)合成Ach的膽堿乙酰化酶（ChAT）的減少,，伴AchE表達(dá)下降,。因而改善膽堿能神經(jīng)元突觸傳遞，激活突觸后神經(jīng)元功能膽堿酯酶抑制劑減少Ach分解,，促進(jìn)突觸傳遞強(qiáng)度,，改善突觸后神經(jīng)元功能，這類藥物是目前治療AD的主要藥物,，對(duì)輕,、中度AD具有一定效果。已被FDA認(rèn)可并在多國(guó)上市的他克林,、安理申,、加蘭他敏等均屬AchEI類。從中草藥千層塔中提取的石杉?jí)A甲是一種生物活性高,，對(duì)真性膽堿酯酶具有選擇性的可逆性膽堿酯酶抑制劑,。
二、老年性癡呆相關(guān)動(dòng)物模型
因AD病因復(fù)雜,，故相應(yīng)的也缺乏嚴(yán)格意義的AD體內(nèi)外模型,，現(xiàn)在國(guó)內(nèi)外大部分體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)只能反映AD某一部分的改變,，因而不應(yīng)稱為AD模型。近年來(lái)許多學(xué)者正致力于尋找和研究AD動(dòng)物模型,，對(duì)AD模型報(bào)道也較多,，雖然分類各有不同，但大致可分為以下幾類[1,、2]
（一）膽堿能損傷致癡呆模型
1．穹窿-海馬傘切斷致癡呆大鼠模型 該模型是建立在AD認(rèn)知障礙的膽堿能假說(shuō)基礎(chǔ)上,，較好地模擬了AD前腦膽堿能系統(tǒng)的損害，而且造成了神經(jīng)損傷,，可用于觀察擬膽堿藥物的藥效學(xué)評(píng)價(jià),，還可觀察藥物對(duì)神經(jīng)功能損傷的修復(fù)作用，是老年性癡呆臨床前藥效學(xué)研究的重要模型,。該模型的不足之處是雖然具有學(xué)習(xí)記憶功能的損害,，但并不出現(xiàn)老年斑、神經(jīng)元纖維纏結(jié)和淀粉樣蛋白沉積形成等最內(nèi)典型的組織病理學(xué)特征,，也無(wú)AD病人全身多系統(tǒng)功能衰老的表現(xiàn),。
2．基底前腦注射鵝蒿蕈氨酸（ibotenic acid ,IBO）致癡呆模型大鼠 該模型屬興奮性毒素致基底核損害模型。通過(guò)該模型可反映導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶功能下降的病理基礎(chǔ)-基底前腦膽堿能神經(jīng)元缺失,，因而也是廣泛應(yīng)用的模型,。該類模型的缺陷是不能反映AD發(fā)生的病因，不能產(chǎn)生AD的病理學(xué)特征，如老年斑,、神經(jīng)原纖維纏結(jié)等,，這種興奮性毒素所產(chǎn)生的損害只能模型AD大腦皮層突觸膽堿能缺陷，而這些動(dòng)物的海馬ChAT則不受影響,。興奮性毒素還包括紅藻酸鈉,、N-甲基天門冬氨酸、使君子酸等,。紅藻氨酸也可誘導(dǎo)產(chǎn)大鼠基底核損害,，可使皮層ChAT損失40-50%，并與Ach水平,、HAChT和AchE活性的降低相平行,，而其他遞質(zhì)系統(tǒng)無(wú)明顯改變，而且在避暗試驗(yàn)中出現(xiàn)記憶保持障礙,，可作為潛在的動(dòng)物模型,，但紅藻酸鈉是一種強(qiáng)效的驚厥藥，能產(chǎn)生損害,，因此不如IBO應(yīng)用廣泛,。
3．東莨菪堿致膽堿能損傷擬癡呆小鼠 東莨菪堿為M膽堿能受體阻斷劑，可阻斷乙酰膽堿對(duì)M受體的激動(dòng)作用,，造成了學(xué)習(xí)記憶功能障礙,。但是該模型不直接引起膽堿能神經(jīng)缺失，而且缺乏研究AD病理生理所必需的特征,，如AD是一種進(jìn)行性不可逆變性,，而該模型為化學(xué)性模型，恢復(fù)快是其局限性,，可用于早期藥物的篩選,。
（二）老化致癡呆模型
1．自然衰老動(dòng)物 較常用的是自然衰老大鼠，24月齡以上,，另外也有采用老年狗或猴者,，該模型是較為接近AD實(shí)際病理改變的動(dòng)物模型，在此基礎(chǔ)上觀察老年性癡呆治療藥物能較好地反映藥物的作用機(jī)理和效果,。但是其不足之處有：（1）由于AD是一種不同于正常衰老的進(jìn)行性神經(jīng)功能衰退性疾病,，故老年動(dòng)物有其局限性，它只是部分模擬了與人正常衰老相關(guān)的神經(jīng)生化改變,，而不能全面模擬AD的變化,。（2）有實(shí)驗(yàn)材料較難得、需長(zhǎng)時(shí)間飼養(yǎng),、死亡率高,，實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)等缺點(diǎn)，大大限制了該模型的應(yīng)用。（3）老年動(dòng)物的健康狀況的差異,，以及在藥物吸收,、代謝和分布上的變異性，有時(shí)會(huì)產(chǎn)生統(tǒng)計(jì)學(xué)意義不確定的結(jié)果,。
2．快速老化小鼠（SAM） 快速老化小鼠分為快速老化亞系（senescence accelerated mouse/prone,SAM-P）及抗快速老化亞系（senescence accelerated mouse/resistance,SAM-R）,，它是由日本京都大學(xué)首次培育成功，經(jīng)20多代交配近繁,，獲得了遺傳性與病理表型一致,，符合近交系標(biāo)準(zhǔn)的新系列。SAM-P品系中,，有兩個(gè)亞品系P8和P10除具有P品系的一般老化癥狀外,，還伴隨著快速老化出現(xiàn)的學(xué)習(xí)記憶力障礙和低恐怖低緊張狀態(tài)，為腦老化癡呆模型小鼠,。兩亞系的共同點(diǎn)是均具有認(rèn)知障礙,，且在渡過(guò)生長(zhǎng)期后，伴快速老化自然發(fā)生,，與臨床癡呆的漸進(jìn)性發(fā)生極為相似,，它們還各具特點(diǎn)，如P8腦中出現(xiàn)明顯的A鈣沉積,、PAS染色陽(yáng)性顆粒狀結(jié)構(gòu)和海綿樣變性,，P10則伴有廣泛性腦萎縮。大量研究表明,，P8和P10是比較理想的研究腦老化和癡呆的模型,，與其同源對(duì)照R1相比，其行為學(xué),、形態(tài)學(xué)、神經(jīng)生化,、多種酶類以及組織蛋白和基因表達(dá)均出現(xiàn)異常[3],。SAM-P小鼠為探討衰老及衰老相關(guān)疾病的發(fā)生，評(píng)價(jià)藥效及其作用機(jī)制提供了良好的動(dòng)物模型,，其中SAM-P8較多用,。但是該模型來(lái)源比較困難。
3．D-半乳糖皮下注射致腦老化小鼠模型 該模型在國(guó)內(nèi)廣泛應(yīng)用于抗衰老的研究,。它可模擬AD的氧化損傷,，還發(fā)現(xiàn)小鼠學(xué)習(xí)記憶下降、腦內(nèi)膽堿能系統(tǒng)功能衰退,、神經(jīng)遞質(zhì)代謝異常,、皮層和海馬神經(jīng)元損傷、超微結(jié)構(gòu)和突觸可塑性發(fā)生衰老性改變等與AD類似的改變等。但是它對(duì)AD缺乏針對(duì)性,，而且國(guó)外幾乎很少使用該模型,。
（三）A鈣致癡呆模型
1．APP轉(zhuǎn)基因小鼠 該模型是以根據(jù)分子遺傳學(xué)和胚胎學(xué)理論和技術(shù)，利用顯微注射的方法將APP基因或基因片段整合入小鼠的基因組中,，使得小鼠腦部表達(dá)人APP基因,，通過(guò)APP蛋白在大腦中累積，產(chǎn)生老年斑,，從而造成小鼠老年性癡呆轉(zhuǎn)基因模型,。該模型為研究APP代謝、AD的發(fā)生和發(fā)展及藥物干預(yù)對(duì)發(fā)病進(jìn)程的影響提供了模型,，同時(shí)現(xiàn)在該模型已能夠復(fù)制出類似AD病人腦內(nèi)的部分病理變化,，同時(shí)有學(xué)習(xí)記憶功能的障礙。該模型是國(guó)際承認(rèn)的主要AD動(dòng)物模型,。但是該模型大部分只是移植了一到兩個(gè)APP基因,，與真正的一組基因控制的動(dòng)物模型還有一定的差距，而且該模型動(dòng)物價(jià)格較昂貴,。
2．A鈣注射致癡呆模型 該模型是利用A鈣是AD患者腦中老年斑的核心蛋白,，AD發(fā)病與腦內(nèi)炎癥改變而制作。故將A鈣肽段注入動(dòng)物海馬區(qū),，可較好地反映AD的特征性改變A鈣在AD發(fā)病中的作用,，該模型可用于研究治療AD藥物在A鈣聚積或沉積、神經(jīng)毒性作用和小膠質(zhì)細(xì)胞的炎性反應(yīng)等方面作用,，是臨床前藥效學(xué)評(píng)價(jià)的重要模型,。目前一般推薦使用A鈣1-40肽段大鼠海馬內(nèi)注射模型，也有用A鈣25-35海馬注射者,。另外還有A鈣腦室注射致癡呆模型,，該模型利用了A鈣直接注入腦室，經(jīng)側(cè)腦室彌漫至全腦,，更接近于A鈣引起細(xì)胞毒作用的實(shí)際過(guò)程,。
（四）慢性腦缺血致癡呆模型
近年來(lái)血管因素在AD發(fā)病中的作用越來(lái)越引起人們的重視。腦供血不足可導(dǎo)致腦損傷和一系列的臨床癥狀,，,，因而腦缺血模型也逐漸用于老年性癡呆藥物的研究。有研究發(fā)現(xiàn)大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎致腦缺血模型可引起行為缺失和腦組織病理生理改變,，在許多方面與癡呆（包括AD）相類似,；也有用結(jié)扎16月齡大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈同時(shí)燒灼一側(cè)椎動(dòng)脈造成腦長(zhǎng)期供血不足者。有報(bào)道稱有腦血管病的患者AD發(fā)病率高于正常人,，而且臨床上有不少AD患者同時(shí)合并血管性癡呆和腦供血不足等情況,。故腦缺血模型可作為AD模型的補(bǔ)充,，更適合于混合型癡呆的藥物作用觀察。
（五）其它模型
1．鋁模型 鋁誘導(dǎo)癡呆模型是以AD的鋁中毒假說(shuō)為基礎(chǔ)的,。據(jù)報(bào)道,，AD患者腦組織內(nèi)鋁含量較正常人高，其原因可能是病人血液中轉(zhuǎn)鐵蛋白有缺陷,，無(wú)法將血液中的鋁適當(dāng)清除,，多余的鋁進(jìn)入大腦后參與形成神經(jīng)纖維纏結(jié)和老年斑，損傷神經(jīng)元,。鋁劑注入動(dòng)物腦內(nèi)可出現(xiàn)學(xué)習(xí)記憶功能減退,，如家兔腦內(nèi)注射鋁、小鼠三氯化鋁注射等,，也有采用口服枸椽酸鋁使動(dòng)物發(fā)生學(xué)習(xí)記憶障礙和AD樣病理改變,，造成擬癡呆模型。但該模型所形成的神經(jīng)纖維纏結(jié)沒(méi)有PHF或磷酸化的tau蛋白,，且中樞膽堿能活性正常,，因而用鋁是否能造成AD模型尚有需進(jìn)一步研究。
2．線粒體缺陷致癡呆模型 有報(bào)道AD與腦內(nèi)線粒體氧化磷酸化異常有關(guān),。疊氮鈉（NaN3）是線粒體呼吸鏈復(fù)合物IV的特異性抑制劑,，有報(bào)道應(yīng)用微泵長(zhǎng)期、緩慢,、恒速地給予疊氮鈉,，模擬老年性癡呆長(zhǎng)時(shí)程、進(jìn)行性惡化的發(fā)病特點(diǎn),，可導(dǎo)致腦內(nèi)細(xì)胞色素C氧化酶（即線粒體呼吸鏈復(fù)合體IV）活性下降并引發(fā)學(xué)習(xí)記憶障礙,。
3．蛋白磷酸化酶抑制劑慢性損害致癡呆模型 神經(jīng)原纖維纏結(jié)是AD腦內(nèi)病理改變之一，過(guò)度磷酸化的tau蛋白是AD患者神經(jīng)元NFT的主要成分,，該模型利用蛋白磷酸酶的特異性抑制劑Okadic acid可引起培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞tau蛋白磷酸化水平增高,、細(xì)胞骨架損傷、細(xì)胞形態(tài)改變以及存活率下降,。該模型主要用于針對(duì)tau蛋白藥物的藥效觀察,。該模型造價(jià)昂貴。
4．自然免疫癡呆模型 該模型是基于AD的自身免疫學(xué)說(shuō),，因而許多實(shí)驗(yàn)室采用多種自然免疫動(dòng)物模型來(lái)研究AD的發(fā)病機(jī)制，并開(kāi)始用于AD藥物篩選,。如Sakic等建立了MRL-1pr小鼠模型,，并將MRL、NZB,、BXSB品系小鼠雜交,，建議了一種系統(tǒng)紅斑狼瘡樣的自身免疫小鼠模型,，發(fā)現(xiàn)有學(xué)習(xí)記憶功能衰退。目前,，這類模型的研究正成為新的熱點(diǎn),。
5．靈長(zhǎng)類動(dòng)物 值得注意的是，現(xiàn)有亦有研究用靈長(zhǎng)類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行AD研究的,。恒河猴與AD相關(guān)的病變包括認(rèn)知功能障礙,、神經(jīng)元丟失和變性、老年斑和血管淀粉樣蛋白沉積等,，其中病理表現(xiàn)是確診AD的重要依據(jù),。除恒河猴外，包括食蟹猴,、狒狒,、松鼠猴、黑猩猩和狐猴等也觀察到了腦實(shí)質(zhì)的淀粉樣蛋白沉積[4],。另外,，人工誘發(fā)恒河猴AD樣病理的方法包括化學(xué)物質(zhì)損傷、金屬中毒,、轉(zhuǎn)基因,、手術(shù)損傷和自身免疫方法損傷等，如損傷膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)模型,、鈣淀粉樣肽損傷模型,。因恒河猴模型較嚙齒類模型更好地模擬了AD的病理變化，但目前模型制作尚不夠完善,，有待于進(jìn)一步突破,。而且也應(yīng)注意到與人類的差別，以及不同靈長(zhǎng)類動(dòng)物之間的種屬差異,，而從行為學(xué),、病理學(xué)和遺傳學(xué)的研究方面進(jìn)行深入研究。
6．記憶障礙模型 目前在癡呆藥物中常用到各種記憶障礙模型,，如M膽堿受體阻滯藥東莨菪堿（前文已有敘述）或樟柳堿造成的記憶學(xué)習(xí)障礙模型,、腦蛋白質(zhì)合成抑制劑環(huán)乙酰亞胺或致腦缺氧劑如亞硝酸鈉造成的記憶鞏固障礙模型、中樞抑制劑如乙醇如記憶再現(xiàn)障礙模型,，以上模型均可用于對(duì)學(xué)習(xí)記憶作用的篩選,，但不應(yīng)稱之為AD模型。
7．體外篩選模型 目前有利用體外模型進(jìn)行老年性癡呆藥物的初篩,，如將M膽堿能受體應(yīng)用放射性免疫方法建立抗早老性癡呆藥的Ｍ1受體篩選模型[5],，該模型在人胚腎細(xì)胞上表達(dá)人源M1受體,通過(guò)檢測(cè)胞內(nèi)cAMP來(lái)監(jiān)測(cè)受體的激動(dòng)情況。使用外源性的3HcAMP競(jìng)爭(zhēng)胞內(nèi)的cAMP結(jié)合位點(diǎn),。使用氯化乙酰膽堿作為陽(yáng)性藥來(lái)確證模型的可靠性,，結(jié)果顯示該模型對(duì)M1受體激動(dòng)劑有陽(yáng)性反應(yīng),可用于抗早老性癡呆藥物的篩選,。老年性癡呆的基因芯片正在研究中，如采用SAM鼠篩選到的差異表達(dá)基因,，根據(jù)其制成芯片,，可為研究AD發(fā)病機(jī)制、臨床診斷,、治療打下基礎(chǔ),，同時(shí)也為藥物篩選取提供手段[6]。但這些快速篩選方法仍有待于進(jìn)一步深入研究,，而且經(jīng)過(guò)這些體外初篩的受試物尚需通過(guò)一系列的體內(nèi),、外試驗(yàn)來(lái)確證其藥效作用。
目前在研究的還有多種模型,，在此不一一列舉,。
三、藥效學(xué)研究中值得注意的幾個(gè)問(wèn)題
1．模型及觀察指標(biāo)的選擇
上述這些模型,，從不同方面來(lái)模擬AD,，但都只是模擬AD的某些方面的特征，尚無(wú)一個(gè)理想的模型來(lái)模擬AD全面的變化,。作為藥效學(xué)評(píng)價(jià),，應(yīng)根據(jù)藥物特點(diǎn)選擇相應(yīng)的動(dòng)物模型。以上列舉的模型各有其優(yōu)缺點(diǎn)和針對(duì)性,，如膽堿能損傷模型可用于膽堿能藥物作用的評(píng)價(jià),，A鈣致癡呆模型可重點(diǎn)用于觀察藥物對(duì)A鈣的作用等。因膽堿能功能缺損在AD病因中是目前較為公認(rèn)的,，因而可在評(píng)價(jià)藥效時(shí)采用膽堿能損傷致癡呆模型,；A鈣沉積及毒性作用在AD發(fā)病中非常重要，因而評(píng)價(jià)時(shí)可考慮A鈣致癡呆模型,；而老化是AD最大的危險(xiǎn)因素,，故老化致癡呆模型在藥效學(xué)評(píng)價(jià)中亦很重要。
觀察指標(biāo)的選擇亦應(yīng)根據(jù)藥物各自的特點(diǎn),、模型的不同機(jī)理而進(jìn)行,。如可進(jìn)行行為學(xué)檢查、相關(guān)生化檢查,、病理檢查等,，其中生化檢測(cè)可包括以下膽堿能相關(guān)指標(biāo)（如ChAT、AchE,、腦膽堿能受體密度及親和力,、乙酰膽堿含量等）、NGF、自由基相關(guān)指標(biāo),、相關(guān)蛋白、相關(guān)基因,、炎性因子等,，病理檢查可包括A鈣沉積、老年斑,、神經(jīng)纖維纏結(jié),、神經(jīng)元形態(tài)、數(shù)目,、小膠質(zhì)細(xì)胞,、星形膠質(zhì)細(xì)胞、營(yíng)養(yǎng)因子等等,?？偠灾瑹o(wú)論是模型還是指標(biāo)的選擇,，作為新藥開(kāi)發(fā)應(yīng)充分發(fā)揮研究者的主動(dòng)性,，根據(jù)藥物各自的特點(diǎn)進(jìn)行研究，尤其是對(duì)于老年性癡呆這一病因尚未清楚的病種,。
值得一提的是,，目前有些研究中僅進(jìn)行了化學(xué)物質(zhì)造成記憶損害模型進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶功能的測(cè)定，有些即便采用了較為簡(jiǎn)單的AD相關(guān)模型但也只檢測(cè)了學(xué)習(xí)記憶功能和簡(jiǎn)單幾個(gè)生化指標(biāo)（如自由基指標(biāo)）,，而未采用較為典型的AD相關(guān)模型,，未對(duì)AD的多方面指標(biāo)進(jìn)行綜合觀察。在這種情況下,，我們難以從單純的行為學(xué)試驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)受試物對(duì)AD的有效性,，因此需要針對(duì)AD補(bǔ)充進(jìn)行一系列的研究。
2．陽(yáng)性藥的選擇
作為藥效學(xué)試驗(yàn)應(yīng)設(shè)陽(yáng)性藥對(duì)照組,，陽(yáng)性藥應(yīng)采用已批準(zhǔn)上市的藥物,，確有療效，可選用中藥和化學(xué)藥,。陽(yáng)性藥應(yīng)根據(jù)相應(yīng)的模型和觀察的指標(biāo)來(lái)選擇,，并不要求所有的藥效學(xué)試驗(yàn)均采用同一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照藥。有些申報(bào)資料中全部試驗(yàn)均選用一種陽(yáng)性藥,，結(jié)果在一部分試驗(yàn)上陽(yáng)性藥未表現(xiàn)出明顯的作用,。由于設(shè)陽(yáng)性藥的目的除可將受試藥與其進(jìn)行比較外，最重要的目的是驗(yàn)證方法學(xué)的可靠性,，因此合理選擇陽(yáng)性藥十分關(guān)鍵,。如某一品種共進(jìn)行了5個(gè)試驗(yàn)，其中3個(gè)試驗(yàn)中采用了一種中藥為陽(yáng)性對(duì)照組,，而在這三個(gè)試驗(yàn)中均未表現(xiàn)出明顯的作用,，而另1試驗(yàn)中采用了另一種藥物作陽(yáng)性對(duì)照,，同樣亦未表現(xiàn)出作用，在這種的試驗(yàn)情況下陽(yáng)性對(duì)照組的設(shè)置就失去了意義,。陽(yáng)性藥應(yīng)根據(jù)藥物可能的機(jī)理來(lái)合理選擇,，如果初步研究提示某受試物可能通過(guò)增強(qiáng)膽堿能作用來(lái)達(dá)到治療AD的作用，那么在膽堿能模型或測(cè)定膽堿功能時(shí)則可用膽堿酯酶抑制劑作為陽(yáng)性對(duì)照,。
3．對(duì)模型與觀察指標(biāo)的綜合評(píng)價(jià)
試驗(yàn)結(jié)束后,，應(yīng)對(duì)所有的試驗(yàn)資料進(jìn)行綜合分析討論。現(xiàn)在有些申報(bào)資料的主要藥效學(xué)部分僅將所有的試驗(yàn)列舉,，而不對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析,。作為審評(píng)人員，由于受到專業(yè)的限制,，及對(duì)試驗(yàn)過(guò)程的不了解,，較難從未經(jīng)分析的試驗(yàn)結(jié)果中推測(cè)出試驗(yàn)的真正意義。因此,，申報(bào)資料應(yīng)該全面闡述進(jìn)行該項(xiàng)試驗(yàn)的目的意義,，對(duì)試驗(yàn)方法和結(jié)果進(jìn)行分析討論，并闡述本項(xiàng)試驗(yàn)對(duì)于說(shuō)明受試藥物可用于AD的意義,。以上雖指的是老年性癡呆藥效學(xué)研究中應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題,，但在其它的藥效學(xué)評(píng)價(jià)中亦應(yīng)注意這些問(wèn)題。
四,、結(jié)語(yǔ)
以上介紹了一些可用于AD藥效評(píng)價(jià)的模型,，研制單位可根據(jù)所研究藥物的性質(zhì)和研究目的加以選擇。如老年性癡呆的藥物中的膽堿酯酶抑制劑,，其主要重點(diǎn)在抗膽堿酯酶,，而非其它點(diǎn)，當(dāng)然不一定非得進(jìn)行其他方面如炎癥模型等方面的試驗(yàn)（當(dāng)然其前提條件是在已通過(guò)前期研究發(fā)現(xiàn)其重點(diǎn)在于抗膽堿酶）,。若能在所有的模型上對(duì)各種指標(biāo)均能作出陽(yáng)性結(jié)果,，倒有結(jié)果不可靠之嫌疑。應(yīng)該指出,，新藥開(kāi)發(fā)是一種研究行為,，研究者應(yīng)跟蹤最新研究進(jìn)展，創(chuàng)造性地進(jìn)行研究工作,。不應(yīng)期望有一個(gè)完善的指導(dǎo)原則,，根據(jù)要求“做作業(yè)”。隨著對(duì)疾病認(rèn)識(shí)日益深入,，試驗(yàn)手段也有不斷
http://www.cde.org.cn 發(fā)布時(shí)間：2003/12/17 03:35:27 PM
治療老年性癡呆中藥的藥效學(xué)研究評(píng)價(jià)探討
審評(píng)一部藥理毒理組 黃芳華
進(jìn)入二十一世紀(jì),，全世界正步入全球老齡化時(shí)代,。老年性癡呆已成為心腦血管疾病和腫瘤之后的第四位疾病,，目前,，全世界65歲以上人群中老年性癡呆患病率約為5%。而老年性癡呆因其復(fù)雜的發(fā)病機(jī)理,，近期在防治上不可能取得突破性進(jìn)展,，故西方有專家預(yù)言，老年性癡呆將是21世紀(jì)人類第一殺手,，目前全球的AD病人估計(jì)在2000-2500萬(wàn)左右,。老年性癡呆對(duì)患者、家庭和社會(huì)都帶來(lái)巨大的壓力,，使得全世界對(duì)其給予眾多的關(guān)注,，抗老年性癡呆的研究成為老年醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的一個(gè)重要課題。
目前,，老年性癡呆的中藥新藥申報(bào)品種出現(xiàn),，而且有日漸增多的趨勢(shì)。在這種情況下,，探討中藥新藥的藥效學(xué)研究評(píng)價(jià)成為必需,。與大部分其它疾病不同的是，老年性癡呆的發(fā)病機(jī)理極其復(fù)雜,，藥效學(xué)研究評(píng)價(jià)尚有一定的難度,，本文根據(jù)現(xiàn)有的研究水平，對(duì)藥效學(xué)評(píng)價(jià)進(jìn)行初步的探索,。以下僅是個(gè)人觀點(diǎn),，錯(cuò)誤及片面之處在所難免，此文的撰寫目的是拋磚引玉,，希望更多的相關(guān)專家對(duì)此問(wèn)題進(jìn)行廣泛的討論,，以使評(píng)價(jià)更趨科學(xué)、合理,。
一,、老年性癡呆的概況
阿爾采末病(Alzheimer’s disease,AD)是一種發(fā)生于老年期或老年前期的一種慢性進(jìn)行性的神經(jīng)變性疾病,，以進(jìn)行性的記憶認(rèn)知障礙、人格改變?yōu)橹饕卣?，AD腦內(nèi)的主要病理改變?yōu)槔夏臧撸╯enile plaque,，SP）、神經(jīng)原纖維纏結(jié)（neurofibrillary tangle,NFT）及大量的神經(jīng)元丟失,，主要發(fā)生在前腦基底,、海馬和大腦皮層。一般稱之為老年性癡呆,。
從1907年報(bào)道第一例老年性癡呆病始,，全世界的醫(yī)學(xué)家為這一病癥進(jìn)行了不懈的探索，但直至21世紀(jì)的今日,，因其病因復(fù)雜,，目前尚未明確。關(guān)于其機(jī)理研究,，現(xiàn)在主要有以下幾種學(xué)說(shuō),，如基因?qū)W說(shuō)、膽堿能學(xué)說(shuō),、傳染學(xué)說(shuō),、鋁中毒學(xué)說(shuō)、自由基學(xué)說(shuō),、炎癥學(xué)說(shuō),、鈣超載學(xué)說(shuō)、代謝紊亂學(xué)說(shuō),，雖然各種假說(shuō)有其合理性的一面,，但均存在其局限性，不能全面解釋AD復(fù)雜,、廣泛的神經(jīng)系統(tǒng)病理變化,。但能肯定的是：AD的發(fā)病與機(jī)體衰老密切相關(guān)。近年來(lái),，對(duì)AD與淀粉樣蛋白的關(guān)系成為研究的熱點(diǎn),。
發(fā)病機(jī)理不明也影響了AD藥物的開(kāi)發(fā)。目前,，AD的治療尚無(wú)特效藥物,，其中乙酰膽堿酯酶抑制劑（Acetylcholinesterase inhibitor,AchEI）一直是開(kāi)發(fā)活躍、成果突出的領(lǐng)域,。它的開(kāi)發(fā)主要源于膽堿能學(xué)說(shuō),。從20世紀(jì)70年代一些科學(xué)家發(fā)現(xiàn)AD患者的膽堿能神經(jīng)元功能有不同比例的嚴(yán)重障礙，膽堿能缺陷反應(yīng)合成Ach的膽堿乙酰化酶（ChAT）的減少,，伴AchE表達(dá)下降,。因而改善膽堿能神經(jīng)元突觸傳遞，激活突觸后神經(jīng)元功能膽堿酯酶抑制劑減少Ach分解,，促進(jìn)突觸傳遞強(qiáng)度,，改善突觸后神經(jīng)元功能，這類藥物是目前治療AD的主要藥物,，對(duì)輕,、中度AD具有一定效果。已被FDA認(rèn)可并在多國(guó)上市的他克林,、安理申,、加蘭他敏等均屬AchEI類。從中草藥千層塔中提取的石杉?jí)A甲是一種生物活性高,，對(duì)真性膽堿酯酶具有選擇性的可逆性膽堿酯酶抑制劑,。
二、老年性癡呆相關(guān)動(dòng)物模型
因AD病因復(fù)雜,，故相應(yīng)的也缺乏嚴(yán)格意義的AD體內(nèi)外模型,，現(xiàn)在國(guó)內(nèi)外大部分體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)只能反映AD某一部分的改變,，因而不應(yīng)稱為AD模型。近年來(lái)許多學(xué)者正致力于尋找和研究AD動(dòng)物模型,，對(duì)AD模型報(bào)道也較多,，雖然分類各有不同，但大致可分為以下幾類[1,、2]
（一）膽堿能損傷致癡呆模型
1．穹窿-海馬傘切斷致癡呆大鼠模型 該模型是建立在AD認(rèn)知障礙的膽堿能假說(shuō)基礎(chǔ)上,，較好地模擬了AD前腦膽堿能系統(tǒng)的損害，而且造成了神經(jīng)損傷,，可用于觀察擬膽堿藥物的藥效學(xué)評(píng)價(jià),，還可觀察藥物對(duì)神經(jīng)功能損傷的修復(fù)作用，是老年性癡呆臨床前藥效學(xué)研究的重要模型,。該模型的不足之處是雖然具有學(xué)習(xí)記憶功能的損害,，但并不出現(xiàn)老年斑、神經(jīng)元纖維纏結(jié)和淀粉樣蛋白沉積形成等最內(nèi)典型的組織病理學(xué)特征,，也無(wú)AD病人全身多系統(tǒng)功能衰老的表現(xiàn),。
2．基底前腦注射鵝蒿蕈氨酸（ibotenic acid ,IBO）致癡呆模型大鼠 該模型屬興奮性毒素致基底核損害模型。通過(guò)該模型可反映導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶功能下降的病理基礎(chǔ)-基底前腦膽堿能神經(jīng)元缺失,，因而也是廣泛應(yīng)用的模型,。該類模型的缺陷是不能反映AD發(fā)生的病因，不能產(chǎn)生AD的病理學(xué)特征，如老年斑,、神經(jīng)原纖維纏結(jié)等,，這種興奮性毒素所產(chǎn)生的損害只能模型AD大腦皮層突觸膽堿能缺陷，而這些動(dòng)物的海馬ChAT則不受影響,。興奮性毒素還包括紅藻酸鈉,、N-甲基天門冬氨酸、使君子酸等,。紅藻氨酸也可誘導(dǎo)產(chǎn)大鼠基底核損害,，可使皮層ChAT損失40-50%，并與Ach水平,、HAChT和AchE活性的降低相平行,，而其他遞質(zhì)系統(tǒng)無(wú)明顯改變，而且在避暗試驗(yàn)中出現(xiàn)記憶保持障礙,，可作為潛在的動(dòng)物模型,，但紅藻酸鈉是一種強(qiáng)效的驚厥藥，能產(chǎn)生損害,，因此不如IBO應(yīng)用廣泛,。
3．東莨菪堿致膽堿能損傷擬癡呆小鼠 東莨菪堿為M膽堿能受體阻斷劑，可阻斷乙酰膽堿對(duì)M受體的激動(dòng)作用,，造成了學(xué)習(xí)記憶功能障礙,。但是該模型不直接引起膽堿能神經(jīng)缺失，而且缺乏研究AD病理生理所必需的特征,，如AD是一種進(jìn)行性不可逆變性,，而該模型為化學(xué)性模型，恢復(fù)快是其局限性,，可用于早期藥物的篩選,。
（二）老化致癡呆模型
1．自然衰老動(dòng)物 較常用的是自然衰老大鼠，24月齡以上,，另外也有采用老年狗或猴者,，該模型是較為接近AD實(shí)際病理改變的動(dòng)物模型，在此基礎(chǔ)上觀察老年性癡呆治療藥物能較好地反映藥物的作用機(jī)理和效果,。但是其不足之處有：（1）由于AD是一種不同于正常衰老的進(jìn)行性神經(jīng)功能衰退性疾病,，故老年動(dòng)物有其局限性，它只是部分模擬了與人正常衰老相關(guān)的神經(jīng)生化改變,，而不能全面模擬AD的變化,。（2）有實(shí)驗(yàn)材料較難得、需長(zhǎng)時(shí)間飼養(yǎng),、死亡率高,，實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)等缺點(diǎn)，大大限制了該模型的應(yīng)用。（3）老年動(dòng)物的健康狀況的差異,，以及在藥物吸收,、代謝和分布上的變異性，有時(shí)會(huì)產(chǎn)生統(tǒng)計(jì)學(xué)意義不確定的結(jié)果,。
2．快速老化小鼠（SAM） 快速老化小鼠分為快速老化亞系（senescence accelerated mouse/prone,SAM-P）及抗快速老化亞系（senescence accelerated mouse/resistance,SAM-R）,，它是由日本京都大學(xué)首次培育成功，經(jīng)20多代交配近繁,，獲得了遺傳性與病理表型一致,，符合近交系標(biāo)準(zhǔn)的新系列。SAM-P品系中,，有兩個(gè)亞品系P8和P10除具有P品系的一般老化癥狀外,，還伴隨著快速老化出現(xiàn)的學(xué)習(xí)記憶力障礙和低恐怖低緊張狀態(tài)，為腦老化癡呆模型小鼠,。兩亞系的共同點(diǎn)是均具有認(rèn)知障礙,，且在渡過(guò)生長(zhǎng)期后，伴快速老化自然發(fā)生,，與臨床癡呆的漸進(jìn)性發(fā)生極為相似,，它們還各具特點(diǎn)，如P8腦中出現(xiàn)明顯的A鈣沉積,、PAS染色陽(yáng)性顆粒狀結(jié)構(gòu)和海綿樣變性,，P10則伴有廣泛性腦萎縮。大量研究表明,，P8和P10是比較理想的研究腦老化和癡呆的模型,，與其同源對(duì)照R1相比，其行為學(xué),、形態(tài)學(xué)、神經(jīng)生化,、多種酶類以及組織蛋白和基因表達(dá)均出現(xiàn)異常[3],。SAM-P小鼠為探討衰老及衰老相關(guān)疾病的發(fā)生，評(píng)價(jià)藥效及其作用機(jī)制提供了良好的動(dòng)物模型,，其中SAM-P8較多用,。但是該模型來(lái)源比較困難。
3．D-半乳糖皮下注射致腦老化小鼠模型 該模型在國(guó)內(nèi)廣泛應(yīng)用于抗衰老的研究,。它可模擬AD的氧化損傷,，還發(fā)現(xiàn)小鼠學(xué)習(xí)記憶下降、腦內(nèi)膽堿能系統(tǒng)功能衰退,、神經(jīng)遞質(zhì)代謝異常,、皮層和海馬神經(jīng)元損傷、超微結(jié)構(gòu)和突觸可塑性發(fā)生衰老性改變等與AD類似的改變等。但是它對(duì)AD缺乏針對(duì)性,，而且國(guó)外幾乎很少使用該模型,。
（三）A鈣致癡呆模型
1．APP轉(zhuǎn)基因小鼠 該模型是以根據(jù)分子遺傳學(xué)和胚胎學(xué)理論和技術(shù)，利用顯微注射的方法將APP基因或基因片段整合入小鼠的基因組中,，使得小鼠腦部表達(dá)人APP基因,，通過(guò)APP蛋白在大腦中累積，產(chǎn)生老年斑,，從而造成小鼠老年性癡呆轉(zhuǎn)基因模型,。該模型為研究APP代謝、AD的發(fā)生和發(fā)展及藥物干預(yù)對(duì)發(fā)病進(jìn)程的影響提供了模型,，同時(shí)現(xiàn)在該模型已能夠復(fù)制出類似AD病人腦內(nèi)的部分病理變化,，同時(shí)有學(xué)習(xí)記憶功能的障礙。該模型是國(guó)際承認(rèn)的主要AD動(dòng)物模型,。但是該模型大部分只是移植了一到兩個(gè)APP基因,，與真正的一組基因控制的動(dòng)物模型還有一定的差距，而且該模型動(dòng)物價(jià)格較昂貴,。
2．A鈣注射致癡呆模型 該模型是利用A鈣是AD患者腦中老年斑的核心蛋白,，AD發(fā)病與腦內(nèi)炎癥改變而制作。故將A鈣肽段注入動(dòng)物海馬區(qū),，可較好地反映AD的特征性改變A鈣在AD發(fā)病中的作用,，該模型可用于研究治療AD藥物在A鈣聚積或沉積、神經(jīng)毒性作用和小膠質(zhì)細(xì)胞的炎性反應(yīng)等方面作用,，是臨床前藥效學(xué)評(píng)價(jià)的重要模型,。目前一般推薦使用A鈣1-40肽段大鼠海馬內(nèi)注射模型，也有用A鈣25-35海馬注射者,。另外還有A鈣腦室注射致癡呆模型,，該模型利用了A鈣直接注入腦室，經(jīng)側(cè)腦室彌漫至全腦,，更接近于A鈣引起細(xì)胞毒作用的實(shí)際過(guò)程,。
（四）慢性腦缺血致癡呆模型
近年來(lái)血管因素在AD發(fā)病中的作用越來(lái)越引起人們的重視。腦供血不足可導(dǎo)致腦損傷和一系列的臨床癥狀,，,，因而腦缺血模型也逐漸用于老年性癡呆藥物的研究。有研究發(fā)現(xiàn)大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎致腦缺血模型可引起行為缺失和腦組織病理生理改變,，在許多方面與癡呆（包括AD）相類似,；也有用結(jié)扎16月齡大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈同時(shí)燒灼一側(cè)椎動(dòng)脈造成腦長(zhǎng)期供血不足者。有報(bào)道稱有腦血管病的患者AD發(fā)病率高于正常人,，而且臨床上有不少AD患者同時(shí)合并血管性癡呆和腦供血不足等情況,。故腦缺血模型可作為AD模型的補(bǔ)充,，更適合于混合型癡呆的藥物作用觀察。
（五）其它模型
1．鋁模型 鋁誘導(dǎo)癡呆模型是以AD的鋁中毒假說(shuō)為基礎(chǔ)的,。據(jù)報(bào)道,，AD患者腦組織內(nèi)鋁含量較正常人高，其原因可能是病人血液中轉(zhuǎn)鐵蛋白有缺陷,，無(wú)法將血液中的鋁適當(dāng)清除,，多余的鋁進(jìn)入大腦后參與形成神經(jīng)纖維纏結(jié)和老年斑，損傷神經(jīng)元,。鋁劑注入動(dòng)物腦內(nèi)可出現(xiàn)學(xué)習(xí)記憶功能減退,，如家兔腦內(nèi)注射鋁、小鼠三氯化鋁注射等,，也有采用口服枸椽酸鋁使動(dòng)物發(fā)生學(xué)習(xí)記憶障礙和AD樣病理改變,，造成擬癡呆模型。但該模型所形成的神經(jīng)纖維纏結(jié)沒(méi)有PHF或磷酸化的tau蛋白,，且中樞膽堿能活性正常,，因而用鋁是否能造成AD模型尚有需進(jìn)一步研究。
2．線粒體缺陷致癡呆模型 有報(bào)道AD與腦內(nèi)線粒體氧化磷酸化異常有關(guān),。疊氮鈉（NaN3）是線粒體呼吸鏈復(fù)合物IV的特異性抑制劑,，有報(bào)道應(yīng)用微泵長(zhǎng)期、緩慢,、恒速地給予疊氮鈉,，模擬老年性癡呆長(zhǎng)時(shí)程、進(jìn)行性惡化的發(fā)病特點(diǎn),，可導(dǎo)致腦內(nèi)細(xì)胞色素C氧化酶（即線粒體呼吸鏈復(fù)合體IV）活性下降并引發(fā)學(xué)習(xí)記憶障礙,。
3．蛋白磷酸化酶抑制劑慢性損害致癡呆模型 神經(jīng)原纖維纏結(jié)是AD腦內(nèi)病理改變之一，過(guò)度磷酸化的tau蛋白是AD患者神經(jīng)元NFT的主要成分,，該模型利用蛋白磷酸酶的特異性抑制劑Okadic acid可引起培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞tau蛋白磷酸化水平增高,、細(xì)胞骨架損傷、細(xì)胞形態(tài)改變以及存活率下降,。該模型主要用于針對(duì)tau蛋白藥物的藥效觀察,。該模型造價(jià)昂貴。
4．自然免疫癡呆模型 該模型是基于AD的自身免疫學(xué)說(shuō),，因而許多實(shí)驗(yàn)室采用多種自然免疫動(dòng)物模型來(lái)研究AD的發(fā)病機(jī)制，并開(kāi)始用于AD藥物篩選,。如Sakic等建立了MRL-1pr小鼠模型,，并將MRL、NZB,、BXSB品系小鼠雜交,，建議了一種系統(tǒng)紅斑狼瘡樣的自身免疫小鼠模型,，發(fā)現(xiàn)有學(xué)習(xí)記憶功能衰退。目前,，這類模型的研究正成為新的熱點(diǎn),。
5．靈長(zhǎng)類動(dòng)物 值得注意的是，現(xiàn)有亦有研究用靈長(zhǎng)類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行AD研究的,。恒河猴與AD相關(guān)的病變包括認(rèn)知功能障礙,、神經(jīng)元丟失和變性、老年斑和血管淀粉樣蛋白沉積等,，其中病理表現(xiàn)是確診AD的重要依據(jù),。除恒河猴外，包括食蟹猴,、狒狒,、松鼠猴、黑猩猩和狐猴等也觀察到了腦實(shí)質(zhì)的淀粉樣蛋白沉積[4],。另外,，人工誘發(fā)恒河猴AD樣病理的方法包括化學(xué)物質(zhì)損傷、金屬中毒,、轉(zhuǎn)基因,、手術(shù)損傷和自身免疫方法損傷等，如損傷膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)模型,、鈣淀粉樣肽損傷模型,。因恒河猴模型較嚙齒類模型更好地模擬了AD的病理變化，但目前模型制作尚不夠完善,，有待于進(jìn)一步突破,。而且也應(yīng)注意到與人類的差別，以及不同靈長(zhǎng)類動(dòng)物之間的種屬差異,，而從行為學(xué),、病理學(xué)和遺傳學(xué)的研究方面進(jìn)行深入研究。
6．記憶障礙模型 目前在癡呆藥物中常用到各種記憶障礙模型,，如M膽堿受體阻滯藥東莨菪堿（前文已有敘述）或樟柳堿造成的記憶學(xué)習(xí)障礙模型,、腦蛋白質(zhì)合成抑制劑環(huán)乙酰亞胺或致腦缺氧劑如亞硝酸鈉造成的記憶鞏固障礙模型、中樞抑制劑如乙醇如記憶再現(xiàn)障礙模型,，以上模型均可用于對(duì)學(xué)習(xí)記憶作用的篩選,，但不應(yīng)稱之為AD模型。
7．體外篩選模型 目前有利用體外模型進(jìn)行老年性癡呆藥物的初篩,，如將M膽堿能受體應(yīng)用放射性免疫方法建立抗早老性癡呆藥的Ｍ1受體篩選模型[5],，該模型在人胚腎細(xì)胞上表達(dá)人源M1受體,通過(guò)檢測(cè)胞內(nèi)cAMP來(lái)監(jiān)測(cè)受體的激動(dòng)情況。使用外源性的3HcAMP競(jìng)爭(zhēng)胞內(nèi)的cAMP結(jié)合位點(diǎn),。使用氯化乙酰膽堿作為陽(yáng)性藥來(lái)確證模型的可靠性,，結(jié)果顯示該模型對(duì)M1受體激動(dòng)劑有陽(yáng)性反應(yīng),可用于抗早老性癡呆藥物的篩選,。老年性癡呆的基因芯片正在研究中，如采用SAM鼠篩選到的差異表達(dá)基因,，根據(jù)其制成芯片,，可為研究AD發(fā)病機(jī)制、臨床診斷,、治療打下基礎(chǔ),，同時(shí)也為藥物篩選取提供手段[6]。但這些快速篩選方法仍有待于進(jìn)一步深入研究,，而且經(jīng)過(guò)這些體外初篩的受試物尚需通過(guò)一系列的體內(nèi),、外試驗(yàn)來(lái)確證其藥效作用。
目前在研究的還有多種模型,，在此不一一列舉,。
三、藥效學(xué)研究中值得注意的幾個(gè)問(wèn)題
1．模型及觀察指標(biāo)的選擇
上述這些模型,，從不同方面來(lái)模擬AD,，但都只是模擬AD的某些方面的特征，尚無(wú)一個(gè)理想的模型來(lái)模擬AD全面的變化,。作為藥效學(xué)評(píng)價(jià),，應(yīng)根據(jù)藥物特點(diǎn)選擇相應(yīng)的動(dòng)物模型。以上列舉的模型各有其優(yōu)缺點(diǎn)和針對(duì)性,，如膽堿能損傷模型可用于膽堿能藥物作用的評(píng)價(jià),，A鈣致癡呆模型可重點(diǎn)用于觀察藥物對(duì)A鈣的作用等。因膽堿能功能缺損在AD病因中是目前較為公認(rèn)的,，因而可在評(píng)價(jià)藥效時(shí)采用膽堿能損傷致癡呆模型,；A鈣沉積及毒性作用在AD發(fā)病中非常重要，因而評(píng)價(jià)時(shí)可考慮A鈣致癡呆模型,；而老化是AD最大的危險(xiǎn)因素,，故老化致癡呆模型在藥效學(xué)評(píng)價(jià)中亦很重要。
觀察指標(biāo)的選擇亦應(yīng)根據(jù)藥物各自的特點(diǎn),、模型的不同機(jī)理而進(jìn)行,。如可進(jìn)行行為學(xué)檢查、相關(guān)生化檢查,、病理檢查等,，其中生化檢測(cè)可包括以下膽堿能相關(guān)指標(biāo)（如ChAT、AchE,、腦膽堿能受體密度及親和力,、乙酰膽堿含量等）、NGF、自由基相關(guān)指標(biāo),、相關(guān)蛋白、相關(guān)基因,、炎性因子等,，病理檢查可包括A鈣沉積、老年斑,、神經(jīng)纖維纏結(jié),、神經(jīng)元形態(tài)、數(shù)目,、小膠質(zhì)細(xì)胞,、星形膠質(zhì)細(xì)胞、營(yíng)養(yǎng)因子等等,?？偠灾瑹o(wú)論是模型還是指標(biāo)的選擇,，作為新藥開(kāi)發(fā)應(yīng)充分發(fā)揮研究者的主動(dòng)性,，根據(jù)藥物各自的特點(diǎn)進(jìn)行研究，尤其是對(duì)于老年性癡呆這一病因尚未清楚的病種,。
值得一提的是,，目前有些研究中僅進(jìn)行了化學(xué)物質(zhì)造成記憶損害模型進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶功能的測(cè)定，有些即便采用了較為簡(jiǎn)單的AD相關(guān)模型但也只檢測(cè)了學(xué)習(xí)記憶功能和簡(jiǎn)單幾個(gè)生化指標(biāo)（如自由基指標(biāo)）,，而未采用較為典型的AD相關(guān)模型,，未對(duì)AD的多方面指標(biāo)進(jìn)行綜合觀察。在這種情況下,，我們難以從單純的行為學(xué)試驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)受試物對(duì)AD的有效性,，因此需要針對(duì)AD補(bǔ)充進(jìn)行一系列的研究。
2．陽(yáng)性藥的選擇
作為藥效學(xué)試驗(yàn)應(yīng)設(shè)陽(yáng)性藥對(duì)照組,，陽(yáng)性藥應(yīng)采用已批準(zhǔn)上市的藥物,，確有療效，可選用中藥和化學(xué)藥,。陽(yáng)性藥應(yīng)根據(jù)相應(yīng)的模型和觀察的指標(biāo)來(lái)選擇,，并不要求所有的藥效學(xué)試驗(yàn)均采用同一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照藥。有些申報(bào)資料中全部試驗(yàn)均選用一種陽(yáng)性藥,，結(jié)果在一部分試驗(yàn)上陽(yáng)性藥未表現(xiàn)出明顯的作用,。由于設(shè)陽(yáng)性藥的目的除可將受試藥與其進(jìn)行比較外，最重要的目的是驗(yàn)證方法學(xué)的可靠性,，因此合理選擇陽(yáng)性藥十分關(guān)鍵,。如某一品種共進(jìn)行了5個(gè)試驗(yàn)，其中3個(gè)試驗(yàn)中采用了一種中藥為陽(yáng)性對(duì)照組,，而在這三個(gè)試驗(yàn)中均未表現(xiàn)出明顯的作用,，而另1試驗(yàn)中采用了另一種藥物作陽(yáng)性對(duì)照,，同樣亦未表現(xiàn)出作用，在這種的試驗(yàn)情況下陽(yáng)性對(duì)照組的設(shè)置就失去了意義,。陽(yáng)性藥應(yīng)根據(jù)藥物可能的機(jī)理來(lái)合理選擇,，如果初步研究提示某受試物可能通過(guò)增強(qiáng)膽堿能作用來(lái)達(dá)到治療AD的作用，那么在膽堿能模型或測(cè)定膽堿功能時(shí)則可用膽堿酯酶抑制劑作為陽(yáng)性對(duì)照,。
3．對(duì)模型與觀察指標(biāo)的綜合評(píng)價(jià)
試驗(yàn)結(jié)束后,，應(yīng)對(duì)所有的試驗(yàn)資料進(jìn)行綜合分析討論。現(xiàn)在有些申報(bào)資料的主要藥效學(xué)部分僅將所有的試驗(yàn)列舉,，而不對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析,。作為審評(píng)人員，由于受到專業(yè)的限制,，及對(duì)試驗(yàn)過(guò)程的不了解,，較難從未經(jīng)分析的試驗(yàn)結(jié)果中推測(cè)出試驗(yàn)的真正意義。因此,，申報(bào)資料應(yīng)該全面闡述進(jìn)行該項(xiàng)試驗(yàn)的目的意義,，對(duì)試驗(yàn)方法和結(jié)果進(jìn)行分析討論，并闡述本項(xiàng)試驗(yàn)對(duì)于說(shuō)明受試藥物可用于AD的意義,。以上雖指的是老年性癡呆藥效學(xué)研究中應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題,，但在其它的藥效學(xué)評(píng)價(jià)中亦應(yīng)注意這些問(wèn)題。
四,、結(jié)語(yǔ)
以上介紹了一些可用于AD藥效評(píng)價(jià)的模型,，研制單位可根據(jù)所研究藥物的性質(zhì)和研究目的加以選擇。如老年性癡呆的藥物中的膽堿酯酶抑制劑,，其主要重點(diǎn)在抗膽堿酯酶,，而非其它點(diǎn)，當(dāng)然不一定非得進(jìn)行其他方面如炎癥模型等方面的試驗(yàn)（當(dāng)然其前提條件是在已通過(guò)前期研究發(fā)現(xiàn)其重點(diǎn)在于抗膽堿酶）,。若能在所有的模型上對(duì)各種指標(biāo)均能作出陽(yáng)性結(jié)果,，倒有結(jié)果不可靠之嫌疑。應(yīng)該指出,，新藥開(kāi)發(fā)是一種研究行為,，研究者應(yīng)跟蹤最新研究進(jìn)展，創(chuàng)造性地進(jìn)行研究工作,。不應(yīng)期望有一個(gè)完善的指導(dǎo)原則,，根據(jù)要求“做作業(yè)”。隨著對(duì)疾病認(rèn)識(shí)日益深入,，試驗(yàn)手段也有不斷
