中藥,、天然藥物注冊(cè)分類第一類中藥新藥的藥代動(dòng)力學(xué)評(píng)價(jià)初探
 
  http://www.cde.org.cn 發(fā)布時(shí)間：2003/07/08 11:14:40 AM
 
中藥、天然藥物注冊(cè)分類第一類中藥新藥的藥代動(dòng)力學(xué)評(píng)價(jià)初探
審評(píng)一部 韓 玲 笪紅遠(yuǎn)

新的《藥品注冊(cè)管理辦法》與原《新藥審批辦法》一樣,，對(duì)原一類新藥,，即現(xiàn)中藥、天然藥注冊(cè)分類第一類新藥要求必須進(jìn)行臨床前藥代動(dòng)力學(xué)研究,。這對(duì)進(jìn)行I期臨床人體藥代動(dòng)力學(xué)研究方法學(xué)的確立,，對(duì)闡明創(chuàng)新中藥新藥治病機(jī)理、評(píng)價(jià)中藥制劑的內(nèi)在質(zhì)量以及指導(dǎo)新劑型的研制等方面均具有重要作用,。
隨著新技術(shù),、新工藝越來(lái)越多地用于中藥的提純分離，近幾年申報(bào)的創(chuàng)新中藥新藥在逐年增加,。通過(guò)對(duì)近2年申報(bào)的第一類中藥新藥的藥代動(dòng)力學(xué)審評(píng),，我們發(fā)現(xiàn)了許多值得討論和分析的共性問(wèn)題,，為使更多的申報(bào)單位在新藥研發(fā)的基礎(chǔ)階段少走彎路，加快新藥開(kāi)發(fā)速度,，很有必要結(jié)合審評(píng)中發(fā)現(xiàn)的普遍問(wèn)題對(duì)中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究的特點(diǎn)和難點(diǎn),，以及審評(píng)該部分內(nèi)容的基本要求進(jìn)行初步的分析和探討。

一,、 問(wèn)題歸納
（一） 中藥藥代動(dòng)力學(xué)方法學(xué)中存在的問(wèn)題
1．資料不全面：多為方法學(xué)介紹不詳細(xì)或缺資料,，如HPLC法無(wú)色譜圖（包括空白血漿、組織,，以及樣品和標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖等）,。有的試驗(yàn)因選用UV 檢測(cè)，一般情況下干擾較多,，尤其是糞便中雜質(zhì)較多,，不提供色圖譜就無(wú)法判斷色譜圖所顯示的分離程度是否良好；有的試驗(yàn)用GC-MS法,，但不提供質(zhì)量色譜圖或未進(jìn)行積分,，或原始資料中顯示出用手動(dòng)積分等，均不妥,；有的對(duì)圖譜中內(nèi)標(biāo)峰和待測(cè)物峰均不予以標(biāo)明,。
2．穩(wěn)定性試驗(yàn)：該項(xiàng)試驗(yàn)應(yīng)包括樣品的予處理、冰箱貯存,、反復(fù)凍融,、24小時(shí)室溫等。但許多資料不提供或未做穩(wěn)定性試驗(yàn),，或者資料不全,。
3．回收率試驗(yàn)與準(zhǔn)確性：提供的資料不全，有的僅提供血漿樣品回收率,，而無(wú)組織回收率,。有的高、中,、低三個(gè)濃度下的回收率結(jié)果相差過(guò)大,，回收率不穩(wěn)定等。
4．精密度測(cè)定：不進(jìn)行或不提供日內(nèi)或日間精密度考察資料,。有的試驗(yàn)中的精密度是基于面積比計(jì)算的,，這是不正確的，應(yīng)按當(dāng)日的標(biāo)準(zhǔn)曲線求出實(shí)測(cè)濃度值,，再由此計(jì)算出精密度,。
5．靈敏度測(cè)定：不進(jìn)行方法學(xué)的探索性研究，尋找增高靈敏度的方法，是導(dǎo)致靈敏度過(guò)低,，無(wú)法真正評(píng)價(jià)新藥藥代的最大問(wèn)題,。當(dāng)然，中藥藥代動(dòng)力學(xué)方法學(xué)建立的難度也是其根本原因,。
6．標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：該方面的問(wèn)題包括：（1）許多資料不提供標(biāo)準(zhǔn)曲線,，或僅有血藥濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，而無(wú)組織樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線,；（2）試驗(yàn)過(guò)程中不做隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線及質(zhì)控,，有的情況下僅在試驗(yàn)初期做一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，即試驗(yàn)過(guò)程中缺乏質(zhì)控樣品,；（3）線性范圍選擇不當(dāng),，過(guò)窄或過(guò)寬。過(guò)窄時(shí),，導(dǎo)致實(shí)測(cè)時(shí)的高或低濃度超出了標(biāo)準(zhǔn)曲線,，而采用外推法，發(fā)生外延現(xiàn)象,，即此時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)曲線不能覆蓋整個(gè)實(shí)測(cè)濃度。過(guò)寬時(shí),，實(shí)測(cè)濃度僅僅是線性范圍內(nèi)的一個(gè)尖,，如標(biāo)準(zhǔn)曲線的最高濃度（10000ng/ml）遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出了實(shí)測(cè)最高濃度（130ng/ml）；又如線性范圍為100-4000ng/ml,，但實(shí)測(cè)最高濃度僅為170mg/ml,。（4）未給出最低檢出限（LOQ）或LOQ不符合要求，不能檢測(cè)出3-5個(gè)消除半衰期或不能檢測(cè)出峰濃度Cmax的1/10-1/20的濃度等,。另外,，對(duì)實(shí)測(cè)值中小于LOQ的數(shù)據(jù)均未標(biāo)出“不能定量檢測(cè)”等說(shuō)明，因低于LOQ的數(shù)據(jù)均不可靠,。
7．內(nèi)標(biāo)選擇：內(nèi)標(biāo)選擇不當(dāng)而起不到內(nèi)標(biāo)的作用,。選擇了內(nèi)源性物質(zhì)做內(nèi)標(biāo)，因內(nèi)源性物質(zhì)的干擾可能使得檢測(cè)結(jié)果有較大的波動(dòng),，故可使測(cè)定值不準(zhǔn)確而影響了評(píng)價(jià),。這種情況下，分析譜圖,，可見(jiàn)內(nèi)標(biāo)峰的保留時(shí)間變化較大,，以及內(nèi)標(biāo)的基線在生物樣品中比標(biāo)準(zhǔn)高許多，因此可提示內(nèi)標(biāo)的特異性較低,。
（二） 中藥藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)中存在的問(wèn)題
1．給藥劑量：試驗(yàn)中劑量選擇不合理是一突出問(wèn)題,，如僅選擇一個(gè)劑量或選擇的劑量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)藥效學(xué)有效劑量范圍，這樣均導(dǎo)致試驗(yàn)不符合要求。原則上應(yīng)在藥效劑量范圍內(nèi)選擇3個(gè)劑量進(jìn)行試驗(yàn),。
2．動(dòng)物：動(dòng)物的狀態(tài)不符合要求,，如采用麻醉動(dòng)物進(jìn)行藥代試驗(yàn)；動(dòng)物數(shù)不符合要求,，如分布試驗(yàn)中取血時(shí)間點(diǎn)較多,，而每個(gè)時(shí)間點(diǎn)設(shè)計(jì)的動(dòng)物數(shù)過(guò)少，僅2-3只動(dòng)物,，在非連續(xù)取樣的試驗(yàn)中,，動(dòng)物數(shù)應(yīng)至少5只；此外,，在進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)時(shí),，當(dāng)數(shù)據(jù)差異較大時(shí)，因無(wú)法進(jìn)行藥代參數(shù)的推算或?yàn)榱私档推渥儺?，而采用將幾個(gè)動(dòng)物的血樣混合后再測(cè)定的方法,，這種做法是錯(cuò)誤的，因?qū)嶋H的動(dòng)物數(shù)僅為1,，違法了統(tǒng)計(jì)學(xué)的要求,。另外，多數(shù)研究?jī)H利用一種動(dòng)物,，這也是不符合第一類中藥新藥藥代動(dòng)力學(xué)要求的,。
3．血藥濃度：未提供血藥濃度原始數(shù)據(jù)或未給出每只動(dòng)物的血藥濃度值是經(jīng)常出現(xiàn)的問(wèn)題。另外,，在測(cè)定血藥濃度的試驗(yàn)中采血時(shí)間的選擇不當(dāng)也是常見(jiàn)問(wèn)題,，如采血時(shí)間太短，未按照t/12的長(zhǎng)短進(jìn)行,，如t1/2為60min,，符合要求的采血時(shí)間應(yīng)為4-5個(gè)半衰期長(zhǎng)，即240-300min左右,，但實(shí)際僅觀察到給藥后18min,，此種情況多是由于方法的靈敏度不夠，無(wú)法再對(duì)低濃度的血藥濃度進(jìn)行測(cè)定所致,。
4．藥代參數(shù)：該部分的主要問(wèn)題包括：（1）未能全面提供藥代參數(shù),，如AUC，T1/2,，CL,，生物利用度，Vd等,；（2）線性動(dòng)力學(xué)確定的依據(jù)不足,，試驗(yàn)結(jié)果顯示有的參數(shù)（t1/2）符合線性動(dòng)力學(xué)，有的符合（如AUC, Vd等與劑量有明顯關(guān)系）非線性動(dòng)力學(xué)，但卻不對(duì)各矛盾的結(jié)果進(jìn)行分析和解釋,；（3）對(duì)參數(shù)與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果出現(xiàn)很大差異的情況不進(jìn)行分析或查找原因,；（4）三個(gè)劑量的參數(shù)之間相差較大，如高,、中劑量的AUC幾乎重疊或增大劑量AUC反而明顯降低等,；不同給藥途徑的t1/2相差較大，如肌肉注射和靜脈注射的t1/2分別為1.06和0.39小時(shí),；不同動(dòng)物間的差數(shù)相差較大,，如犬的大鼠的T1/2分別為0.5小時(shí)和8-9小時(shí)等。當(dāng)參數(shù)出現(xiàn)明顯異常時(shí),，僅羅列結(jié)果,，而不對(duì)結(jié)果進(jìn)行說(shuō)明、分析和判斷,。
5．分布試驗(yàn)：該部分的問(wèn)題較多,。（1）分布試驗(yàn)中考察的指標(biāo)不全面，如藥效學(xué)試驗(yàn)與藥代動(dòng)力學(xué)研究相分離,，不能根據(jù)藥效靶效應(yīng)器官進(jìn)行相關(guān)組織分布的測(cè)定,，如治療骨質(zhì)疏松藥物的藥效靶器官和抗腫瘤藥物的毒性靶器官均為骨組織，但卻忽視了對(duì)骨組織的分布測(cè)定等,。（應(yīng)根據(jù)藥物作用的靶效應(yīng)器官和靶毒性器官進(jìn)行組織分布的檢測(cè),，這對(duì)揭示藥物作用具有重要作用）（2）對(duì)口服給藥途徑的藥物，當(dāng)發(fā)現(xiàn)胃壁和腸壁中分布較高,，且糞便排泄率也較高時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步搞清是未吸收造成的直接排泄,，還是從腸道排泄,，不應(yīng)僅根據(jù)糞排率推算生物利用度。（3）血中濃度測(cè)不出,，但卻有組織分布時(shí),，應(yīng)進(jìn)一步搞清原因。（與其他藥物有相似的代謝特性,，則應(yīng)提供相關(guān)的文獻(xiàn)資料）,。（4）當(dāng)組織分布的結(jié)果與靶效應(yīng)器官不相符或與藥物起效及作用持續(xù)的時(shí)間不相符時(shí)，不做任何解釋和分析,。如用于心源性休克和冠心病的藥物,，藥效和機(jī)制研究的靶器官均為心臟，但藥代組織分布測(cè)定表明心臟中無(wú)任何分布,；或給藥后短時(shí)間內(nèi)即已測(cè)不出組織分布,，但藥效作用還存在，應(yīng)進(jìn)一步分析、解釋是因檢測(cè)靈敏度不夠,，還是因藥物可能在機(jī)體內(nèi)發(fā)生了代謝,，代謝物是否為發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)（即應(yīng)明確是方法學(xué)問(wèn)題，還是物質(zhì)基礎(chǔ)未搞清）,。（5）在進(jìn)行組織分布測(cè)定時(shí)未同時(shí)測(cè)定血藥濃度,，或血藥濃度結(jié)果與血藥濃度試驗(yàn)中的結(jié)果發(fā)生矛盾，例如某藥物給藥后某一時(shí)間點(diǎn)的血濃為78ng/ml,，而相同給藥劑量,、相同給藥后時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度試驗(yàn)中卻顯示為206ng/ml，相差近3倍,，這種情況一般為方法學(xué)有問(wèn)題,。（6）分布試驗(yàn)中選擇的劑量不符合要求，有的大大超過(guò)藥效學(xué)有效劑量,。（7）分布試驗(yàn)中檢測(cè)總時(shí)間選擇不當(dāng),，如有的藥物僅測(cè)定了給藥后40min的組織分布，但其他試驗(yàn)如荷瘤動(dòng)物分布試驗(yàn)卻顯示出60min分布達(dá)高峰,，480min時(shí)瘤組織中仍有分布的結(jié)果,，顯然選擇40min的觀測(cè)時(shí)間明顯不夠。另外,，檢測(cè)的各試驗(yàn)點(diǎn)選擇不當(dāng),，如僅選擇給藥后2個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行分布試驗(yàn)，并不能充分反映出藥物在體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布情況和維持時(shí)間,。（8）當(dāng)分布試驗(yàn)的結(jié)果顯示某一組織內(nèi)分布異常高時(shí),，未結(jié)合毒理學(xué)研究分析其可能的毒性靶器官。（9）對(duì)不同方法測(cè)定的組織分布相矛盾的結(jié)果不能充分解釋和分析,，如小鼠3H-標(biāo)記法和大動(dòng)物GC-MS法測(cè)定的結(jié)果顯示,，小鼠腦和脂肪組織內(nèi)有藥物分布，但大動(dòng)物這兩個(gè)組織中卻無(wú)分布,，對(duì)此不能作出合理解釋,，也就不能相應(yīng)地對(duì)長(zhǎng)毒試驗(yàn)中出現(xiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)的毒性作出解釋。
6．排泄試驗(yàn)：取樣時(shí)間點(diǎn)選擇不當(dāng),，如尿液收集時(shí)無(wú)上升支取樣點(diǎn),，一下就進(jìn)入了平臺(tái)期，必然影響了排泄的時(shí)間和量的判斷,。藥物排泄的途徑觀察的不全面,，如當(dāng)血藥濃度測(cè)定發(fā)現(xiàn)有雙峰現(xiàn)象時(shí)，未做膽汁排泄試驗(yàn),，因此就不能全面,、合理地反映出藥物的排泄途徑,。另外，排泄試驗(yàn)的數(shù)據(jù)提供的不全面,，如僅提供某個(gè)時(shí)間點(diǎn)的累積排泄率,，而不提高每只動(dòng)物不同排泄途徑的實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)。
7．代謝或生物轉(zhuǎn)化：藥物在體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化的研究是闡明藥物進(jìn)入體內(nèi)變化,，揭示藥物及其代謝物在體內(nèi)消長(zhǎng),，以及藥理作用和毒性的重要環(huán)節(jié)。該部分研究也是中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究的難點(diǎn),。幾乎全部藥代資料均不能提供該部分的試驗(yàn)結(jié)果,，多數(shù)對(duì)可能出現(xiàn)代謝物的情況僅通過(guò)推測(cè)而得出初步結(jié)論。如,，當(dāng)色譜圖顯示出有未知峰時(shí),，提示體內(nèi)可能發(fā)生了代謝或轉(zhuǎn)化，在此情況下不進(jìn)行進(jìn)一步的研究,，僅根據(jù)保留時(shí)間等間接推測(cè)可能的代謝物,；當(dāng)測(cè)不出血藥濃度時(shí)，也未經(jīng)過(guò)代謝研究就盲目地推測(cè)藥物大部分被代謝,，這樣推測(cè)的依據(jù)顯然是不充分的,。如一般認(rèn)為甙（苷）口服后在腸道中經(jīng)腸道菌群水解成甙元（苷元）后才可在小腸下部吸收，而顯示藥效,，但有的試驗(yàn)卻不能測(cè)出體內(nèi)存在其代謝產(chǎn)物甙元,，因此對(duì)發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)就無(wú)從判斷。
8．血漿蛋白結(jié)合率：許多申報(bào)資料忽視了該項(xiàng)測(cè)定,，而不提供血漿蛋白結(jié)合率的資料,。有的試驗(yàn)不規(guī)范，如選用大鼠血清而不是小牛血清測(cè)定,，而補(bǔ)充資料中顯示兩種血清測(cè)定的血漿蛋白結(jié)合率結(jié)果相差很到,，如大鼠血清測(cè)定值為15%，而小牛血清卻為46%,。因此，正確的試驗(yàn)方法對(duì)評(píng)價(jià)各項(xiàng)指標(biāo)起到至關(guān)重要的作用,。
9．生物利用度：口服給藥的品種生物利用度的問(wèn)題很突出,。多數(shù)情況均求不出生物利用度或得到不正確的生物利用度的結(jié)果。有的因藥物的水溶性較低,，而強(qiáng)調(diào)不能靜脈給藥,，故不提供絕對(duì)生物利用度結(jié)果，但也不進(jìn)行相對(duì)生物利用度的測(cè)定,。有的求出的生物利用度明顯錯(cuò)誤,，分析原因,，可能主要是因?yàn)榉椒▽W(xué)的靈敏度較低，故導(dǎo)致在口服藥效學(xué)有效劑量下測(cè)不出血藥濃度,，而盲目通過(guò)增大劑量的方法進(jìn)行試驗(yàn),，這樣勢(shì)必造成口服給藥量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)靜脈注射劑量，如有的藥物口服劑量是靜脈注射劑量的400倍才能測(cè)出血藥濃度,，因此計(jì)算出的生物利用度非常低,，僅0.15%左右，這種情況下計(jì)算出的生物利用度根本不能如實(shí)地反映出藥物真正吸收利用的情況,。

二,、幾點(diǎn)思考
通過(guò)上述對(duì)中藥藥代動(dòng)力學(xué)資料中存在問(wèn)題的分析和歸納，得出以下幾點(diǎn)思考：

（一）第一類中藥新藥進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)研究的必要性

通過(guò)藥代動(dòng)力學(xué)研究可確定藥物在體內(nèi)的代謝過(guò)程和特點(diǎn),，對(duì)該藥物是否具備成為新藥的條件作出初步判斷的基礎(chǔ),。通過(guò)對(duì)藥物及其代謝產(chǎn)物體內(nèi)經(jīng)時(shí)變化的研究，可有利于對(duì)其藥效強(qiáng)度和毒性作用的時(shí)程變化作出相關(guān)分析,，藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)也可為毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)和毒理效應(yīng)分析提供依據(jù),。通過(guò)對(duì)不同種屬動(dòng)物的藥代動(dòng)力學(xué)研究，可闡明藥物體內(nèi)處理的種屬差異,，為分析藥效學(xué)的種屬差異提供基礎(chǔ),。通過(guò)對(duì)體液和不同組織器官藥物濃度的測(cè)定，可進(jìn)行藥物體內(nèi)分布與作用靶器官的相關(guān)性分析,。只有認(rèn)清了藥物在體內(nèi)吸收,、分布、代謝和排泄的基本規(guī)律以及生物利用度,，才能為臨床制定安全,、有效、合理的用藥方案提供基礎(chǔ)支持,。
WHO曾強(qiáng)調(diào)“對(duì)評(píng)價(jià)藥物療效與毒性來(lái)說(shuō),，藥物動(dòng)力學(xué)的研究，不僅在臨床前研究階段,，而且在新藥的所有階段都很重要”,。中藥藥動(dòng)學(xué)的研究同樣對(duì)新藥的研發(fā)，對(duì)提高中藥新藥的研制水平,，對(duì)促進(jìn)中藥現(xiàn)代化和中藥走向世界都具有極為重要的意義,。但由于中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究難度較大，任務(wù)艱巨,，需要在借鑒化學(xué)藥物藥代動(dòng)力學(xué)研究方法,、吸收現(xiàn)代科學(xué)知識(shí)的同時(shí)，在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下,，不斷創(chuàng)新,、完善,、構(gòu)建適合于中藥藥動(dòng)學(xué)研究的新理論、新技術(shù)和新方法,，在逐漸的探索過(guò)程中不斷地提高,。無(wú)庸質(zhì)疑，也正是由于中藥藥代動(dòng)力學(xué)的難度和困難,，更說(shuō)明進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究的必要性,。

（二）進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)特征參數(shù)測(cè)定的意義

可根據(jù)吸收速率常數(shù)、消除速率常數(shù),、半衰期,、表觀分布容積、生物利用度等,，作為中藥劑型選擇和給藥途徑選擇的依據(jù),。如對(duì)半衰期較短、給藥頻繁的藥物可制成緩釋制劑,，對(duì)治療指數(shù)窄的藥物可制成控釋制劑,，對(duì)在胃腸道不穩(wěn)定或肝臟首過(guò)效應(yīng)大的藥物可制成注射劑或其他非口服制劑等；如多肽,、酶類藥物口服制劑的生物利用度很低,，一般采用注射給藥途徑。通過(guò)對(duì)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的研究,，還可優(yōu)化制備工藝和工藝參數(shù),，也可用來(lái)評(píng)價(jià)制劑工藝的優(yōu)劣等。通過(guò)藥動(dòng)學(xué)研究得出的藥物在體內(nèi)的吸收,、分布,、代謝、排泄等方面的重要資料,，可以為今后藥物的結(jié)構(gòu)改造提供理論依據(jù)和研究方向,，以定向?qū)ふ摇⒀兄瞥龈嗟牡投?、長(zhǎng)效,、高效、穩(wěn)定,、劑量小,、副作用低的新藥。藥代動(dòng)力學(xué)的研究結(jié)果可用于闡明中醫(yī)藥防病治病的機(jī)制,，以及科學(xué)合理地制定臨床給藥方案，即妥善設(shè)計(jì)給藥方法,，解決合理用藥問(wèn)題（如計(jì)算首次劑量,、維持劑量,、給藥間隔時(shí)間、給藥途徑等）,，以使藥物選擇性地到達(dá)靶器官,，并在一定時(shí)間內(nèi)維持有效濃度的水平，從而提高藥效,，減少不良反應(yīng)等,。
（三） 藥代動(dòng)力學(xué)研究方法的選擇
方法學(xué)的選擇和建立直接影響到藥代動(dòng)力學(xué)研究的結(jié)果和評(píng)價(jià)。隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展和配套儀器分析技術(shù)的成熟,，特別是高效液相色譜儀,、氣相色譜儀、氣質(zhì)聯(lián)用色譜儀,、液質(zhì)聯(lián)用色譜儀,、放射性同位素分析等技術(shù)應(yīng)用的日益廣泛，已為中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究提供了相當(dāng)?shù)募夹g(shù)支持和保證,。
在進(jìn)行一類中藥新藥藥代動(dòng)力學(xué)研究時(shí)應(yīng)具體采用什么樣的分析方法,，需要針對(duì)藥物的特性，如應(yīng)明確待測(cè)藥物屬于生物堿類,、苷類,、有機(jī)酸類、內(nèi)酯類,，還是其他類型,；待測(cè)藥物的理化性質(zhì)如何，包括化學(xué)結(jié)構(gòu),、分子式,、分子量、熔點(diǎn),、溶解度,、脂溶性等，這對(duì)估計(jì)在體內(nèi)的可能代謝產(chǎn)物,，確定提取藥物的溶劑系統(tǒng)及予處理方法都有較大的作用,；此外，也應(yīng)了解相關(guān)的藥效學(xué)資料,，如動(dòng)物的有效劑量及臨床人擬用量等,，這對(duì)估計(jì)可能的血藥濃度范圍，考慮測(cè)定方法的靈敏度等也都起到相當(dāng)?shù)淖饔?。?dāng)然,，在研究或立題的基礎(chǔ)階段就應(yīng)著重方法學(xué)的探索，就應(yīng)盡量采用較高靈敏度,、準(zhǔn)確度和專一性的方法,，以滿足對(duì)低濃度藥物的測(cè)定,。以下是目前中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究中常見(jiàn)的兩種分析方法。
（1） 高效液相色譜法：目前,，多數(shù)申報(bào)藥代資料基本采用HPLC法,。此
方法是70年代發(fā)展起來(lái)的，特別適合高沸點(diǎn),、大分子和熱穩(wěn)定性差的化合物的分離分析,，目前仍是藥物分析中最常用的手段。近年來(lái)其檢測(cè)部分有了較大的發(fā)展,。其中紫外檢測(cè)法是最常用的檢測(cè)方法,；對(duì)小劑量低血濃度的藥物，則可考慮采用熒光或電化學(xué)檢測(cè)的方法,。另外,，利用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器對(duì)無(wú)紫外吸收的化合物，如甾體化合物,、人參皂苷等均具有較好的檢出靈敏度,。中藥中有些紫外吸收弱，或無(wú)特征紫外吸收的成分,，直接用HPLC測(cè)定,，其靈敏度和分離度均不佳，此時(shí)可利用柱前,、柱后衍生化的方法,，使這些成分較精確地測(cè)定出來(lái)。
（2）氣相色譜法：該方法對(duì)脂溶性強(qiáng),、易氣化的藥物的檢測(cè)為常用手段,。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)已成熟，該方法綜合了氣相色譜和質(zhì)譜的優(yōu)點(diǎn)（氣相色譜的高柱效,、高分離性能與質(zhì)譜的定性功能）,，彌補(bǔ)了各自的缺陷，因而具有靈敏度高,、分析速度快,、分辨率高、鑒別能力強(qiáng)的特點(diǎn),，是目前能夠達(dá)到pg檢測(cè)水平的方法?，F(xiàn)已有部分申報(bào)資料開(kāi)始應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方法，進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究,。 盡管申報(bào)資料方法學(xué)部分還存在許多的問(wèn)題和不足,，但將GC-MS聯(lián)用技術(shù)應(yīng)用于中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究，已是中藥分析手段現(xiàn)代化的重要體現(xiàn)和嘗試。我們堅(jiān)信,，隨著分析儀器的不斷完善與發(fā)展,，檢測(cè)技術(shù)的成熟與推廣，應(yīng)用范圍的擴(kuò)大,，中藥藥代動(dòng)力學(xué)的方法學(xué)研究會(huì)日臻完善和提高。
（四） 中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究中應(yīng)注意的問(wèn)題
1． 分析方法建立時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題
方法學(xué)考核的內(nèi)容應(yīng)完善,，包括靈敏度（檢測(cè)限）,，精密度（日內(nèi)變異系數(shù)）和重復(fù)性（日間變異系數(shù)），回收率（準(zhǔn)確度）,，線性（標(biāo)準(zhǔn)曲線）,，特異性（專屬性，選擇性）等方面,。應(yīng)清楚說(shuō)明分析方法的靈敏度,、特異性、精密度,、回收率和線性范圍,。其中，特異性是方法建立的關(guān)鍵,，只有特異性達(dá)到要求后,，測(cè)得的結(jié)果才有意義，要做到這點(diǎn),，必須對(duì)生物樣品進(jìn)行有效的分離與選用有足夠?qū)Ｒ恍缘臋z測(cè)器,。要重視穩(wěn)定性試驗(yàn)，保證樣品處理開(kāi)始到分析完成的整個(gè)過(guò)程中樣品的予處理,、貯藏,、凍融、放置等環(huán)節(jié)的穩(wěn)定,，這對(duì)定量結(jié)果的可靠性分析是不可缺少的必要條件,。標(biāo)準(zhǔn)曲線制作時(shí)，生物樣品分析中的標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)該是空白生物樣品中加入藥物后配制成一定濃度,，經(jīng)予處理后測(cè)定生物樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線,，用直接加入流動(dòng)相內(nèi)配制的溶液做樣品分析的標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法是錯(cuò)誤的。對(duì)分析樣品而言,，工作曲線的精密度和準(zhǔn)確度以及RSD應(yīng)不超過(guò)10%,。線性范圍選擇時(shí)，應(yīng)至少選擇5個(gè)濃度點(diǎn),，要符合藥物有效濃度的范圍,，即標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)覆蓋整個(gè)待測(cè)樣品的濃度范圍。最低檢測(cè)限（LOQ）要至少能檢出3-5個(gè)消除半衰期后的血藥濃度或能檢出鋒濃度（Cmax）的1/10-1/20的血藥濃度。其LOQ檢出濃度的信號(hào)應(yīng)達(dá)到噪音的10倍,，藥時(shí)曲線消除相的低濃度必須有一定的準(zhǔn)確度,，對(duì)測(cè)定的藥物濃度在線性范圍之外時(shí)不能通過(guò)外推法求得。在分析樣品的過(guò)程中,，每次應(yīng)用2-3個(gè)隨行標(biāo)準(zhǔn)做為質(zhì)控樣品,，只有當(dāng)質(zhì)控樣品代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算的濃度與其靶值比較，其準(zhǔn)確度,、精密度均符合一定要求時(shí),，才可沿用原標(biāo)準(zhǔn)曲線，否則需重新制作新的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
2． 研究?jī)?nèi)容方面應(yīng)注意的問(wèn)題
中藥藥代動(dòng)力學(xué)方面目前尚無(wú)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn),，仍按化學(xué)藥的要求進(jìn)行。研究的內(nèi)容應(yīng)包括藥物的吸收,、分布,、代謝、排泄及蛋白結(jié)合率等,。若為口服制劑,，還應(yīng)測(cè)定絕對(duì)生物利用度；若藥物在體內(nèi)被明顯代謝,，則要求盡量確定藥物在動(dòng)物體內(nèi)的代謝部位,、代謝產(chǎn)物、代謝途徑,、代謝物活性或毒性等,。另外，提供資料時(shí)應(yīng)全面,，應(yīng)盡量提供原始數(shù)據(jù)和原始圖譜等,。
具體應(yīng)注意以下問(wèn)題：（1）樣品：必須為原料藥（有效成分）或臨床制劑，不得使用標(biāo)準(zhǔn)品,。（2）體內(nèi)藥物濃度檢測(cè)方法：應(yīng)符合生物樣品測(cè)定要求,，應(yīng)選用適宜的、靈敏度較高的檢測(cè)方法,。（3）動(dòng)物選擇：盡量選擇與藥效試驗(yàn)相同的動(dòng)物,，必須進(jìn)行兩種動(dòng)物的藥代研究，包括嚙齒類和非嚙齒類動(dòng)物,。（4）劑量及給藥途徑的選擇：應(yīng)采用擬推薦的臨床給藥途徑,，在藥效學(xué)有效劑量和長(zhǎng)毒劑量區(qū)域內(nèi)選則三個(gè)劑量做藥時(shí)曲線。不能靠隨意增大劑量來(lái)滿足方法靈敏度的不足,。（5）藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)：應(yīng)提供全面的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),， Cmax,，Tmax, T1/2醹，T1/2鈣,，Vd,，Cl等?？诜o藥應(yīng)提供生物利用度數(shù)據(jù),，如無(wú)法提供應(yīng)充分說(shuō)明理由。（6）應(yīng)測(cè)定血漿蛋白結(jié)合率,。（7）分布試驗(yàn)：至少應(yīng)包括心,、肝、脾,、肺、腎,、腦,、胃腸道、生殖腺,、脂肪組織,、骨骼肌等。還應(yīng)結(jié)合藥效學(xué)作用的靶器官或毒性靶器官觀察相應(yīng)的組織分布,。（8）排泄試驗(yàn)：應(yīng)至少進(jìn)行尿,、糞、膽汁中的排泄量測(cè)定,。（9）代謝研究：當(dāng)原型藥物的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程不能解釋藥效時(shí),，應(yīng)研究活性代謝物，對(duì)可能的原因做出分析,。

三,、結(jié)語(yǔ)
中藥現(xiàn)代化自1997年啟動(dòng)以來(lái)，已取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步,。我們深知,，每一個(gè)戰(zhàn)略目標(biāo)的實(shí)現(xiàn)都需要有深厚的基礎(chǔ)研究作為理論依據(jù)和技術(shù)支撐。隨著我國(guó)創(chuàng)新中藥研究的加速發(fā)展,，隨著一類中藥新藥申報(bào)品種的增多,，已暴露出中藥藥代動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)研究環(huán)節(jié)的薄弱。但因?yàn)槟壳爸兴幩幋鷦?dòng)力學(xué)研究仍處于剛剛起步階段和開(kāi)創(chuàng)性研究階段,，出現(xiàn)一些問(wèn)題是難免的,。關(guān)鍵是研制單位必須重視和加強(qiáng)基礎(chǔ)研究，不斷探索,，不斷完善中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究的技術(shù)和方法,，增強(qiáng)創(chuàng)新能力,。只有這樣，才能使中藥藥代動(dòng)力學(xué)的發(fā)展不斷走向新的高度,。
中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究的現(xiàn)狀對(duì)我們的審評(píng)工作也提出了相應(yīng)的較高的要求,。一方面，中藥藥代動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)研究的薄弱和剛剛起步,，使我們的技術(shù)審評(píng)無(wú)前車之鑒,；另一方面，又要求我們必須充分認(rèn)識(shí)到中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究的現(xiàn)狀,，結(jié)合其發(fā)展的實(shí)際,，即要在技術(shù)上嚴(yán)格要求，又不能過(guò)分苛求,，不延緩或阻礙中藥創(chuàng)新藥物研發(fā)的進(jìn)程,。我們將在監(jiān)、幫,、促方針的指導(dǎo)下,，積極鼓勵(lì)研發(fā)者在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下不斷完善，構(gòu)建適合于中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究的理論和技術(shù)體系,。