在最新的Nature Methods雜志上,,謝曉亮研究組發(fā)表文章:RNAi screening for fat regulatory genes with SRS microscopy,,提出了利用其研究組自身研發(fā)的技術(shù)——受激拉曼散射(stimulated Raman scattering,,SRS)顯微技術(shù)進(jìn)行RNA干擾實(shí)驗(yàn)的新方法,。
這種新方法利用無需熒光標(biāo)記的受激拉曼散射顯微儀進(jìn)行定量成像,,克服了生化分析方法繁瑣的色譜分析等問題,,以及CARS顯微方法背景信號(hào)高,,結(jié)果不精確等問題,是一種簡單精確,,適用于高通量分析的新技術(shù),。在這篇文章中,研究人員就利用這種方法篩選發(fā)現(xiàn)了8個(gè)在脂肪儲(chǔ)存調(diào)控方面的新調(diào)控因子,。
肥胖是現(xiàn)代社會(huì)的一大病癥,,肥胖會(huì)引起各種慢性疾病,比如II型糖尿病,,心血管疾病等等,。為了更好的了解肥胖,及其相關(guān)的代謝失序問題,,我們需要深入分析脂肪在細(xì)胞水平和組織水平堆積的調(diào)控機(jī)制,,目前已經(jīng)進(jìn)行了一些模式生物的脂肪儲(chǔ)存調(diào)控因子的全基因組分析,但是這些還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠,。
一般線蟲脂肪儲(chǔ)存調(diào)控因子分析方法主要包括傳統(tǒng)的生物化學(xué)分析方法,,比如進(jìn)行線蟲的固定染色,熒光成像等,,近期一些研究組報(bào)道了利用CARS顯微技術(shù)來分析,。但是這兩種方法都存在一些局限性,,生化分析方法需要從線蟲中提取脂肪,進(jìn)行繁瑣的色譜分析工作,,這在基因組水平上是不可能完成,,而且使用到的一些有機(jī)溶劑也會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)分析。而利用CARS顯微技術(shù)進(jìn)行分析又存在背景信號(hào)高,,靈敏度受限等問題,。
這篇文章應(yīng)用的SRS顯微技術(shù)能通過對(duì)激光迅速反應(yīng),精確調(diào)制來去除背景噪音,,從而不僅能夠得到與傳統(tǒng)拉曼光譜一樣的譜圖,,而且信號(hào)強(qiáng)度高了幾個(gè)數(shù)量級(jí),利用這種方法和RNAi篩選相結(jié)合,,研究人員就能在生理?xiàng)l件下尋找脂肪儲(chǔ)存調(diào)控基因了,,經(jīng)過實(shí)驗(yàn)分析,研究人員從272個(gè)基因中找到了9個(gè)關(guān)鍵調(diào)控因子,。
將SRS顯微技術(shù)與RNAi技術(shù)結(jié)合起來,,能幫助研究人員在線蟲的活性生理?xiàng)l件下觀察脂肪代謝調(diào)控,而且這種方法無需標(biāo)記,,極大的簡化了樣品準(zhǔn)備過程,,適用于模式生物的細(xì)胞追蹤,也有利用高通量篩選分析