1,、計數(shù)器測定法:
即用血細胞計數(shù)器進行計數(shù),。取一定體積的樣品細胞懸液置于血細胞計數(shù)器的計數(shù)室內,用顯微鏡觀察計數(shù),。由于計數(shù)室的容積是一定的(O.1mm3),,因而根據(jù)計數(shù)器刻度內的細菌數(shù),可計算樣品中的含菌數(shù),。本法簡便易行,,可立即得出結果。
本法不僅適于細菌計數(shù),,也適用于酵母菌及霉菌孢子計數(shù),。
2、電子計數(shù)器計數(shù)法:
電子計數(shù)器的工作原理是測定小孔中液體的電阻變化,,小孔僅能通過一個細胞,,當一個細胞通過這個小孔時,電阻明顯增加,,形成一個脈沖,,自動記錄在電子記錄裝置上。
該法測定結果較準確,,但它只識別顆粒大小,,而不能區(qū)分是否為細菌。因此,,要求菌懸液中不含任何碎片,。
3,、活細胞計數(shù)法
常用的有平板菌落計數(shù)法,是根據(jù)每個活的細菌能長出一個菌落的原理設計的,。取一定容量的菌懸液,,作一系列的倍比稀釋,然后將定量的稀釋液進行平板培養(yǎng),,根據(jù)培養(yǎng)出的菌落數(shù),,可算出培養(yǎng)物中的活菌數(shù)。此法靈敏度高,,是一種檢測污染活菌數(shù)的方法,,也是目前國際上許多國家所采用的方法。使用該法應注意:①一般選取菌落數(shù)在30~300之間的平板進行計數(shù),,過多或過少均不準確,;②為了防止菌落蔓延,影響計數(shù),,可在培養(yǎng)基中加入O.001%2,,3,5一氯化三苯基四氮唑(TTC),;③本法限用于形成菌落的微生物,。
廣泛應用于水、牛奶,、食物,、藥品等各種材料的細菌檢驗,是最常用的活菌計數(shù)法,?!?/p>
4、比濁法
比濁法是根據(jù)菌懸液的透光量間接地測定細菌的數(shù)量,。細菌懸浮液的濃度在一定范圍內與透光度成反比,,與光密度成正比,所以,,可用光電比色計測定菌液,,用光密度(OD值)表示樣品菌液濃度。
此法簡便快捷,,但只能檢測含有大量細菌的懸浮液,,得出相對的細菌數(shù)目,對顏色太深的樣品,,不能用此法測定,。
5、測定細胞重量法
此法分為濕重法和干重法,。濕重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后將濕菌體進行稱重,;干重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后,,以清水洗凈放人干燥器加熱烘干,使之失去水分然后稱重,。
此法適于菌體濃度較高的樣品,是測定絲狀真菌生長量的一種常用方法,。
6,、測定細胞總氮量或總碳量
氮、碳是細胞的主要成分,,含量較穩(wěn)定,,測定氮、碳的含量可以推知細胞的質量,。此法適于細胞濃度較高的樣品,。
7、顏色改變單位法(colour change unit,簡稱CCU)
這種方法通常用于很小,,用一般的比濁法無法計數(shù)的微生物,,比如支原體等,因為支原體的液體培養(yǎng)物是完全透明的,,呈現(xiàn)為清亮透明紅色,,因此無法用比濁法來計數(shù),由于支原體固體培養(yǎng)很困難,,用cfu法也不容易計數(shù),,因此需要用特殊的計數(shù)方法,即CCU法,。它是以微生物在培養(yǎng)基中的代謝活力為指標,,來計數(shù)微生物的相對含量的,下面以解脲脲原體為例,,簡單介紹其操作:
(1).取12只無菌試管,,每一管裝1.8ml解脲脲原體培養(yǎng)基。
(2).在第一管加入0.2ml待測解脲脲原體菌液,,充分混勻,,從中吸取0.2ml加入第二管,依次類推,,10倍梯度稀釋,,一直到最末一管
(3).于37度培養(yǎng),以培養(yǎng)基顏色改變的最末一管作為待測菌液的CCU,,也就是支原體的最大代謝活力,,比如第六管出現(xiàn)顏色改變,他的相對濃度就是10的6次方CCU/ml.
一般來說,,比濁法和菌落計數(shù)法就可以滿足絕大多數(shù)細菌的計數(shù),,但是對支原體這樣比較特殊的微生物,,用CCU法比較合適。
測定微生物生長的方法很多,,各種方法均有其優(yōu)缺點,,也不是在任何情況下都適用。在微生物學工作中一般常用的是平皿菌落計數(shù)法,、計數(shù)器法和比濁法,。至于哪種方法比較適合你,得根據(jù)你的具體條件而定,。