特殊的分子量標(biāo)準(zhǔn)一般而言就是修飾標(biāo)記蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)嗎通常來(lái)將,它們都是western blot專用的蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn),。下面是關(guān)于這類特殊蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)的介紹:
①生物素標(biāo)記蛋白標(biāo)準(zhǔn)
未染色的Marker在做Western時(shí),需要在印跡前先用麗春紅或者是SYPRO熒光蛋白染色液等不干擾Western Blot的染色方法顯色,,在膠上做標(biāo)記最后才能“拼”在最后的結(jié)果中,,如果是預(yù)染的Marker就要在轉(zhuǎn)膜后標(biāo)記膜,或者剪膜,,最后在“拼上”,。要是想直接將Marker結(jié)果顯示在最后結(jié)果上,,不用手工作圖或者拼接,那就要Western專用的Marker了,。比如生物素標(biāo)記的蛋白標(biāo)準(zhǔn),。這種方法主要是配合化學(xué)發(fā)光法:在蛋白分子量上標(biāo)記生物素,通過(guò)帶有抗生物素的抗體或者偶聯(lián)鏈親霉素的抗體,,在化學(xué)發(fā)光檢測(cè)到目的蛋白帶時(shí)就可以同時(shí)看到相應(yīng)的分子量標(biāo)準(zhǔn)一起發(fā)光顯影了,。不同于普通蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)的便宜、預(yù)染蛋白分子量的方便,,這一方法的優(yōu)點(diǎn)是與Marker和目的蛋白對(duì)應(yīng)性好,,同時(shí)在同張片上顯示,不用拼接,,利于分析,。缺點(diǎn)是如果樣品中帶有生物素背景,那個(gè)抗生物素抗體有可能影響結(jié)果,,而且反應(yīng)體系太過(guò)復(fù)雜也會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
②特殊標(biāo)記蛋白標(biāo)準(zhǔn)
在經(jīng)過(guò)修飾的蛋白標(biāo)準(zhǔn)中,除了生物素標(biāo)記以外,,近些年由于下游蛋白操作的豐富化與復(fù)雜化,,也出現(xiàn)帶有“尾巴”的蛋白標(biāo)準(zhǔn)。比如His-Tag,,如果每個(gè)Marker條帶都有His –tag,,那二抗添加His-Taq抗體很容易將Marker條帶顯示在Western結(jié)果上。很方便,,問(wèn)題就是有可能有潛在的干擾,,比如樣品中正好有類似Histag的結(jié)構(gòu)。不過(guò)這可以通過(guò)對(duì)照檢測(cè)的,。這些經(jīng)過(guò)特殊標(biāo)記的蛋白Marker一般都不會(huì)影響目的蛋白的正常顯色,,而且和目的蛋白顯色在同一張膜上,有時(shí)還可以作為陽(yáng)性對(duì)照,,但是各自的檢測(cè)顯色機(jī)制和效果又有一些區(qū)別。
①生物素標(biāo)記蛋白標(biāo)準(zhǔn)
未染色的Marker在做Western時(shí),需要在印跡前先用麗春紅或者是SYPRO熒光蛋白染色液等不干擾Western Blot的染色方法顯色,,在膠上做標(biāo)記最后才能“拼”在最后的結(jié)果中,,如果是預(yù)染的Marker就要在轉(zhuǎn)膜后標(biāo)記膜,或者剪膜,,最后在“拼上”,。要是想直接將Marker結(jié)果顯示在最后結(jié)果上,,不用手工作圖或者拼接,那就要Western專用的Marker了,。比如生物素標(biāo)記的蛋白標(biāo)準(zhǔn),。這種方法主要是配合化學(xué)發(fā)光法:在蛋白分子量上標(biāo)記生物素,通過(guò)帶有抗生物素的抗體或者偶聯(lián)鏈親霉素的抗體,,在化學(xué)發(fā)光檢測(cè)到目的蛋白帶時(shí)就可以同時(shí)看到相應(yīng)的分子量標(biāo)準(zhǔn)一起發(fā)光顯影了,。不同于普通蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)的便宜、預(yù)染蛋白分子量的方便,,這一方法的優(yōu)點(diǎn)是與Marker和目的蛋白對(duì)應(yīng)性好,,同時(shí)在同張片上顯示,不用拼接,,利于分析,。缺點(diǎn)是如果樣品中帶有生物素背景,那個(gè)抗生物素抗體有可能影響結(jié)果,,而且反應(yīng)體系太過(guò)復(fù)雜也會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
②特殊標(biāo)記蛋白標(biāo)準(zhǔn)
在經(jīng)過(guò)修飾的蛋白標(biāo)準(zhǔn)中,除了生物素標(biāo)記以外,,近些年由于下游蛋白操作的豐富化與復(fù)雜化,,也出現(xiàn)帶有“尾巴”的蛋白標(biāo)準(zhǔn)。比如His-Tag,,如果每個(gè)Marker條帶都有His –tag,,那二抗添加His-Taq抗體很容易將Marker條帶顯示在Western結(jié)果上。很方便,,問(wèn)題就是有可能有潛在的干擾,,比如樣品中正好有類似Histag的結(jié)構(gòu)。不過(guò)這可以通過(guò)對(duì)照檢測(cè)的,。這些經(jīng)過(guò)特殊標(biāo)記的蛋白Marker一般都不會(huì)影響目的蛋白的正常顯色,,而且和目的蛋白顯色在同一張膜上,有時(shí)還可以作為陽(yáng)性對(duì)照,,但是各自的檢測(cè)顯色機(jī)制和效果又有一些區(qū)別。