在國家自然科學基金項目資助下,日前第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院腫瘤科和陜西省腫瘤醫(yī)院等單位共同完成的一項研究證明,,F(xiàn)AS啟動子在腫瘤細胞中具有強轉(zhuǎn)錄活性,,具有良好的腫瘤靶向性,為腫瘤靶向基因治療提供理論依據(jù),。
基因治療是目前惡性腫瘤最有前景的一種治療手段,,但是腫瘤的基因治療需要解決兩個問題,一是靶向性,,即選擇性殺傷腫瘤細胞,,而對正常細胞和組織沒有影響;其二是轉(zhuǎn)導效率問題,。利用腫瘤特異性啟動子調(diào)控治療基因在腫瘤細胞中表達是實現(xiàn)腫瘤靶向性基因治療的重要手段,。
研究人員以人基因組DNA為模板,PCR擴增FAS啟動子區(qū)680bp活性序列,,經(jīng)測序鑒定正確后,,克隆至熒光素酶表達載體pGL3-enhancer中,構(gòu)建成重組熒光素酶表達載體pCL3-FAS,。將pCL3-FAS通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染胃癌細胞系SGC-7901,、人宮頸癌細胞系Hela,、人乳腺癌細胞系SKBR3、人肝癌細胞系HepG2以及NIH3T3成纖維細胞系中,,應用熒光素酶檢測系統(tǒng)測定熒光素酶活性,,通過內(nèi)參校正得到相對轉(zhuǎn)錄活性。
結(jié)果顯示,,成果擴增出大小約為680bp的FAS啟動子序列,。經(jīng)酶切鑒定,成功構(gòu)建重組熒光素酶表達載體pGL3-FAS,。瞬間轉(zhuǎn)染pGL3-FAS,,發(fā)現(xiàn)其在SGC-7901、Hela,、SKBR3,、HepG2細胞中均具有較強的熒光素酶活性,且熒光素酶活性高于強啟動子SV40驅(qū)動的pGL3-control載體,;而在正常成纖維細胞中,,轉(zhuǎn)錄活性較低。
研究表明:人FAS基因啟動子具有高效特異性靶向多種腫瘤細胞的特點,,可以作為腫瘤靶向的調(diào)控元素用于惡性腫瘤的靶向基因治療,。