氟化學(xué)也許并不能取代經(jīng)典方法在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的應(yīng)用,，但氟化學(xué)在標(biāo)記和豐富肽的種類方面提供了一種通用且有效的方法,。
在蛋白質(zhì)組學(xué)水平上,，大多數(shù)利用質(zhì)譜來研究蛋白質(zhì)翻譯后修飾的方法，在分析前都需要大量的蛋白質(zhì)或肽（這些蛋白質(zhì)或肽包含目標(biāo)修飾）,。其中的許多方法已被改進,，有些獲得成功，有些失敗,。但是,，所有這些方法都需要一種可進行特定修飾的特殊試劑，這大大限制了這些方法的應(yīng)用,。
Novartis研究基金會基因研究所的研究人員正在尋找一種新方法,，以獲得大量含有肽的樣品，這些肽包含目標(biāo)修飾,。Eric Peters（蛋白質(zhì)輪廓/質(zhì)譜研究小組的領(lǐng)導(dǎo)者）說,，“我們想用與傳統(tǒng)分餾法不同的一些方法，實際上,，就是一種色譜或化學(xué)的方法,，就像輔酶R—鏈霉和素所做的那樣。”他的小組對一種相對較新的研究方法比較擅長,，即組合化學(xué),，學(xué)名為氟化學(xué)，這種方法可以使與氟高度化合的部分粘附在較小的有機復(fù)合物上,，從而有助于對某一化學(xué)反應(yīng)的目標(biāo)產(chǎn)物進行純化,。利用氟—氟反應(yīng)的高選擇性，標(biāo)記復(fù)合物將會與氟化硅膠緊密而有選擇地結(jié)合,，再用含有不同比例的水和甲醇的溶劑沖洗柱子,，就可以將標(biāo)記復(fù)合物從未標(biāo)記的復(fù)合物中分離出來。
這種方法已被廣泛用于特定合成,，或?qū)τ袡C溶劑中的小分子進行純化,，但還沒有應(yīng)用到含水的生物樣品中。正如Peters所說的那樣,，“你能對非常復(fù)雜的生物混合物分類嗎,？對于肽，我們可以做到,，它們并不是小分子——但你能做到嗎,？如果你能，結(jié)果會怎樣,？”
然而令他們吃驚的是,，這種方法的確有效，正如《自然-生物技術(shù)》雜志四月號所報道的那樣,。Peters的研究小組證實,，他們可以利用氟的親和性,，來獲得大量含有巰基或氨基的基團，或特定的翻譯后修飾（如磷酸化作用）的肽,。Peters說，“事實上,，我們震驚了,，它竟如此有效”。這不僅可以獲得大量的,、不同種類的肽（采用簡單的固相提取方法）,，而且與含有輔酶R的試劑相比，氟標(biāo)記的一些特性也有利于質(zhì)譜分析,，如惰性,、質(zhì)量虧損。此外,，這種方法也可用于研究新陳代謝,。為了說明這一點，Peters指出,，“如果你正在研究酮類固醇,，你不能用輔酶R衍生物來分離、有效地修復(fù)和分析這類物質(zhì),。但是,，你可以利用氟酰肼來分離出所有的含酮物質(zhì)。”因此,，這種分離生物復(fù)合物的高度正交方法,，可以被用于不同的生物研究領(lǐng)域，正如已在許多化學(xué)應(yīng)用中發(fā)揮重要作用一樣,。
REFERENCES
Brittain, S.M. et al. Enrichment and analysis of peptide subsets using fluorous affinity tags and mass spectrometry. Nat. Biotechnol. 23, 463?468 (2005). | Article | PubMed | ChemPort |
