秦娜琳 譯

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院微生物與免疫學(xué)教研室

許多胞內(nèi)病原體通過感染哺乳動物宿主誘導(dǎo)強的T細(xì)胞應(yīng)答,。在大多數(shù)情況中,，這些T細(xì)胞應(yīng)答起保護作用并可導(dǎo)致清除病原體。所以,，決定T細(xì)胞如何被激活以及它們怎樣分化成細(xì)胞因子分泌細(xì)胞和（或）細(xì)胞毒性細(xì)胞,，是重要的。相對于B細(xì)胞識別可溶性抗原,，CD8＋和CD4＋T細(xì)胞對抗原衍生肽的應(yīng)答是分別與MHCⅠ類MHCⅡ類分子密切相關(guān)的,。因此，闡明這一機制即病原體衍生抗原通過什么方式獲得遞呈,，對于理解病原體怎樣激發(fā)體內(nèi)T細(xì)胞應(yīng)答是必須的,。雖然許多優(yōu)秀研究者把注意力放在抗原加工這一機制上，但是很少有人指出宿主和病原體之間相互作用的特異性,。在這一方面,，應(yīng)該注意到這些相互作用與病原體和病原體之間的相互作用，是非常不同的,，而且可能導(dǎo)致不同細(xì)胞和分子的包容,。由于篇幅所限，我們決定將這一研究集中在兩種胞內(nèi)病原體--牛痘病毒和單核細(xì)胞增多性李斯特菌,。之所以選擇這兩種病原體,，是由于它們都可以誘導(dǎo)強的CD8＋T細(xì)胞應(yīng)答，也是因為微生物學(xué)家和免疫學(xué)家都在廣泛研究它們,。

1.引言
一些獨特特性的結(jié)合使得DC成為體內(nèi)激活病原體特異T細(xì)胞的最佳候選人,。這些特性包括：在外周組織獲得抗原的能力，遷移到次級淋巴器官以及提供輔助性T細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞活化所要求的協(xié)同輔助信號,。并且,，除了作為APC(抗原提呈細(xì)胞)的作用外，一些DC亞型能夠分泌細(xì)胞因子，從而影響T細(xì)胞的分化（如IL-12）或是促進已激活的記憶性T細(xì)胞存活（如Ⅰ型干擾素）,。
關(guān)于DC在病原體抗原加工和遞呈中的作用的許多知識是來源于體外研究的,，在這些研究中，DC被病原體提取物所激活或是被各種病原體（包括病毒,，細(xì)菌,，原蟲和真菌）所感染。雖然在DC接觸病原體時它們做些什么這一方面,，這些研究提供了新的觀點,，但是在自然或試驗感染過程中，體內(nèi)這些細(xì)胞真正做些什么這一方面仍然有待明確,。這里,，我們將研究我們現(xiàn)在所知道的在牛痘病毒（VV）和單核細(xì)胞增多性李斯特菌感染過程中DC的作用。

2.VV感染中DC的作用
2.1 VV的性質(zhì)
VV存在細(xì)胞質(zhì)中,，應(yīng)用病毒編碼的聚合酶進行復(fù)制和轉(zhuǎn)錄,，這一點和其他痘病毒科的成員是不同的。VV具有廣泛的趨向性,，能感染哺乳動物起源的許多細(xì)胞系,。VV感染都是溶細(xì)胞性的。VV有一個大的基因組（200kb）,，可表達超過 100種不同的蛋白質(zhì),，其中一些能引起強的免疫反應(yīng)。并且,，它可以產(chǎn)生許多重組VV（rVV）,，包括一些能表達良好特征模型抗原的VV（如OVA），或受體基因如增強的綠色熒光蛋白（eGFP）或是β-半乳糖苷酶,。這些rVV已經(jīng)作為研究激活VV特異性T細(xì)胞這一機制的一種手段,。
有兩種形態(tài)獨特的感染性病毒體，分別稱為胞內(nèi)成熟病毒（IMV）和胞外包膜病毒（EEV）,。IMV由包繞一層或兩層膜的核心組成,，它一直存在于細(xì)胞質(zhì)中直到細(xì)胞溶解，并能產(chǎn)生大量感染性后代,。IMV的成分被由早期管狀核內(nèi)體或順式高爾基網(wǎng)狀系統(tǒng)而來的雙層膜進一步包繞，形成胞內(nèi)包膜病毒（IEV）,。一些IEV由肌動蛋白的聚合反應(yīng)推移到細(xì)胞表面,，在那里，外層膜和胞漿膜融合,，從細(xì)胞中釋放出EEV,。更重要的是，EEV的外膜介導(dǎo)病毒與細(xì)胞表面的結(jié)合，并且它與一些包括A56R,、A34R和B5R在內(nèi)的病毒蛋白有關(guān)聯(lián),，而后者中的一些與毒力的大小有關(guān)。然而,，哪種病毒蛋白參與病毒附著,，以及它們結(jié)合哪種細(xì)胞表面受體，這一點仍然不清楚,。
2.2 VV特異性CD8+T細(xì)胞
給小鼠腹腔注射或靜脈注射rVV,可引起對針rVV抗原的強的CD8+T細(xì)胞應(yīng)答,這一點可由實驗證實,。在這些實驗中,我們發(fā)現(xiàn)已感染小鼠脾臟中提煉出的CD8+T細(xì)胞能溶解抗原-激動靶細(xì)胞.這是一高效過程,因為103VV斑塊形成單位足以激活體內(nèi)VV特異性CD8+T細(xì)胞.但是,哪種APC能提呈VV抗原？為了闡述這個問題,，Lenz等人將照射過的F1小鼠（C57BL/6×BALB/c）與C57BI/6 BM細(xì)胞重組,，構(gòu)成放射 BM嵌合體。然后用VV感染嵌和體小鼠,，該VV可表達來自LCMV的核蛋白抗原,，從而發(fā)現(xiàn)它能激活H2-Db限制性的而非H2-Kd 限制性的CTL細(xì)胞應(yīng)答，這就證實了BM誘導(dǎo)的APC對于成功激活CTL應(yīng)答是所需的,，該結(jié)果與早期的研究一致,。
2.3 體內(nèi)BM誘導(dǎo)的APC如何獲取病毒Ag？
理論上,，病毒Ag能夠通過經(jīng)典的MHC-Ⅰ類限制性抗原加工途徑（直接激活）提呈給CD8+T細(xì)胞,，在該途徑中，產(chǎn)生于感染細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)的內(nèi)源性Ag被分解成肽段,，通過抗原提呈相關(guān)轉(zhuǎn)運體（TAP）依賴機制運輸?shù)絻?nèi)質(zhì)網(wǎng),，然后表達于細(xì)胞表面的MHC-Ⅰ類分子復(fù)合體。另一方面,， APC可以從胞外獲得病毒抗原,，激活VV特異性CD8+T細(xì)胞，這稱為交叉激活機制,。交叉激活的兩種途徑都已被闡述：抗原在核內(nèi)體水解的TAP非依賴途徑以及TAP依賴的吞噬體-胞質(zhì)溶膠途徑,。作為區(qū)別這兩種可能性的一種嘗試，Norbury等人選擇性將CFSE標(biāo)記的,、OVA特異的,、TCR轉(zhuǎn)基因CD8+T細(xì)胞轉(zhuǎn)移到TAP-1缺陷鼠，并且給這些小鼠注射表達OVA的rVV,。資料證實了OVA特異性T細(xì)胞的激活發(fā)生于TAP存在時,，這一結(jié)果為交叉激活能引發(fā)體內(nèi)VV特異性CTL應(yīng)答提供了最初證據(jù)。
2.4 與直接激活相對的交叉激活
交叉激活能否單獨地引發(fā)VV特異性CD8+T細(xì)胞應(yīng)答或者也包含直接激活,？為了探究這一問題,，兩組研究者構(gòu)建了表達人類CMV蛋白-US11的rVV,。US11是一種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)居膜蛋白，可以將MHC-1類的重鏈后轉(zhuǎn)位至感染細(xì)胞的胞質(zhì)溶膠,，從而被蛋白酶體降解,。因此，感染細(xì)胞期望表達US11以抑制病毒抗原的提呈,，但是,，非感染細(xì)胞能夠通過交叉途徑獲得病毒抗原則不希望表達該蛋白。資料表明：當(dāng)通過腹腔或靜脈發(fā)生感染時,，US11的表達能強烈地抑制誘導(dǎo)初始CD8+T細(xì)胞,，這就證明了在誘導(dǎo)針對由這些途徑進入的病毒的CTL應(yīng)答中，直接激活是關(guān)鍵的,。有趣的是,，這一效應(yīng)在肌肉注射感染是較小的，而且在皮下或皮內(nèi)感染中是最低的,。把這些研究放在一起考慮,，可證明：隨著接觸VV，直接激活和交叉激活都有助于CD8+TCL的誘導(dǎo),，但是每一途徑的各自作用依賴于感染路徑而不同,。結(jié)果也表明由交叉激活和直接激活產(chǎn)生的VV決定子的集合不是完全一致的。
盡管有以上詳細(xì)的研究,，但是,，闡明病毒蛋白如何提呈給免疫系統(tǒng)，大多數(shù)最后的方法是直接看到T細(xì)胞和APC間的相互作用,。為了這個目的,，Norbury等人用一種rVV感染C57BI/6小鼠的足墊，該rVV可表達與OVA衍生肽相關(guān)的eGFP,。在感染后6小時即可從局部排出的LN中很容易發(fā)現(xiàn)病毒感染的eGFP+巨噬細(xì)胞和DC,。然而，由同焦點顯微鏡直接觀察到的細(xì)胞間相互作用表明只有DC能夠激活初始病毒特異性CD8+T細(xì)胞,。同LN中被提呈的感染DC的數(shù)量相比,，最后提呈有所下降。這些資料為病毒感染的APC激活體內(nèi)初始CD8+T細(xì)胞提供了直接證據(jù),。
無論哪種類型的APC提呈VV抗原給T細(xì)胞,，這些細(xì)胞提呈抗原的能力可以受到病毒蛋白或病毒誘導(dǎo)分子與特異表面或細(xì)胞間受體之間結(jié)合的影響，這一點是很清楚的,。對于VV結(jié)合到APC表面而言,，我們應(yīng)該記住：兩種形態(tài)不同地感染性病毒IMV和EEV可能通過不同地機制進入到細(xì)胞內(nèi),，對于這些機制盡管有一些研究,，但仍了解甚少。把抗原提呈看作是VV結(jié)合到APC表面有可能導(dǎo)致基因表達和表型的變化,，這是一個重要的問題,。
2.5 VV對APC功能的干擾
盡管VV可能通過結(jié)合于APC表面而影響抗原提呈,但是,間接的證據(jù)表明這種病毒能作用于已知的幾種調(diào)節(jié)APC功能的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑.事實上,VV表達IL-1β、TNF-α,、IFN-α/β和IFN-γ的分泌型引誘受體.另外,VV表達來源于細(xì)胞因子受體和(或)Toll樣受體(TLR)的胞內(nèi)蛋白,該蛋白可干擾信號轉(zhuǎn)導(dǎo).舉例來說,兩種VV蛋白-A46R和A52R-同Toll/IL-1受體(TIR)結(jié)構(gòu)域有著相似的氨基酸序列,從而特異地干擾IL-1信號轉(zhuǎn)導(dǎo). A46R部分地抑制IL-1介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活化, A52R則可以使一種TIR結(jié)構(gòu)域封閉接頭分子-MyD88決定性的負(fù)轉(zhuǎn)動,從而有力地阻止IL-1和TLR4介導(dǎo)的NF-κB的活化,。 A52R也可以通過多種TLR分子(包括TLR3,它是一種病毒RNA受體)阻止NF-kB的活化. A52R與IL-1R相關(guān)激酶2(IRAK-2)和TNFR相關(guān)因子6(TRAF-6)都有聯(lián)系,后兩者是TLR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中重要的兩種關(guān)鍵蛋白.雖然這些研究表明VV發(fā)展了幾種策略以逃避免疫系統(tǒng),但是它們也說明了哺乳類宿主的細(xì)胞通過分泌炎性細(xì)胞因子對VV應(yīng)答,同時也表明該現(xiàn)象至少部分地由TLR介導(dǎo).
關(guān)于VV抗原的加工可以得出什么結(jié)論?雖然DC在激活VV特異性CD8+T細(xì)胞中起著重要作用,這一點是清楚的,但是,實驗數(shù)據(jù)表明:病毒抗原通過依賴于幾種參數(shù)的不同機制而得以加工,這些參數(shù)包括:感染的路徑和病毒決定基的性質(zhì).調(diào)查為什么是這種情況和什么規(guī)則控制這種現(xiàn)象將可能是進一步研究的主題.

3.DC在單核細(xì)胞增多性李斯特菌感染中的作用
3.1 單核細(xì)胞增多性李斯特菌的特點
單核細(xì)胞增多性李斯特菌是一種G+胞內(nèi)菌,可侵入到吞噬細(xì)胞和非吞噬細(xì)胞內(nèi),從而引起人類和小鼠的急性感染.它的基因組包含270個菌株特異性基因,后者不存在于非致病性菌株李斯特菌.它的主要毒力因子是孔形成蛋白-李斯特菌溶素LLO,它可允許細(xì)菌從初級空泡逃到感染細(xì)胞的胞質(zhì)溶膠內(nèi).另一毒力因子ActA對肌動蛋白尾的聚合作用，胞內(nèi)溶質(zhì)的能動性以及細(xì)胞與細(xì)胞間的擴散起重要作用,。其他毒力因子包括磷脂酶和p60水解酶,，前者能促進細(xì)胞間的擴散，后者能控制細(xì)菌分裂,。
3.2 感染途徑和感染劑量的重要性
人類常常由口服途徑感染單核細(xì)胞增多性李斯特菌.細(xì)菌蛋白internalin結(jié)合上皮細(xì)胞表面表達的E-鈣黏附蛋白,，從而介導(dǎo)細(xì)菌進入非吞噬細(xì)胞內(nèi)。有趣的是,，單核細(xì)胞增多性李斯特菌的internalin不能結(jié)合小鼠的E-鈣黏附蛋白,，這一結(jié)果可以解釋為什么口服感染的小鼠僅僅只對單核細(xì)胞增多性李斯特菌感染易感?；谶@一假設(shè),，腸上皮細(xì)胞選擇性表達人類E-鈣黏附蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠，與野生型小鼠相比,，能表現(xiàn)出對全身細(xì)菌感染的易感性增加,，并且，其感染細(xì)胞的類型也不同,。由于人類和小鼠之間這種種屬特異的不同,，許多研究者在研究小鼠對單核細(xì)胞增多性李斯特菌的免疫應(yīng)答時，采用了靜脈感染途徑,。
有趣的是,，同靜脈感染相比，口服感染誘導(dǎo)保護性免疫需要大約超過105-106-fold細(xì)菌,。同樣的,，腹膜感染小鼠同靜脈感染小鼠相比，它們的脾臟中細(xì)菌要少10-100- fold,。對靜脈或口服接種后感染的進一步分析,，揭示了在脾臟、肝臟和腸系膜淋巴結(jié)中細(xì)菌生長和擴散相似的動力學(xué),。然而,，口服感染小鼠的腸系膜淋巴結(jié)中，細(xì)菌的負(fù)荷量比靜脈感染小鼠中的要高10-1000 fold,。應(yīng)記住只有口服感染才允許細(xì)菌在腸管腔和固有層中復(fù)制,。最新有報道應(yīng)用體內(nèi)生物發(fā)光成像技術(shù)對表達luxkan轉(zhuǎn)座子盒的單核細(xì)胞增多性李斯特菌有作用,。這一研究精確地證明小鼠在口服和靜脈感染幾天后，膽囊中有活性胞外細(xì)菌的生長和復(fù)制,。這一令人吃驚的結(jié)果表明無論哪種感染途徑,，膽囊都能促進細(xì)菌生長和全身的移生。
3.3 針對單核細(xì)胞增多性李斯特菌的固有免疫
給小鼠注射單核細(xì)胞增多性李斯特菌后能迅速被清除,。早期的研究表明：清除細(xì)菌需要固有免疫和適應(yīng)性免疫,。事實上，固有免疫系統(tǒng)的細(xì)胞如巨噬細(xì)胞,、中性粒細(xì)胞和NK細(xì)胞,，都有助于在感染后的最初幾個小時內(nèi)殺滅細(xì)菌。而在后一階段活化的T淋巴細(xì)胞則為無菌免疫所依賴,。并且,，抑制3型補體受體能阻止骨髓單核細(xì)胞募集到肝臟和脾臟，同時可以顯著增強體內(nèi)單核細(xì)胞增多性李斯特菌的增殖,。同樣地,，感染前清除中性粒細(xì)胞能導(dǎo)致細(xì)菌生長的無控制性。
雖然固有細(xì)胞早期清除單核細(xì)胞增多性李斯特菌需要IFN-γ和TNF-α,，但是殺滅細(xì)菌也依賴由誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（iNOS）生成反應(yīng)性氮中間物,。最近，Serbina 等人將這些 iNOS 產(chǎn)生細(xì)胞同Tip-DC進行區(qū)別,，后者是CD11c+細(xì)胞中的一種亞型,，能分泌TNF-α，而且可以通過CCR2依賴機制募集到感染小鼠的脾臟,。有趣的是,，雖然CCR2缺陷小鼠不能控制細(xì)菌的生長，但是,，這些小鼠中李斯特菌特異性CD8+T細(xì)胞的激活不受損害,。因此，盡管Tip-DC 對于最初清除單核細(xì)胞增多性李斯特菌很重要,，但是發(fā)生長久持續(xù)保護性免疫不需要它們,。雖然大量的Tip-DC 和 iNOS 產(chǎn)生細(xì)胞不被感染，但是這些細(xì)胞的活化并不可能來自同一機制,。
同一作者也證實：Tip-DC募集到脾臟分為兩步,。第一步是MyD88非依賴性，但是依賴于單核細(xì)胞趨化蛋白（MCP-1）,，該蛋白是CCR2的主要配體,。相對的，第二步是MyD88依賴性,，它可導(dǎo)致單核細(xì)胞分化為Tip-DC,。應(yīng)用兩種逃避初級空泡能力不同的李斯特菌突變體可進一步證明：感染細(xì)胞產(chǎn)生MCP-1需要細(xì)菌胞內(nèi)溶膠質(zhì)的局部化,。
3.4 單核細(xì)胞增多性李斯特菌特異性CD8+T細(xì)胞
無論固有細(xì)胞對于清除單核細(xì)胞增多性李斯特菌有何作用，非致死量的細(xì)菌感染可誘導(dǎo)強的持久的CD8+T細(xì)胞應(yīng)答,，這一應(yīng)答能為另一致死量的再次感染提供保護,。CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)這一保護性的T細(xì)胞應(yīng)答，這可由應(yīng)用排除抗體清除了這些細(xì)胞的實驗證明.在BALB/c小鼠,，至少有3個H2-Kd限制性CD8+T細(xì)胞表位才能成為特征，而且可以在體內(nèi)感染中獲得提呈,。這些表位中的其中一個來自LLO,，另兩個來自p60。并且也證明了單核細(xì)胞增多性李斯特菌能分泌甲?；碾亩?，該肽段在感染后可由非經(jīng)典MHC 1類分子H2-M3提呈。單核細(xì)胞增多性李斯特菌感染可誘導(dǎo)T細(xì)胞對這些表位反應(yīng)頻率的短暫增加,。
雖然H2-M3特異性T細(xì)胞在初次感染后迅速擴增,，但是李斯特菌特異性H2-Kd限制性T細(xì)胞的頻率在初次感染后8天、再次感染后5天達到峰值,。雖然T細(xì)胞在對不同表位反應(yīng)方面其擴增和活化的動力學(xué)是相似的,，但是表位和表位之間這些細(xì)胞的最大頻率是不同的，而且與細(xì)胞表面肽-MHC復(fù)合體的數(shù)量無關(guān),。這些結(jié)果表明T細(xì)胞對特異表位應(yīng)答的廣度不是僅僅由如何加工細(xì)菌蛋白所決定,，而是可能由其他因素決定，這些因素包括固有免疫組成成分中表位特異性CD8+T細(xì)胞的頻率,。
3.5 哪種APC提呈單核細(xì)胞增多性李斯特菌,？
盡管我們對小鼠李斯特菌特異性CD8+T細(xì)胞應(yīng)答的動力學(xué)了解很多，但是,，與體內(nèi)李斯特菌抗原加工有關(guān)的APC和分子機制仍知之甚少,。Lenz等人應(yīng)用BM嵌合體，證明BM衍生的APC為激活李斯特菌特異性CTL所必需,。最近,，Jung等人直接追尋DC在激活李斯特菌特異性CD8+T細(xì)胞中的作用。為了這個目的,，他們應(yīng)用轉(zhuǎn)基因小鼠,，這些小鼠的DC選擇性表達白喉毒素受體（DTR），因此允許體內(nèi)這些細(xì)胞的誘導(dǎo)性的短期的ablation,。資料表明DC減少鼠不能激起針對單核細(xì)胞增多性李斯特菌感染的CTL應(yīng)答,，進一步證明體內(nèi)激活李斯特菌特異性CD8+T細(xì)胞需要這些細(xì)胞。
雖然BM誘導(dǎo)的DC在激活李斯特菌特異性CD8+T細(xì)胞中起著重要作用,，這一點是毫無疑問的,，但是相對于交叉激活而言,，直接激活的有關(guān)作用仍然是個有爭議的問題。Shen等人構(gòu)建了一種重組單核細(xì)胞增多性李斯特菌,，作為研究該問題的間接方法,。這種細(xì)菌能表達LCMV核蛋白抗原，作為一種分泌型或非分泌型的熔解蛋白,。這兩種形式的抗原,，要么分泌到宿主細(xì)胞的胞質(zhì)中，要么保留在細(xì)菌內(nèi),，從而有效地激活CD8+T細(xì)胞應(yīng)答,。然而，那些已經(jīng)被LCMV預(yù)先激活的小鼠可以保護性地抵抗那些表達分泌型熔解蛋白的李斯特菌,，而不能抵制那些表達非分泌型的,。因此，這些結(jié)果不僅表明：分泌型的和非分泌型的Ag都能被加工,、提呈給初始T細(xì)胞,，還可表明：不同的細(xì)菌Ag能夠通過多種I類提呈途徑而獲得提呈。然而,，盡管這些研究的作者認(rèn)為這些胞漿內(nèi)分泌的蛋白質(zhì)通過內(nèi)源性MHC-I類提呈途徑獲得提呈,，但是，對這一假說還缺乏規(guī)范的證明,。
另一方面,，實驗數(shù)據(jù)表明：對于單核細(xì)胞增多性李斯特菌有效激活CD8+T細(xì)胞這一過程來說，進入APC的胞質(zhì)溶膠并不是必須的,。實際上,，表位特異的CD8+T細(xì)胞能夠被活的野生型細(xì)菌和來源于野生型或LLO-缺陷細(xì)菌的熱死亡單核細(xì)胞增多性李斯特菌（HKML）有效激活。因此,，盡管這么多的研究,，我們?nèi)匀徊恢溃褐苯蛹せ罨蚪徊婕せ睢⒁只騼烧叩慕M合,，對于天然小鼠CD8+T細(xì)胞的激活是否起作用,。探究這一問題可能需要使李斯特-感染細(xì)胞和原位李斯特-特異CD8+T細(xì)胞形象化，這樣一種方法已經(jīng)成功的用于研究在VV-感染小鼠中VV-特異性T細(xì)胞的激活（見上文）,，但是,，對單核細(xì)胞增多性李斯特菌來說，這種方法有待實施,。
3.6 單核細(xì)胞增多性李斯特菌抗原如何加工,？
體外數(shù)據(jù)表明：從細(xì)菌分泌蛋白而來的抗原肽，其加工和提呈的有效性受到表位-側(cè)翼序列的調(diào)節(jié)，并且依賴于N-末端規(guī)則,。在另一研究中,，Vihj等人用能分泌不等量p60水解蛋白的單核細(xì)胞增多性李斯特菌突變體感染小鼠。在由不同單核細(xì)胞增多性李斯特菌突變體感染的細(xì)胞中,，抗原加工的有效性達到20-fold范圍,。而用低效地分泌加工過的p60（1表位為350個降解的p60分子）的突變體感染小鼠，則不能激起p60特異性T細(xì)胞應(yīng)答,，由因子5增加抗原加工的有效性可修復(fù)T細(xì)胞應(yīng)答尺度致正常,，但是進一步增加p60產(chǎn)生的有效性則無效。這一研究證實了體內(nèi)T細(xì)胞活化存在抗原加工閾值,。令人奇怪的是,，一旦達到這一閾值，抗原加工有效性的進一步增強作用并不能增強T細(xì)胞應(yīng)答的程度,。同樣，蛋白酶體抑制劑能夠消除體外感染細(xì)胞中細(xì)菌分泌蛋白的降解,。
雖然控制感染需要IFN-γ,，但是IFN-γ的產(chǎn)生并不能影響非分泌型抗原的交叉激活?？乖置诘礁腥炯?xì)胞的胞質(zhì)溶膠中也為激活體內(nèi)保護性CD8+T細(xì)胞所需要,。這是通過實驗證明的，在該實驗中給小鼠注射針對分泌型或非分泌型細(xì)菌抗原的特異性CD8+T細(xì)胞系,，并且鑒定針對細(xì)菌的抵抗力,。有研究表明：將H2-M3限制性CD8+T細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)至TAP-1缺陷鼠，可提供抵抗單核細(xì)胞增多性李斯特菌的部分性保護,。
3.7 T細(xì)胞的激活
無論哪種分子機制有助于激活李斯特菌特異性CD8+T細(xì)胞,，在感染小鼠中李斯特抗原的加工發(fā)生非常迅速。因此,，在那些適量地轉(zhuǎn)移了李斯特菌特異性CD8+T細(xì)胞的小鼠中,，可以發(fā)現(xiàn)感染后12小時就有早期活化標(biāo)志CD69的上調(diào)。成功激活CD8+T細(xì)胞并不需要持續(xù)的抗原提呈,。通過應(yīng)用氨芐西林以消除在感染后不同時段復(fù)制的細(xì)菌便可證明這一點,。所以，盡管在最初24小時內(nèi)給予小鼠抗生素可顯著減少李斯特菌特異性CD8+T細(xì)胞的激活,，但是,，在后一時期甚至在記憶性T細(xì)胞應(yīng)答發(fā)生階段給予抗生素時，這一措施無效,。
另一方面,，當(dāng)李斯特菌特異性、TCR-轉(zhuǎn)基因T細(xì)胞轉(zhuǎn)移到72h前注射過單核細(xì)胞增多性李斯特菌的受體鼠，則發(fā)現(xiàn)不能激活T細(xì)胞,。這是由于單核細(xì)胞增多性李斯特菌特異性CD8+T細(xì)胞能夠殺死APC,，而在RAG-2缺陷鼠中不能取消T細(xì)胞的激活則可證明這一點。Wong等人把資料合起來闡明,，李斯特菌抗原在感染后能迅速得到加工,，24小時就足以誘導(dǎo)保護性的長久持續(xù)的CD8+T細(xì)胞應(yīng)答的發(fā)生。但是,，在這最初24小時中究竟發(fā)生了什么,？
雖然李斯特菌特異性T細(xì)胞的激活依賴于APC對細(xì)菌抗原的加工，但是,，這一T細(xì)胞應(yīng)答的本性也提出是由一些附加因素決定的,，這些因素包括：細(xì)胞因子和（或）其他細(xì)胞的補充。令人奇怪的是,，保護性CD8+T細(xì)胞應(yīng)答的發(fā)生既不需要IFN-γ,，TNF-α，也不需要IL-12,。然而,，一些給小鼠注射活的細(xì)菌或是HKLM的研究則明顯支持這一觀點：即固有機制對T細(xì)胞應(yīng)答的質(zhì)量有強大的影響。事實上,，雖然活的細(xì)菌和熱殺死的細(xì)菌都能誘導(dǎo)T細(xì)胞應(yīng)答,，但是只有活的細(xì)菌能夠誘導(dǎo)保護性的長久持續(xù)的T細(xì)胞應(yīng)答。因此,，HKLM注射鼠中,，保護性免疫的缺乏不是由于細(xì)菌抗原的MHC-Ⅰ類加工途徑的減弱，而是由于HKLM觸發(fā)公認(rèn)的細(xì)胞溶質(zhì)內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的失效,。
盡管已有上述研究,，但是，對于單核細(xì)胞增多性李斯特菌感染小鼠中最初感染細(xì)胞的本性我們?nèi)运跎?。同樣地,，證實單核細(xì)胞增多性李斯特菌在細(xì)胞內(nèi)時哪種監(jiān)視途徑能夠發(fā)現(xiàn)它們，仍需要做更多的工作,。在這一方面,，新近表明：屬于Nod 蛋白家族的蛋白能夠監(jiān)測到G-菌肽聚糖衍生來的胞壁酰二肽。證實這一家族的蛋白是否也可以作為胞內(nèi)模型識別受體以監(jiān)測G+單核細(xì)胞增多性李斯特菌,，這將是有趣的,。

4 .實際得到的信息
我們已經(jīng)廣泛應(yīng)用病原體作為工具去研究免疫系統(tǒng)如何工作。然而,，應(yīng)記住用病原體注射的小鼠同那些用重組蛋白如OVA或雞卵溶菌酶免疫的動物相比,，是非常不同的。因此，發(fā)現(xiàn)來自VV或單核細(xì)胞增多性李斯特菌的抗原能夠被多種加工途徑加工,，而這些途徑依賴包括感染的路徑和病原體因子性能在內(nèi)的幾種參數(shù),，我們不應(yīng)驚奇。調(diào)查事實為什么是這樣以及操縱這一現(xiàn)象的規(guī)則是什么,，這將是進一步研究的主題,。
雖然DC在病原體衍生抗原的加工中起著重要作用，但是,，它們也可以分泌細(xì)胞因子反作用于激活的T細(xì)胞的分化和（或）存活,。并且，由于淋巴器官含有許多不同的DC亞型,，所以,確定這些亞型中的任一種是否進行特異的工作以及它們?nèi)绾螀f(xié)同允許一次成功的T細(xì)胞應(yīng)答,，這將是重要的。另一關(guān)鍵問題是破譯DC發(fā)現(xiàn)病原體存在的監(jiān)測途徑,。就胞內(nèi)病原體來說,，這些途徑很可能是多樣的、病原體特異的以及包含了通過不同機制識別胞外和胞內(nèi)病原體,。