前,,第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部免疫學(xué)教研室趙玉紅實驗師等,采用經(jīng)原核表達(dá)的乙肝病毒末端蛋白(HBV-TP)免疫BALB/c小鼠,,通過取其脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SPS2/0融合克隆,,從而成功地獲得被命名為E3mAb、F5mAb和F7mAb并具有穩(wěn)定分泌抗體的抗HBV末端蛋白雜交瘤細(xì)胞系,。該雜交瘤細(xì)胞系的成功建立,,為研究HBV感染的早期診斷及乙肝患者的生物治療有著重要意義。
據(jù)介紹,,乙肝是由HBV感染所引起的全球性傳染疾病,。該病易于慢性化,并與肝癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),。近年來國際興起的PCR檢測新技術(shù),,因有某些局限性而不能作為病毒感染的早期指標(biāo)。因此,,研究HBV多聚酶mAb在HBV相關(guān)肝臟疾病診斷中的應(yīng)用,,建立抗HBV末端蛋白雜交瘤細(xì)胞系,以尋找HBV感染的最佳臨床治療方法,,是目前國內(nèi)外關(guān)注的熱點和最活躍的新思路,。
研究人員采用經(jīng)原核表達(dá)的HBV-TP免疫BALB/c小鼠,并通過取其脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0融合,接種培養(yǎng),。在進(jìn)行篩選和克隆化的基礎(chǔ)上,,應(yīng)用ELISA法檢測出8個陽性克隆,經(jīng)進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)和反復(fù)克隆后,,終于從這8個陽性克隆中精確地篩選出了陽性率達(dá)100%的3個克隆細(xì)胞(即雜交瘤細(xì)胞系),。這3株雜交瘤細(xì)胞系在100天的連續(xù)培養(yǎng)中,其mAb的分泌持續(xù)穩(wěn)定,,凍存細(xì)胞復(fù)蘇后仍保持抗體分泌能力,,其染色體數(shù)為99~116條,均有端著絲粒及標(biāo)志染色體(中著絲粒染色體),,DNA含量均高于SP2/0細(xì)胞,,其分泌的mAb被分別命名為E3mAb、F5mAb和F7mAb,。此外,,此3株雜交瘤細(xì)胞系經(jīng)免疫組化染色培養(yǎng)上清抗體效價為1誜100,腹水為1誜1000,,其相應(yīng)抗原在乙肝病毒及肝硬變組織中呈高表達(dá)(80%),,而在正常肝組織中未見陽性反應(yīng),其抗原主要分布于細(xì)胞質(zhì)內(nèi),。提示該3株抗乙型肝炎病毒末端蛋白雜交瘤細(xì)胞分泌的mAb具有特異親合性,,其mAb分泌穩(wěn)定,特異性強(qiáng),。
據(jù)趙玉紅介紹,,HBV-P0L抗原及抗體可在多數(shù)HBV感染患者血清中出現(xiàn),尤其是它們可出現(xiàn)于其他HBV血清學(xué)指標(biāo)陰性的HBV感染的個體血清中,,提示這一指標(biāo)在某些病例中可能是惟一反映HBV感染或體內(nèi)HBV低水平復(fù)制的重要標(biāo)記物,。該研究所獲得的3株雜交瘤細(xì)胞系表明,阻斷HBV-P0L基因編碼的末端蛋白TP,,對乙肝的防治具有重要的應(yīng)用意義,,為臨床對HBV-TP為靶蛋白的主動性免疫治療及基因治療奠定了基礎(chǔ)。