微生物學(xué)報 Acta Microbiologica Sinica
48(8)：1019~1024; 4 August 2008
基金項目: 國家自然科學(xué)基金(30470098); 重大基礎(chǔ)研究前期研究專項(2004CCA01700)
*通訊作者。Tel: +86-29-88302132; E-mail: [email protected]
作者簡介: 趙興艷(1982. ), 女, 山東煙臺人, 碩士研究生, 研究方向為分子微生物學(xué)。E-mail: [email protected]
趙興艷,，梁海華，沈立新,，董兆麟，段康民*
(西北大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院西部資源及現(xiàn)代生物技術(shù)教育部重點實驗室,，西安 710069)
摘要：【目的】研究銅綠假單胞菌中與耐藥性相關(guān)的基因,。【方法】篩選轉(zhuǎn)座突變體文庫中對多種抗菌藥物敏感的突變體,，通過隨機(jī)PCR,、核苷酸測序及序列比對確定突變體中轉(zhuǎn)座子的插入位點及其破壞的基因,?！窘Y(jié)果】篩選得到2 株對多種抗菌藥物敏感的突變體，其中被破壞的基因分別為功能未知的新基因PA2580 和PA2800,?！窘Y(jié)論】PA2580 和PA2800 可能分別通過參與細(xì)胞氧化還原作用和細(xì)胞壁合成進(jìn)而與銅綠假單胞菌耐藥性相關(guān)。
關(guān)鍵詞：銅綠假單胞菌；轉(zhuǎn)座突變,；多重耐藥性
中圖分類號：Q933 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0001-6209 (2008) 08-1019-06
銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一種條件致病菌,，在機(jī)體免疫力低下的情況下易發(fā)生感染，已成為醫(yī)院內(nèi)感染最常見的病原菌之一,，臨床治療困難很大[1,2],。
隨著抗菌藥物的廣泛使用，病原菌的耐藥性日趨嚴(yán)重,。目前認(rèn)為病原菌主要存在以下5 種耐藥機(jī)制：①細(xì)菌可以產(chǎn)生抗生素水解酶或鈍化酶使之失活,；②改變抗生素作用的靶位使其失去作用位點；③降低細(xì)胞膜的通透性使抗生素?zé)o法進(jìn)入細(xì)胞不能到達(dá)作用靶位,；④通過主動外排機(jī)制將進(jìn)入胞內(nèi)的藥物泵至胞外,；⑤生物被膜的形成[3,4]。銅綠假單胞菌感染難以根除的主要原因是其具有內(nèi)在的多重耐藥性[4~5],，機(jī)制較為復(fù)雜,。尋找耐藥基因、研究和揭示可能存在的耐藥機(jī)制及分子機(jī)理是應(yīng)對耐藥性病原菌威脅的重
要課題,。本試驗利用轉(zhuǎn)座子隨機(jī)突變,，造成插入基因的失活，通過高通量篩選獲得對多種抗菌藥物敏感的突變體,；經(jīng)隨機(jī)PCR,、核苷酸測序、序列比對后確定轉(zhuǎn)座子插入位點,，發(fā)現(xiàn)了與多重耐藥性相關(guān)的新基因,，對于深入了解細(xì)菌多重耐藥性的分子機(jī)制、尋找藥物作用的新靶點具有重要意義,。
Screen and identification of genes involved in multidrug resistance in Pseudomonas aeruginosa
Xingyan Zhao, Haihua Liang, Lixin Shen, Zhaolin Dong, Kangmin Duan*
(Molecular Microbiology Laboratory, Northwest University, Xi,an 710069, China)
Abstract: [Objective] To identify genes involved in multidrug resistance in Pseudomonas aeruginosa. [Methods] We constructed and screened a transposon mutation library and obtained mutants that exhibited decreased drug resistance. The insertion sites of the transposon were identified by arbitrary PCR and subsequent DNA sequencing. [Results] Two mutants which became more susceptible to several antibacterial agents than the wild type were identified as mutants with transposon insertion in gene PA2580 and PA2800 respectively. The functions of these two genes are described as unknown in P. aeruginosa database. [Conclusion] PA2580 and PA2800 are involved in drug resistance, possibly through their roles in redox reactions and cell envelope biogenesis.
Keywords: Pseudomonas aeruginosa; transposon mutation; multidrug resistance
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