陳光宇（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所,北京,100850）
鄒民吉（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所,北京,100850）
彭善云（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所,北京,100850）
王嘉璽（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所,北京,100850）
摘 要：采用RT-PCR方法從人外周血白細(xì)胞總RNA中釣取人可溶性B淋巴細(xì)胞刺激因子(human soluble B lymphocyte stimulator, hsBLyS)的cDNA片段, 再運用基因重組手段, 利用通用型質(zhì)粒pBV220構(gòu)建表達載體pBV220/hsBLyS. 經(jīng)測序鑒定后, 以之為模板使用重疊PCR法擴增得到hsBLyS的兩個點突變體hsBY-A(Cys146→Ala146) 和hsBY-V (Cys146→Val146)的基因片段, 構(gòu)建表達載體pBV220/hsBY-A及pBV220/hsBY-V. 經(jīng)測序無誤后, 將上述3種載體分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α并誘導(dǎo)重組蛋白質(zhì)表達, 薄層掃描結(jié)果顯示3種蛋白質(zhì)在DH5α中表達量都在20%～30%之間. 再分別運用變性,、 凝膠過濾層析及復(fù)性等手段純化目的蛋白質(zhì), 最后通過B淋巴細(xì)胞增殖實驗檢測純化產(chǎn)物促人B細(xì)胞增殖的活性. 實驗結(jié)果表明, 3種重組蛋白質(zhì)都能明顯刺激人B細(xì)胞增殖; 統(tǒng)計學(xué)檢驗顯示, 突變體rhsBY-V較野生型rhsBLyS的促人B淋巴細(xì)胞增殖活性顯著增強.
關(guān)鍵詞：hsBLyS; 突變體; 原核表達; 包涵體; 細(xì)胞增殖
分類號：Q78 文獻標(biāo)識碼：A
