各位都知道，提取到質(zhì)量良好的RNA（包括總RNA和mRNA,，以下同）是非常困難，關于RNA的提取技術,，我就不說了,，為什么呢？或許各位非常關心呢,，我是這樣想的,，我可以看到的資料或者是廠家的說明書，各位也同樣可以看到的,，內(nèi)容當然都是一樣的了,，所以實驗做的好不好，主要是心的投入多少的問題,，所以希望大家自己多多思考?。?/p>

提取技術雖然不說了,，但是我可以告訴各位如何準確確認RNA質(zhì)量的有效方法（可能是最簡單而有效的,，如果你已經(jīng)知道了，也請你不要笑話我孤陋寡聞了?。?/p>

以下兩種方法,，相信大家都知道的：

1）檢測RNA溶液的吸光度
280、320,、230,、260nm下的吸光度分別代表了核酸、背景（溶液渾濁度）,、鹽濃度和蛋白等有機物的值,。一般的，我們只看OD260/OD280（Ratio,，R）,。

1.82.0時，我們認為RNA中蛋白或者時其他有機物的污染是可以容忍的,，不過要注意,，當你用Tris作為緩沖液檢測吸光度時，R值可能會大于2（一般應該是<2.2的）,。當R<1.8時,，溶液中蛋白或者時其他有機物的污染比較明顯,，你可以根據(jù)自己的需要決定這份RNA的命運。當R>2.2時,，說明RNA已經(jīng)水解成單核酸了,。

2）RNA的電泳圖譜

一般的，RNA的電泳都是用變性膠進行的,，但是根據(jù)我的經(jīng)驗,，如果你僅僅是為了檢測RNA的質(zhì)量是沒有必要進行如此麻煩的實驗的，用普通的瓊脂糖膠就可以了,。

電泳的目的是在于檢測28S和18S條帶的完整性和他們的比值,，或者是mRNA smear的完整性。一般的,，如果28S和18S條帶明亮,、清晰、條帶銳利（指條帶的邊緣清晰）,，并且28S的亮度在18S條帶的兩倍以上,，我們認為RNA的質(zhì)量是好。

以上是我們常用的兩種方法,，但是這兩種方法都無法明確的告訴我們RNA溶液中有沒有殘留的RNA酶,。如果溶液中有非常微量的RNA酶，用以上方法我們很難察覺,，但是大部分后續(xù)的酶學反應都是在37度以上并且是長時間進行的,。這樣，如果RNA溶液中有非常微量的RNA酶,，那么在后續(xù)的實驗中就會有非常適合的環(huán)境和時間發(fā)揮它們的作用了,，當然這時你的實驗也就完了。

下面,，我們介紹一個可以確認RNA溶液中有沒有殘留的RNA酶的方法,。

3）保溫試驗

方法很簡單的，按照樣品濃度,，從RNA溶液中吸取兩份1000 ng的RNA加入至0.5 ml的離心管中,并且用pH7.0的Tris緩沖液補充到10 ul的總體積,，然后密閉管蓋。把其中一份放入70℃的恒溫水浴中,保溫1 h,。另一份放置在-20℃冰箱中保存1 h,。

時間到了之后，取出兩份樣本進行電泳,。電泳完成后,，比較兩者的電泳條帶。如果兩者的條帶一致或者無明顯差別（當然，它們的條帶也要符合方法2中的條件）,，則說明RNA溶液中沒有殘留的RNA酶污染,，RNA的質(zhì)量很好。相反的,，如果70℃保溫的樣本有明顯的降解,，則說明RNA溶液中有RNA酶污染。

如果你的RNA樣本通過了保溫實驗的檢測并且你在后續(xù)的實驗中還是非常小心的防范RNA酶的騷擾,，那么你的實驗應該是很難失敗了,！

以上內(nèi)容有任何錯誤之處,，請指正,！感謝！

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