各位都知道，提取到質(zhì)量良好的RNA（包括總RNA和mRNA,，以下同）是非常困難,，關(guān)于RNA的提取技術(shù)，我就不說了,，為什么呢,？或許各位非常關(guān)心呢，我是這樣想的,，我可以看到的資料或者是廠家的說明書,，各位也同樣可以看到的，內(nèi)容當(dāng)然都是一樣的了,，所以實(shí)驗(yàn)做的好不好,，主要是心的投入多少的問題，所以希望大家自己多多思考??！

提取技術(shù)雖然不說了，但是我可以告訴各位如何準(zhǔn)確確認(rèn)RNA質(zhì)量的有效方法（可能是最簡單而有效的,，如果你已經(jīng)知道了,，也請你不要笑話我孤陋寡聞了?。?/p>

以下兩種方法，相信大家都知道的：

1）檢測RNA溶液的吸光度
280,、320,、230、260nm下的吸光度分別代表了核酸,、背景（溶液渾濁度）,、鹽濃度和蛋白等有機(jī)物的值。一般的,，我們只看OD260/OD280（Ratio,，R）。

1.82.0時(shí),，我們認(rèn)為RNA中蛋白或者時(shí)其他有機(jī)物的污染是可以容忍的,，不過要注意，當(dāng)你用Tris作為緩沖液檢測吸光度時(shí),，R值可能會大于2（一般應(yīng)該是<2.2的）,。當(dāng)R<1.8時(shí)，溶液中蛋白或者時(shí)其他有機(jī)物的污染比較明顯,，你可以根據(jù)自己的需要決定這份RNA的命運(yùn),。當(dāng)R>2.2時(shí)，說明RNA已經(jīng)水解成單核酸了,。

2）RNA的電泳圖譜

一般的,，RNA的電泳都是用變性膠進(jìn)行的，但是根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn),，如果你僅僅是為了檢測RNA的質(zhì)量是沒有必要進(jìn)行如此麻煩的實(shí)驗(yàn)的,，用普通的瓊脂糖膠就可以了。

電泳的目的是在于檢測28S和18S條帶的完整性和他們的比值,，或者是mRNA smear的完整性,。一般的，如果28S和18S條帶明亮,、清晰,、條帶銳利（指條帶的邊緣清晰），并且28S的亮度在18S條帶的兩倍以上,，我們認(rèn)為RNA的質(zhì)量是好,。

以上是我們常用的兩種方法，但是這兩種方法都無法明確的告訴我們RNA溶液中有沒有殘留的RNA酶,。如果溶液中有非常微量的RNA酶,，用以上方法我們很難察覺，但是大部分后續(xù)的酶學(xué)反應(yīng)都是在37度以上并且是長時(shí)間進(jìn)行的,。這樣,，如果RNA溶液中有非常微量的RNA酶,，那么在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中就會有非常適合的環(huán)境和時(shí)間發(fā)揮它們的作用了，當(dāng)然這時(shí)你的實(shí)驗(yàn)也就完了,。

下面,，我們介紹一個(gè)可以確認(rèn)RNA溶液中有沒有殘留的RNA酶的方法。

3）保溫試驗(yàn)

方法很簡單的,，按照樣品濃度,，從RNA溶液中吸取兩份1000 ng的RNA加入至0.5 ml的離心管中,并且用pH7.0的Tris緩沖液補(bǔ)充到10 ul的總體積，然后密閉管蓋,。把其中一份放入70℃的恒溫水浴中,保溫1 h,。另一份放置在-20℃冰箱中保存1 h。

時(shí)間到了之后,，取出兩份樣本進(jìn)行電泳,。電泳完成后，比較兩者的電泳條帶,。如果兩者的條帶一致或者無明顯差別（當(dāng)然,，它們的條帶也要符合方法2中的條件），則說明RNA溶液中沒有殘留的RNA酶污染,，RNA的質(zhì)量很好。相反的,，如果70℃保溫的樣本有明顯的降解,，則說明RNA溶液中有RNA酶污染。

如果你的RNA樣本通過了保溫實(shí)驗(yàn)的檢測并且你在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中還是非常小心的防范RNA酶的騷擾,，那么你的實(shí)驗(yàn)應(yīng)該是很難失敗了,！

以上內(nèi)容有任何錯(cuò)誤之處，請指正,！感謝,！

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