摘要：本文綜述了近年來哺乳動物細(xì)胞核移植的相關(guān)進(jìn)展。

關(guān)鍵詞：哺乳動物 細(xì)胞 核移植 進(jìn)展

Introduction

The merge of a sperm and an ovum (fertilization) recovers the diploid cell marking the beginning of the individual development. In the embryonic development, various types of cells are originated from the zygot such as muscle fibers, neurons and hemocytes etc. A question has been asked if the differentiated cells in the development could resume the initiation status or pluripotent stage under proper circumstances which could give rise to other tissues and even the body as a whole. Is the process irreversible? To answer the question, the famous German embryologist Spemman brought out the idea to transplant the nuclei of cells in the anaphase of development to denucleated ova restarting the process in 1938. The aim of the experiment is to testify the totipotency of partially or completely differentiated cells. In 1952, Briggs and King conducted the first nuclear transplantation in tadpoles. 1n 1962, the nuclei transplant of gastrula endoblast bred fertile xenopus, which demonstrated the cells post gastrula stage do not undergo irreversible change. All these experiments show the inferior creatures like amphibian possess at least part of differentiated somatic cells could recover their totipotency to develop to adult stage with the effect of oocyte cytoplasma and this has laid the foundation for mammalian nuclear transplantation.

引言

一個精子和一個卵子的結(jié)合（即受精）,，恢復(fù)二倍體,，從而開始了一個個體的發(fā)育。在胚胎發(fā)育過程中,，很多不同類型的細(xì)胞都是由受精卵發(fā)育開始的,。它們有一些專門發(fā)育為肌肉細(xì)胞，有一些發(fā)育為神經(jīng)細(xì)胞,，還有發(fā)育為血細(xì)胞等,。從這里就引出了一個問題：在哺乳動物胚胎發(fā)育過程中，細(xì)胞發(fā)生了分化,，但是在適宜環(huán)境下,，已分化的細(xì)胞能否重新恢復(fù)到發(fā)育的起始狀態(tài)，再重新發(fā)育成其它類型細(xì)胞組織的多能性,，甚至發(fā)育成完整個體的全能性呢,？細(xì)胞的分化是不是發(fā)生了不可逆的變化？為了回答這個問題,，早在1938年,，德國著名胚胎學(xué)家Spemann提出了將發(fā)育后期的胚胎核移到無核的卵子中使其重新發(fā)育的設(shè)想，實驗的目的就是為了檢驗部分分化或完全分化細(xì)胞的全能性,。他通過頭發(fā)結(jié)扎將蠑螈的受精卵一分為二,，有核部分可正常發(fā)育和卵裂，并發(fā)育到16細(xì)胞期,，無核部分當(dāng)移入另一個卵裂球的細(xì)胞核時,，也能發(fā)育成為正常的幼蟲，證實了蠑螈未分化的卵裂球具有發(fā)育的全能性,。1952年,，Briggs和King等將已發(fā)生了分化的蛙胚細(xì)胞核注入去核的蛙卵，構(gòu)建核移植胚,，最后發(fā)育出了完整的蝌蚪,。這是首次進(jìn)行的細(xì)胞核移植嘗試獲得成功。Gurdon等（1962）利用原腸期內(nèi)胚層細(xì)胞進(jìn)行核移植,，分別產(chǎn)下可育爪蟾,。由此證明：自原腸胚以后的細(xì)胞仍然沒有發(fā)生不可逆的改變，可以支持核移植胚發(fā)育到成體,。這些實驗結(jié)果證實,，兩棲類等低等動物至少有部分已分化的體細(xì)胞在卵母細(xì)胞質(zhì)的作用下，可以恢復(fù)其全能性而重新發(fā)育到成體,。這也為哺乳動物核移植奠定了基礎(chǔ),。

1哺乳類動物細(xì)胞核移植研究進(jìn)展

1.1哺乳類動物胚胎細(xì)胞核移植研究進(jìn)展

哺乳動物核移植研究始于1975年，研究遠(yuǎn)遠(yuǎn)晚于兩棲類動物,，其主要原因是由于哺乳動物的受精在體內(nèi)發(fā)生,，而且哺乳動物早期胚胎的體外培養(yǎng)（In Vitro Culture, IVC）技術(shù)和早期胚胎顯微操作技術(shù)在當(dāng)時沒有建立起來。牛津大學(xué)Bromhall（1975）將兔子的胚胎細(xì)胞核移植到未受精的卵母細(xì)胞內(nèi),，部分可發(fā)育到囊胚階段,，但成功率相當(dāng)?shù)汀Ｓ捎诓荒苓M(jìn)行染色體和供體特異性標(biāo)記分析,，因而這些發(fā)育的胚胎來源是否是注入的細(xì)胞核,，或者是胚胎自身的細(xì)胞核都不能作一清楚的解釋。鑒于當(dāng)時的哺乳動物核移植理論和技術(shù)都尚未完善,，人們大多將研究的重點放在了卵裂球的分離和胚胎切割上,。然而,，由于胚胎分割和卵裂球分離技術(shù)本身的局限性，動物克隆的數(shù)量非常有限,，未能達(dá)到人們所希望的預(yù)期效果,，于是人們一直也在探索動物核移植的克隆方法。在1981年,， Illmensee和Hoppe將小鼠囊胚的內(nèi)細(xì)胞團（Inner Cell Mass, ICM）的細(xì)胞核移植到去核的受精卵內(nèi),，獲得了首批克隆的小鼠。這是世界上首次獲得哺乳動物克隆成功的報道,，但是其實驗未被其他的研究人員所重復(fù),，人們?nèi)詫艘浦布夹g(shù)仍缺乏信心。直到1983年這種局面才被Mcgrath和Solter打破,，他們首次利用顯微操作技術(shù)和細(xì)胞融合技術(shù),，將單細(xì)胞期小鼠胚胎作為核供體進(jìn)行核移植，得到了產(chǎn)仔,，并建立了重復(fù)性很高的核移植程序,，使得核移植效率大大提高，人們對核移植技術(shù)的應(yīng)用前景看到了希望,。隨著核移植技術(shù)程序的建立,，哺乳動物細(xì)胞核移植的研究發(fā)展很快。1986年,，Willadsen等用綿羊早期胚胎的卵裂球作供體，用去核的第二次減數(shù)分裂中期（Second Meiotic Metaphase, MII）卵母細(xì)胞作受體,，并用電融合的方法代替了仙苔病毒誘導(dǎo)供體卵裂球與去核卵母細(xì)胞融合,，研究發(fā)現(xiàn)電融合方法比病毒融合法更有效，核移植胚胎的體外發(fā)育能力更強,，重組胚移植后獲得了核移植后代,，這是首次在家畜上獲得了成功。他們的實驗闡明了哺乳動物胚胎細(xì)胞核移植中兩個全新的觀念：（1）作為核受體,，卵母細(xì)胞比受精卵有更大的優(yōu)越性,；（2）綿羊桑椹胚的細(xì)胞核具有發(fā)育的全能性，并建立了以早期胚胎卵裂球為供體,， MII期卵母細(xì)胞為受體胞質(zhì)以及用電融合方法誘導(dǎo)供體細(xì)胞核和受體胞質(zhì)融合這一整套技術(shù),。該技術(shù)極大推動了核移植技術(shù)的發(fā)展，并成功運用于其它動物,，獲得了胚胎克隆牛（Prather et al, 1987）,、兔（Stice & robl, 1988）、豬（Prather et al, 1989）,，和猴（Meng et al, 1997）等,。雖然胚胎細(xì)胞核移技術(shù)的發(fā)展總體相似,，但是各動物胚胎細(xì)胞核移植的發(fā)展過程是有所不同的，下面將分別對各種哺乳動物的胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)研究進(jìn)展作一簡單的概述,。

1.1.1小鼠

 小鼠的胚胎細(xì)胞核移植的研究開展較早,，也是最早獲得了核移植后代。1981年,，Illmensee和Hoppe將小鼠囊胚的ICM細(xì)胞核移植到去核的受精卵內(nèi),，獲得了首批克隆小鼠。1983年,，Mcgrath和Solter首次利用顯微操作技術(shù)和細(xì)胞融合技術(shù),，將單細(xì)胞期小鼠胚胎作為核供體進(jìn)行核移植，得到了產(chǎn)仔,，并建立了重復(fù)性很高的核移植程序,，使得核移植效率大大提高。除了這些取得突破的研究外,，Hoppe和Illmensee（1981）的研究證明了孤雌生殖胚胎的ICM細(xì)胞含有發(fā)育個體所需的所有基因,，這些細(xì)胞具有發(fā)育的全能性。在細(xì)胞周期的調(diào)整和核質(zhì)互作上,，Cheong等（1993）發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周期早期的胚胎細(xì)胞核在受體細(xì)胞質(zhì)中可以發(fā)生發(fā)育程序的重排,，核移植胚胎的發(fā)育率明顯提高，并獲得了核移植后代,。1996年,，Kwon和Kono等通過改進(jìn)方法，獲得了4個和6個遺傳上完全相同的繼代核移植后代,。另外有研究表明,，小鼠囊胚期的滋養(yǎng)層細(xì)胞與ICM細(xì)胞一樣具有發(fā)育的全能性（Tsunda & Kato, 1997; Sotomaru et al., 1999）。

1.1.2 牛

實驗動物中的胚胎細(xì)胞核移植研究為家畜的核移植研究奠定了扎實的技術(shù)基礎(chǔ),。而在家畜中,，牛的胚胎細(xì)胞核移植研究的歷史較為久遠(yuǎn)，研究的投入是最大的,，也取得了豐碩的成果,。1987年，Robl等首次進(jìn)行牛的核移植研究,，他們將1-8細(xì)胞期胚胎的細(xì)胞核移到去核的合子內(nèi),，結(jié)果1-細(xì)胞期胚胎的細(xì)胞核移植后構(gòu)成的重組胚可以發(fā)育到出生，而處于其它細(xì)胞期的胚胎細(xì)胞核移植后均不能支持重組胚發(fā)育超過4-細(xì)胞期,。同年,，Prather等（1987）用Willadsen相同的核移植技術(shù)程序（Willadsen, 1986），將16-32細(xì)胞期胚胎的卵裂球移入去核的體內(nèi)或體外成熟卵母細(xì)胞內(nèi)，最后出生了1頭核移植牛犢,，其成功率為1%,。Bondioli等（1990）用16-64細(xì)胞期胚胎作核移植供體，獲得了7頭來自同一核供體胚胎表現(xiàn)型的牛犢,，移植的成功率達(dá)20%,。Stice和Keefer（1993）獲得了54枚來自同一供體胚胎的克隆胚胎，其第一,、二,、三代克隆胚胎移植后均產(chǎn)下了牛犢。Ector等（1995）克隆與再克隆囊胚發(fā)育率（12.9%與14.9%）和妊娠率（35.7%與33.3%）沒有差異性,。而Heyman等（1995）用體外受精（In Vitro Fertilization, IVF）胚胎作為核移植供體,，核移植胚胎的囊胚發(fā)育率達(dá)到了22.6%，這與體內(nèi)胚胎作為核移植供體核的囊胚發(fā)育率相似（30.2%）,。而在國內(nèi)這方面的研究也取得了進(jìn)展,，李雪峰等（1996）成功的獲得了我國第一頭胚胎克隆牛。

1.1.3豬 

1989年P(guān)rather等利用合子間的原核交換,，并利用電脈沖使供體原核和去核合子融合,，得到了7頭仔豬，而利用2-8細(xì)胞期胚胎的核融合去核的MII期卵母細(xì)胞,，體內(nèi)移植后形成11%的桑椹胚,，移植88枚核移植胚胎至受體母豬僅生下了1頭仔豬，成功率不到1%,。因此后來的研究也著重轉(zhuǎn)向影響豬胚胎細(xì)胞核移植的因素,。同牛一樣，豬的核受體卵母細(xì)胞既可用體內(nèi)成熟的也可用體外成熟的（Prather et al., 1991）,。但由于當(dāng)時卵母細(xì)胞的體外成熟培養(yǎng)系統(tǒng)還不夠完善,，使得體外成熟卵母細(xì)胞質(zhì)量較差而不能完成胚胎的體外發(fā)育全過程（Nagashima et al., 1992）。Prather等（1990）在研究發(fā)現(xiàn),，豬核移植胚發(fā)生了發(fā)育程序的重排，出現(xiàn)供體核膨脹,，并認(rèn)為核的膨脹程度與卵裂球的發(fā)育時期無關(guān),。在豬卵母細(xì)胞激活上，研究表明：采用合適的場強1次電脈沖就足以激活豬卵母細(xì)胞,，增加脈沖次數(shù)并不能提高激活率（Prather et al., 1989; Prochazka et al., 1992; Nagashima et al., 1992; 趙浩斌等, 1999）,。而在胚胎發(fā)育的早期階段基因表達(dá)和蛋白質(zhì)合成研究中，也有了初步的成果,。Schoenbeck等（1992）研究表明豬胚胎基因組從4細(xì)胞期的16h開始控制發(fā)育,，Prather 和 Rickords（1992）的研究發(fā)現(xiàn)RNA的合成與加工始于4細(xì)胞期的24h，并認(rèn)為卵母細(xì)胞質(zhì)對核的重排不受母體-合子轉(zhuǎn)變（Maternal to zygota transition, MZT）的影響。Parry和Prather等（1995）將8-細(xì)胞期胚胎的卵裂球融合于去核MII期卵母細(xì)胞內(nèi),，發(fā)現(xiàn)在核移植胚胎上發(fā)現(xiàn)有51KD的蛋白質(zhì)帶,，并證明了蛋白質(zhì)是由胚胎卵裂球帶入的RNA所合成的。

我國竇忠英（1997）和趙浩斌等（1997）用與Prather等（1989）相同的方法得到了克隆豬,。

1.1.4 兔

兔子胚胎細(xì)胞核移植研究起始于1975年,，Bromhall等首次將兔桑椹胚的卵裂球細(xì)胞注入到成熟后激活的卵母細(xì)胞內(nèi)，得到了發(fā)育的囊胚,。Stice和Robl（1988）用電融合方法將8-細(xì)胞期的卵裂球移入去核的MII期卵母細(xì)胞內(nèi),，獲得了世界首批6只基因型完全相同的核移植兔。隨后Collas和Robl（1990）改進(jìn)電激活和電融合技術(shù),，以16-細(xì)胞期胚胎細(xì)胞核為供體核,，230枚重組胚移植后有23只仔兔出生，這是到目前為止效率最高的報道,。Collas和Robl在兔的細(xì)胞核移植上的貢獻(xiàn)特別大,。他們的研究為以后的體細(xì)胞核移植奠定了基礎(chǔ)。他們在兔核移植胚胎細(xì)胞核質(zhì)同步對核移植的影響以及供體核形態(tài)結(jié)構(gòu)變化上進(jìn)行了詳細(xì)的研究,，得出了如下的研究成果：隨著供體胚胎的發(fā)育,，胚胎卵裂球構(gòu)建的重組胚發(fā)育力下降，囊胚期ICM細(xì)胞構(gòu)建的重組胚仍可發(fā)育到囊胚,，而滋養(yǎng)層細(xì)胞構(gòu)建的重組胚發(fā)育阻滯于8-細(xì)胞前,，供體細(xì)胞核的形態(tài)重塑對核移胚的發(fā)育有利（Collas & Robl, 1991）。G1期的卵裂球移入去核的MII期卵母細(xì)胞內(nèi)時,，重組胚發(fā)生早熟性染色體凝集（Premature Chromosome Condensation, PCC）,，中期染色體和紡錘體形態(tài)正常，核移植胚的囊胚率發(fā)育率也高,，而早S期和晚S期的卵裂球移入MII期去核卵母細(xì)胞時,，中期染色體和紡錘體出現(xiàn)異常，核移植胚胎的發(fā)育率降低（Collas et al,，1992a, b）,。在Collas和Robl（1991）的研究理論指導(dǎo)下，Yang等 (1992b) 將采集的8-細(xì)胞期胚胎經(jīng)體外培養(yǎng)20～24h發(fā)育到32-64細(xì)胞期后的卵裂球再用作核移植的供體細(xì)胞核,，獲得了8只仔兔,，證明了體外培養(yǎng)到32-64細(xì)胞期的胚胎仍具有發(fā)育的全能性。黃少華等（1993）首次實驗證明,，兔冷凍-解凍胚胎也能進(jìn)行核移植,，其結(jié)果與新鮮胚胎的的核移植胚在激活率、融合率及分裂率上無顯著差異,。之后,，我國科學(xué)家王斌等（1995）,，周琪等（1996, 1999）也獲得了胚胎細(xì)胞核移植兔。在兔核移植研究中一般體內(nèi)成熟的卵母細(xì)胞作為受體胞質(zhì),，Park等（1998）嘗試了用體外成熟14h的卵母細(xì)胞進(jìn)行核移植,，發(fā)現(xiàn)用兔體外成熟卵母細(xì)胞同樣可以獲得核移植后代。

關(guān)于兔繼代核移植報道較少,。1995年,，周琪等獲得了第三代繼代核移植兔胚。1998年,，Rao等嘗試用冷凍保存的兔核移植胚胎進(jìn)行繼代核移植,，得到了繼代核移植囊胚，但未得到后代,。Piotrowska等（2000）用兔8細(xì)胞胚胎卵裂球進(jìn)行繼代核移植,，發(fā)現(xiàn)重組胚的發(fā)育率無影響，將第三代繼代核移植重組胚移入受體后獲得了克隆個體,。

1.1.5羊

綿羊是繼小鼠后第二個獲得核移植后代的哺乳動物,，也是最早獲得核移植后代的家畜。早在1986年,，Willadsen用8-16細(xì)胞期的胚胎作為核移植供體,，首次用去核的MII期卵母細(xì)胞作為核移植受體，并用電融合方法代替仙苔病毒來誘導(dǎo)供體卵裂球細(xì)胞與受體胞質(zhì)相融合,，獲得了核移植后代,。該方法成為以后核移植的常規(guī)方法，為以后其它家畜胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植的成功奠定了技術(shù)基礎(chǔ),。隨后Smith和Wilmut（1989）用綿羊16-細(xì)胞和ICM作為核移植供體,，采用該方法進(jìn)行核移植，都得到了活的后代,，該研究首次證明了綿羊ICM細(xì)胞仍具有發(fā)育的全能性,。Pugh等（1992）的研究表明，綿羊體外成熟卵母細(xì)胞可用于構(gòu)建核移植胚胎,。1997年,，Liu等在研究供體細(xì)胞與卵母細(xì)胞周期的協(xié)調(diào)性對核移植胚胎體外發(fā)育的影響發(fā)現(xiàn)，M期卵裂球移入MII期卵母細(xì)胞可以提高核移植胚胎的發(fā)育率（Liu et al., 1997）,。

在國內(nèi),，山羊的胚胎細(xì)胞核移植在國際上一直處于領(lǐng)先地位。1991年,，張涌等利用4-32細(xì)胞胚胎卵裂球作為核移植供體，去核的MII期卵母細(xì)胞作受體,，構(gòu)建的重組胚胎移植后出生了世界首批核移植山羊5只,，這是我國在哺乳動物細(xì)胞核移植上的首次獲得成功。1995年，鄒賢剛等通過胚胎繼代核移植的方法獲得了山羊4只,。

1.2 哺乳動物體細(xì)胞核移植研究進(jìn)展

Gurdon等（1962; 1975）用爪蟾,，Diberardino & Orr（1992）用蛙分化的細(xì)胞進(jìn)行核移植都得到了蝌蚪，證實了在兩棲動物上至少部分已分化的細(xì)胞具有發(fā)育的全能性,，細(xì)胞分化后在基因組上沒有發(fā)生不可逆的改變,，基因組上存在重新啟動發(fā)育所需的所有基因，這一理論為哺乳動物體細(xì)胞核移植研究奠定了理論基礎(chǔ),。Czolouska等（1984）的研究表明已分化的小鼠胎兒胸腺細(xì)胞移植到激活的卵母細(xì)胞后可以發(fā)生形態(tài)重塑,，形成原核樣結(jié)構(gòu)，推測體細(xì)胞能夠支持胚胎的發(fā)育,。后來,，Kono等（1991）報道了用小鼠胸腺細(xì)胞核移植后得到了發(fā)育的囊胚，但移植后未獲得分娩的核移植小鼠,。由于當(dāng)時普遍認(rèn)為哺乳動物的細(xì)胞分化在遺傳結(jié)構(gòu)上發(fā)生了不可逆的改變,，部分基因發(fā)生缺失，進(jìn)而失去了發(fā)育的全能性,，這些研究結(jié)果未引起人們的重視,。直到1997年，Wilmut等得到了舉世矚目的第一只成年體細(xì)胞核移植綿羊—Dolly后,，體細(xì)胞核移植才受到廣泛的關(guān)注,，人們才開始重新認(rèn)識細(xì)胞分化的本質(zhì)以及細(xì)胞分化的理論基礎(chǔ)。當(dāng)然,，人們對“Dolly”羊也提出了置疑,，但DNA指紋分析證明了Dolly的確來自成年綿羊乳腺上皮細(xì)胞（Ashworth et al., 1998; Signer et al., 1998），后來眾多的體細(xì)胞核移植的成功充分肯定了該研究的結(jié)果（Schnieke et al., 1997; Wakayama et al., 1998; Bulter et al., 1998; Shiga et al., 1999; Lanza et al., 2000b）,。Dolly的出生,，使哺乳動物核移植研究進(jìn)入了一個嶄新的階段，Wilmut等建立的一整套綿羊體細(xì)胞核移植程序,，如恢復(fù)體細(xì)胞核全能性的“血清饑餓法”,，體細(xì)胞傳代階段確定以及體細(xì)胞克隆后代與親本核供體間的DNA微衛(wèi)星分析技術(shù)成為全世界同行公認(rèn)的哺乳動物體細(xì)胞核移植技術(shù)的基本程序。

在短短的幾年里,，核移植研究從胚胎細(xì)胞核移植轉(zhuǎn)入了體細(xì)胞核移植研究階段,，世界各地的科學(xué)家對各種類型的體細(xì)胞核移植進(jìn)行了有意義的嘗試。用胎兒細(xì)胞和成年動物體細(xì)胞進(jìn)行核移植的研究進(jìn)展迅速,，所使用的供體細(xì)胞也越來越來廣泛,，并取得了重大進(jìn)展。迄今為止,，已有下面9種供核類型的體細(xì)胞核移植后代產(chǎn)生,。

（1）胎兒成纖維細(xì)胞：Cibelli 等（1998）采取34日齡牛胎兒成纖維細(xì)胞產(chǎn)下了后代,。之后Vignon 等（1999）重復(fù)了此實驗，也獲得產(chǎn)仔的結(jié)果,。后來相繼得到了克隆山羊（Baguisi et al., 1999; Keefer et al., 2002）,，克隆豬（Onishi et al., 2000）和克隆兔（Chesne et al., 2002）。

（2）成體乳腺細(xì)胞：Wilmut等（1997）從妊娠母羊乳腺中采取細(xì)胞,，重復(fù)Campbell等（1996）的實驗方法,，成功獲得了世界首例成年綿羊體細(xì)胞核移植后代—Dolly。之后,，Zakhartchenko等（1999a）用1 頭3歲的牛乳腺上皮細(xì)胞核移植得到了克隆牛,。

（3）卵丘/顆粒細(xì)胞：Wakayama 等（1998）分離卵母細(xì)胞周圍的卵丘細(xì)胞作為核供體細(xì)胞，不經(jīng)培養(yǎng)直接作核移植,，獲得50多只克隆小鼠,。這是繼“多利”后的第二批哺乳動物體細(xì)胞核移植后代。之后也相繼研究成功克隆牛（Kato et al., 1999; Wells et al., 1999）,、克隆山羊（Baguisi & Overstron, 2000）和克隆豬（Polejavea et al., 2000; Cabot et al., 2001）,。

（4）卵管/子宮上皮細(xì)胞：Kato 等（1998）進(jìn)行了輸卵管上皮細(xì)胞核移植實驗，核移植后共獲得94枚融合胚,，其中24枚發(fā)育到囊胚階段,，移植4枚胚胎，最后產(chǎn)下3頭牛犢,。

（5）肌肉組織的細(xì)胞：法國科學(xué)家Bulter等（1998）,、Vignon 等（1998）報道了用胎兒肌肉細(xì)胞作供體得到了核移植牛。而Shiga 等（1999）采取2歲公牛肌肉細(xì)胞,，傳代培養(yǎng)至少4代,，經(jīng)血清饑餓法或不經(jīng)血清饑餓法培養(yǎng)均產(chǎn)出牛犢。

（6）成體耳部成纖維細(xì)胞: Kubota等（2000）用1頭17歲老牛的耳緣皮膚成纖維培養(yǎng)傳代至15代,，用于核移植,，得到了6頭核移植牛犢。之后,，Park等（2002）采用成體耳部成纖維細(xì)胞也獲得了克隆豬,。

（7）睪丸支持細(xì)胞：Ogura等（2000a）采用未成熟的小鼠睪丸支持細(xì)胞進(jìn)行體細(xì)胞核移植而獲得了克隆小鼠。

（8）小鼠尾尖細(xì)胞：Wakayama和Yanagimachi（1999）采用成年小鼠的尾尖細(xì)胞得到了核移植后代,。接著Kato等（1999）和Ogura等（2000b）也分別得到了來自小鼠尾尖細(xì)胞的克隆小鼠,。

（9）初乳的乳腺上皮細(xì)胞：Kishi等（2000）用從初乳中分離出的乳腺上皮細(xì)胞作核移植獲得了2只克隆牛。

綜上所述,，自體細(xì)胞核移植綿羊成功后,，體細(xì)胞核移植后代已在牛（Kato et al., 1998）、小鼠（Wakayama et al., 1998）,、山羊（Bagsuisi et al., 1999）和豬（Polejaeva et al., 2000; Onishi et al., 2000）等動物上獲得了成功,，下面將對各動物種類的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述,。

1.2.1小鼠

小鼠體細(xì)胞核移植研究所采用的方法與其它動物有所不同，在其它動物中所采用的方法是電融合法,，小鼠上常用的方法是細(xì)胞質(zhì)內(nèi)注射法，即通過顯微操作將供體細(xì)胞直接注入去核卵母細(xì)胞內(nèi),。1989年,，Tsunoda等嘗試將雄性小鼠的胎兒原始生殖嵴細(xì)胞移入去核的合子內(nèi)，構(gòu)建的重組胚大多未發(fā)育到囊胚,。1995年,，Kato和Tsunoda的研究證明了胎兒生殖細(xì)胞具有發(fā)育的全能性或多能性。接著Kimura和Yanagimachi（1995）和Sasagawa等（1998）的研究證明成熟個體的生殖細(xì)胞（初級,、次級精母細(xì)胞）具有發(fā)育的全能性,，其中Sasagawa等（1998）的移植胚胎經(jīng)移植后出生了2只小鼠。

1998年,，Wakayama等（1998）采用不經(jīng)過培養(yǎng)的小鼠卵丘細(xì)胞作為核供體,，直接注射給去核的卵母細(xì)胞，得到了10只可育的小鼠,，這也是繼“多莉”后第二批哺乳動物體細(xì)胞核移植后代,，它的成功有力地支持Wilmut等（1997）的試驗結(jié)果。Wakayama等（1998）同時還進(jìn)行了公鼠睪丸支持細(xì)胞和雌鼠神經(jīng)細(xì)胞的核移植實驗并獲得了附植的結(jié)果,，但均中途流產(chǎn),。但是Ogura等（2000a）用來源于未成熟的睪丸支持細(xì)胞作供核進(jìn)行細(xì)胞質(zhì)內(nèi)注射，獲得了后代,。用小鼠尾尖細(xì)胞作供核,，也獲得了克隆小鼠（Wakayama & Yanagimachi, 1999; Kato et al., 1999; Ogura et al., 2000b）。其中值得一提的是,，這次Ogura等（2000b）采用的是電融合方法獲得克隆小鼠的,。

1.2.2牛

在哺乳動物的體細(xì)胞核移植研究中，牛的核移植研究是當(dāng)今的熱點,，并取得了重大進(jìn)展,。早1995年，Delhaise等就用核移植方法證明來自牛雄性胎兒的原生殖嵴細(xì)胞在受體胞質(zhì)內(nèi)可以發(fā)生發(fā)育程序的重編,，核移植胚可發(fā)育到囊胚,。1997年，Lavior等以牛新鮮和冷凍的卵原細(xì)胞,，早期卵裂球和顆粒細(xì)胞為供體構(gòu)建重組胚,，結(jié)果重組胚在融合后40h的卵裂率無明顯差異，且由這些供體構(gòu)建的重組胚有部分可以發(fā)育到囊胚期,，當(dāng)來自卵原細(xì)胞的桑椹胚和囊胚移植到受體后,，重組胚可以發(fā)育為胎兒和胚外組織,。這些都為體細(xì)胞克隆牛奠定了基礎(chǔ)。Kato等（1998）和Cibelli等（1998）分別用成年牛的卵丘細(xì)胞,、輸卵管上皮細(xì)胞和轉(zhuǎn)染的胎兒成纖維細(xì)胞作為供體得到了體細(xì)胞核移植牛犢,。幾乎同時，法國科學(xué)家也報道了用胎兒肌肉細(xì)胞經(jīng)過培養(yǎng)傳代后作供體得到了核移植牛（Bulter et al., 1998; Vignon et al., 1998）,。而Shiga 等（1999）采取2歲公牛肌肉細(xì)胞,，傳代培養(yǎng)至少4代，經(jīng)血清饑餓法或不經(jīng)血清饑餓法培養(yǎng)均產(chǎn)出牛犢,。Hill等（2000a）用血清饑餓法處理牛胎兒成纖維細(xì)胞后在進(jìn)行核移植,，可顯著提高重組胚的囊胚形成率，而血清饑餓法處理對成體成纖維細(xì)胞的核移植胚胎的發(fā)育沒有影響,。Wells等（1999）從活體牛卵巢內(nèi)采集得到顆粒細(xì)胞作為核供體,，獲得了10頭核移植牛，成功率達(dá)到10%,。楊向中實驗室于2000年3月公布了用17歲齡公牛的耳部成纖維細(xì)胞,，成功得生下了6頭克隆牛（Kubota et al., 2000）。Oikawa等（2000）從一頭20歲的日本黑牛獲得了顆粒細(xì)胞,，經(jīng)傳代培養(yǎng)（5代）和血清饑餓培養(yǎng)后,，核移植后獲得了2頭牛犢。由此可見,，核移植技術(shù)可為瀕危動物拯救開辟了一條新的途徑,。

1.2.3豬

相對于其它動物而言，豬的體細(xì)胞克隆研究困難較大,，進(jìn)展很慢,。在1995年，Liu等就將豬原始生殖細(xì)胞（Primordial Germ Cells, PGCs）移植到兔卵母細(xì)胞質(zhì)內(nèi),，核移植胚胎卵裂并發(fā)育到4-細(xì)胞期,。Tao等（1999）和Prather等（1999a）在完善豬卵母細(xì)胞體外成熟和胚胎體外培養(yǎng)技術(shù)后，用體外培養(yǎng)的卵母細(xì)胞和胎兒成纖維細(xì)胞獲得了發(fā)育到囊胚期的核移植胚胎12枚,，從這些結(jié)果也可以發(fā)現(xiàn)豬胎兒成纖維細(xì)胞在去核的卵母細(xì)胞內(nèi)同樣可以發(fā)生發(fā)育程序的重編,，預(yù)示著豬體細(xì)胞核移植即將獲得成功。接著Ott 等（2000）,、Uhm 等（2000a）,、Verma 等（2000）和Koo 等（2001）等利用胎兒成纖維細(xì)胞和卵丘細(xì)胞與體外培養(yǎng)卵母細(xì)胞構(gòu)建重組胚都發(fā)育到了囊胚階段。Kim 等（2000）的研究發(fā)現(xiàn),，用胎兒成纖維細(xì)胞進(jìn)行核移植所構(gòu)建的重組胚的轉(zhuǎn)錄和DNA合成發(fā)生在24h,。2000年3月，PPL公司宣布通過體細(xì)胞核移植技術(shù)獲得5頭世界上的第一批體細(xì)胞克隆豬（Dave, 2000）。2000年8月,，Onishi等將胎兒成纖維細(xì)胞直接注入體內(nèi)成熟去核的卵母細(xì)胞內(nèi),，得到了1頭雌性仔豬。同年,，Polejaeva等（2000）改進(jìn)核移植方法,，先將顆粒細(xì)胞與去核卵母細(xì)胞融合，當(dāng)核移植胚胎發(fā)育到原核期后再進(jìn)行核移植,，將核移植胚的原核與體內(nèi)受精的原核期受精卵的原核進(jìn)行交換,，胚胎移植后由185枚胚胎獲得了5頭白色的仔豬，核移植效率達(dá)到1.2%（Polejaeva et al., 2000）,。Betthauser等（2000）也報道了體細(xì)胞核移植的4頭健康的雄性仔豬。隨著豬體細(xì)胞核移植技術(shù)的發(fā)展,，人們在研究如何提高核移植胚胎體外發(fā)育率（Betthauser et al., 2001; Klocke et al., 2001; Kuhholzer et al., 2001a, b）和利用皮膚成纖維細(xì)胞進(jìn)行核移植的同時（Roh et al., 2001）,，逐步將研究重點轉(zhuǎn)向轉(zhuǎn)基因克隆豬的研究（Park et al., 2001; Uhm et al., 2000b; Koo et al., 2001）。2001年 4月,，PPL公司宣布他們在去年得到體細(xì)胞核移植豬后,，又通過體細(xì)胞核移植的方法得到了5頭帶有人類基因的轉(zhuǎn)基因豬，這些豬可望減小與人體器官的免疫排斥反應(yīng),，為人類提供可移植的器官（網(wǎng)上新聞報道,，見PPL公司主頁www.ppl-therapeutics.com）。正因為轉(zhuǎn)基因豬具有如此巨大的商業(yè)價值,，利用體細(xì)胞核移植技術(shù)生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因豬是未來豬體細(xì)胞核移植的主要方向,。

1.2.4兔

兔的體細(xì)胞核移植的研究進(jìn)展相對較慢。Moens等（1996）將妊娠18-20天的兔胎兒生殖細(xì)胞與去核卵母細(xì)胞融合,，來自雄性和雌性性腺細(xì)胞的重組胚卵裂率相同（均為37%）,，而用培養(yǎng)4天后雄性性腺細(xì)胞構(gòu)建的重組胚囊胚發(fā)育率（16%）明顯高于雌性的（4%），表明了雄性和雌性二倍體生殖細(xì)胞在去核卵母細(xì)胞的發(fā)育程序重編潛力不同,。Yin等（2000）將卵丘細(xì)胞經(jīng)傳代培養(yǎng)3-5代后,，與去核卵母細(xì)胞融合，用電脈沖和6-二甲氨基嘌呤（6-DMAP）結(jié)合激活重組胚,，其卵裂率和囊胚率發(fā)育率分別為66%和23%,，174枚重組胚移植到8只受體后，在其中3只受體上觀察到3個植入位點,，但未發(fā)現(xiàn)胎兒,。Dinnyes等（2001a）以兔耳部成纖維細(xì)胞為供體構(gòu)建重組胚，得到與Yin等（2000）相近的卵裂率和囊胚發(fā)育率,。我國的李光鵬（2000）用肌纖維細(xì)胞為供體,，重組胚囊胚發(fā)育率為37.1%。Chensne等（2001）發(fā)現(xiàn)卵丘細(xì)胞構(gòu)建的重組胚的囊胚發(fā)育率（46.7%）明顯高于胎兒成纖維細(xì)胞（3.6%）,，但后者則獲得了產(chǎn)兔的結(jié)果（Chesne et. al., 2002）,。

1.2.5羊

Ledda等（1996a）將羊PGCs植到去核的卵母細(xì)胞內(nèi),，重組胚在體外可以發(fā)育，但移植后未出生后代,。1997年,，Wilmut等用成年綿羊乳腺上皮細(xì)胞克隆出了世界上第一頭首例體細(xì)胞核移植羊，這也是人們在長期進(jìn)行體細(xì)胞核移植研究所獲得的突破性成果,。Wells等（1997）采用與Wilmut等（1997）相似的方法,，從一枚8天的羊雄性囊胚的ICM獲得了細(xì)胞，體外培養(yǎng)后建立細(xì)胞系,，用低濃度血清誘導(dǎo)G0期,，分別移植到去核體內(nèi)、外成熟的卵母細(xì)胞內(nèi),，最后獲得了3只雄性羔羊,。克隆羊克隆牛的技術(shù)程序相似,，但克隆綿羊大多采用體內(nèi)成熟的卵母細(xì)胞作受體胞質(zhì),。克隆羊的效率也和所報道的克隆牛的效率相似（Colman, 2000）,。轉(zhuǎn)基因克隆羊的研究也取得了重大突破,，已相繼研究成功轉(zhuǎn)基因克隆綿羊（Schnieke et al., 1997; McCreath et al., 2000）和克隆山羊（Keefer et al., 2001）。

我國克隆羊的研究進(jìn)展很快,，郭繼彤等（2000）用來自成年雌性山羊的皮膚成纖維細(xì)胞作為核移供體,，將供體細(xì)胞核直接注入去核卵母細(xì)胞內(nèi)，獲得了兩只遺傳上相同的體細(xì)胞核移植山羊,，這也是世界上首批成年體細(xì)胞克隆山羊,。在轉(zhuǎn)基因克隆羊的研究上，也取得了一定的成績,。安曉榮等（2001）報道用體細(xì)胞克隆出了綿羊轉(zhuǎn)基因囊胚,。成勇等（2002）以轉(zhuǎn)基因山羊體細(xì)胞為供體細(xì)胞克隆出轉(zhuǎn)基因山羊。

1.3胚胎干細(xì)胞核移植研究進(jìn)展

胚胎干（Embryonic Stem, ES）細(xì)胞是早期胚胎細(xì)胞或囊胚ICM細(xì)胞經(jīng)抑制分化后培養(yǎng)而篩選出來的一類全能性細(xì)胞,，這種細(xì)胞具有正常的二倍體核型,，它既可以在特定條件下進(jìn)行無限增殖而不發(fā)生分化，又可以在特定條件下分化為包括生殖系在內(nèi)的各種細(xì)胞和組織（Evans & Kaufman, 1981）,。此外,，將從胎兒的原生殖嵴分離出來的PGCs進(jìn)行培養(yǎng)，也可以形成在功能和形態(tài)上與ES細(xì)胞相似的細(xì)胞系,。ES細(xì)胞具有體外發(fā)育的全能性,，并且可以在體外無限傳代，因此，它是動物克隆的理想供體細(xì)胞,。ES細(xì)胞作為核移植供體細(xì)胞與體細(xì)胞的制備方法類似,，亦需進(jìn)行細(xì)胞周期的調(diào)控。

迄今為止,，只有在小鼠和人已培養(yǎng)建立ES系,，而牛、兔,、羊,、豬僅獲得了擬干細(xì)胞，因此用真正的ES細(xì)胞進(jìn)行核移植只有小鼠是獲得了成功（Wakayama et al., 1999b）,。

在研究早期,，Tsunda和Kato等（1993）將小鼠的ES細(xì)胞移入去核卵母細(xì)胞內(nèi)，核移植胚胎體外發(fā)育到桑椹胚和囊胚期,，移植到受體后也發(fā)現(xiàn)有植入位點,，但未獲得核移植后代。Sims和First（1994）將培養(yǎng)的ICM注入到去核卵母細(xì)胞,，獲得4頭牛犢。Campbell等（1995）將山羊第三代的ES樣細(xì)胞進(jìn)行核移植,，獲得了活的核移植羔羊,。豬的ES樣細(xì)胞，在核移植后可以指導(dǎo)胚胎發(fā)育到囊胚階段,，目前仍沒有活的后代出生（Chen et al., 1999）,。雖然牛ES樣細(xì)胞經(jīng)過核移植后，出生的后代在生后不久死亡,，但也證明了牛ES樣細(xì)胞可以參與胎兒的發(fā)育,，具有發(fā)育的全能性（Iwasaki et al., 2000）。Wakayama等（1999b）在繼小鼠的體細(xì)胞核移植成功后,，又利用相同的技術(shù)對小鼠ES細(xì)胞進(jìn)行核移植,，得到了核移植小鼠31只。該研究證明了用ES細(xì)胞進(jìn)行核移植產(chǎn)生后代的可能性,。由于ES細(xì)胞在體外具有無限增殖而不發(fā)生分化的特性,，故可以在體外更方便地對ES細(xì)胞進(jìn)行基因改造，通過基因“敲除”和“插入”來研究基因的功能,，Sato等（2000）用小鼠的ES細(xì)胞系TT2的細(xì)胞直接注射入去核的卵母細(xì)胞內(nèi),，核移植胚胎可發(fā)育到妊娠14天，但未能出生小鼠,。已報道利用小鼠ES細(xì)胞可以定向分化為造血細(xì)胞（Perkins, 1998）,，而利用人ES細(xì)胞可以在體外分化如分化為分泌胰島素的胰島素樣細(xì)胞（Odorico et al., 2001）等多種細(xì)胞。最近，Wakayama等（2001）報道將個體細(xì)胞核移植后得到了sntES細(xì)胞（具有ES細(xì)胞的特性）移植到去核卵母細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi),，獲得了20只小鼠,，其中11只小鼠發(fā)育正常并具繁殖能力。由此表明,，sntES細(xì)胞器具有發(fā)育全能性,，可以建立成年動物自身的干細(xì)胞系，這些干細(xì)胞可以分化產(chǎn)生各種細(xì)胞,、組織和器官,，用于進(jìn)行自身疾病的細(xì)胞治療。因此對人類體細(xì)胞核移植和干細(xì)胞的研究與應(yīng)用有深遠(yuǎn)的影響,。目前,，利用ES細(xì)胞進(jìn)行核移植的主要研究方向是利用這些細(xì)胞生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動物，并利用核移植建立成年動物體細(xì)胞核移植ES細(xì)胞系,。

1.4轉(zhuǎn)基因克隆動物研究進(jìn)展

隨著哺乳動體細(xì)胞核移植技術(shù)的發(fā)展,，以及人和家畜基因組計劃的完成，轉(zhuǎn)基因技術(shù)的研究走出了20世紀(jì)90年代徘徊不前的局面,，進(jìn)入了新的發(fā)展時期,，即轉(zhuǎn)基因克隆動物時期。轉(zhuǎn)基因克隆動物技術(shù)是轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)與克隆技術(shù)的有機結(jié)合,，它是以動物體細(xì)胞為受體,，將目的基因以DNA轉(zhuǎn)染的方式導(dǎo)入能進(jìn)行傳代培養(yǎng)的動物體細(xì)胞，再以這些體細(xì)胞為核供體,，進(jìn)行動物克隆,。

PPL公司Schnieka等（1997）率先克隆出了轉(zhuǎn)基因動物。他們是從35日齡胎兒分離的體細(xì)胞,，經(jīng)傳代培養(yǎng)后和基因轉(zhuǎn)移后,，將轉(zhuǎn)染了新霉素抗性（Neomycin）基因和人凝血因子（IX）基因的體細(xì)胞移植到受體卵母細(xì)胞內(nèi)，出生了帶有IX基因的轉(zhuǎn)基因羊,。Cibelli等（1998）用一個55日齡的雄性牛胎兒分離得到成纖維細(xì)胞,，體外培養(yǎng)后轉(zhuǎn)代兩次，用標(biāo)記ß-gal/neo對細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,，轉(zhuǎn)染的細(xì)胞用新霉素篩選兩周之后,，得到5個抗性細(xì)胞克隆，經(jīng)PCR分析,，發(fā)現(xiàn)它們都是轉(zhuǎn)基因細(xì)胞,，而且表明了標(biāo)記基因，選擇其中一個細(xì)胞為核移植供體,，通過核移植得到重組胚276個,，其中33個（1%）發(fā)育到囊胚,，經(jīng)移植到11頭同期化的受體母牛體內(nèi)后，出生了4頭小牛,，經(jīng)過分析檢測,，發(fā)現(xiàn)這4頭小牛都在同一個染色體位點整合了外源基因，說明了它們來源于同一個體細(xì)胞克隆,，而實驗中的轉(zhuǎn)基因效率達(dá)到了1.4%,。1999年，Baguisi等克隆出來的5只轉(zhuǎn)基因山羊中,，其中的1只羊在奶中表達(dá)了高水平的抗凝血因子III,。2000年，McCreath等用基因打靶后的綿羊體細(xì)胞生產(chǎn)了轉(zhuǎn)基因綿羊,。隨后轉(zhuǎn)基因山羊（Keefer et al., 2001）和轉(zhuǎn)基因豬（Lai et al., 2002）也相繼獲得成功,。

我國的轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)也取得了一定的成績。安曉榮等（2001）報道用綠色熒光蛋白（GFP）基因作為報告基因,，用綿羊的轉(zhuǎn)基因顆粒細(xì)胞進(jìn)行核移植,，得到了發(fā)育的綿羊轉(zhuǎn)基因囊胚。成勇等（2002）以轉(zhuǎn)基因山羊體細(xì)胞為供體細(xì)胞克隆出轉(zhuǎn)基因山羊,。

1.5種間細(xì)胞核移植研究進(jìn)展

細(xì)胞核移植作為一種重要的科學(xué)研究方法,，隨著這項技術(shù)的不斷成熟，它也成為挽救瀕危動物的一個重要手段,，由于瀕危動物的卵母細(xì)胞來源較少,，進(jìn)行體細(xì)胞核移植的難度增大，人們就希望通過種間核移植技術(shù)來達(dá)到這個目的,。但在這方面的研究進(jìn)展是較為緩慢。

De Roeper 等（1977）將Hela移入非洲爪蟾卵內(nèi),，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Hela細(xì)胞在爪蟾內(nèi)能夠發(fā)生染色體擴散和DNA合成,，表明爪蟾卵母細(xì)胞內(nèi)有能夠激活哺乳動物體細(xì)胞的因子，這種激活因子無特異性,。McGrath和Solter（1986）利用他們在小鼠胚胎細(xì)胞核移植上的方法進(jìn)行小鼠不同種間原核交換研究,，結(jié)果獲得的種間核移植胚僅出現(xiàn)有限次數(shù)的卵裂。梅琪等（1993）進(jìn)行的鼠-兔種間核移植研究,，結(jié)果重組胚胎有43.1%分裂率,，5.4%發(fā)育到囊胚。譚世儉等（2001）作的水牛-黃牛種間胚胎細(xì)胞核移植研究,，獲得了發(fā)育的種間核移植囊胚,。李光鵬（1998）將小鼠8-細(xì)胞胚的卵裂球移入豬去核卵后，重組胚可卵裂至8細(xì)胞期,。Dominko等（1999）等以牛,、豬,、羊、大鼠和猴的皮膚成纖維細(xì)胞為核供體,，牛卵母細(xì)胞為核受體,，探索牛卵母細(xì)胞在已分化體細(xì)胞核指導(dǎo)下的有絲分裂能力及用牛卵母細(xì)胞作為受體胞質(zhì)的可能性。結(jié)果表明,，除了大鼠-牛雜種胚外,，其余都發(fā)育到囊胚階段，但是雜種胚移植到受體后沒有出生后代,。然而,，就種間核移植胚發(fā)育到囊胚而言，牛卵母細(xì)胞維持發(fā)育的能力沒有因供核動物的物種,，染色體數(shù)目和年齡的不同而表現(xiàn)出差異,，表明哺乳動物保留著調(diào)節(jié)早期胚胎發(fā)育的機制，牛卵母細(xì)胞的胞質(zhì)能支持具有不同染色體種類和數(shù)目的異種核發(fā)育,。Lanza等（1999a, b）把人的體細(xì)胞核移植到牛的去核卵母細(xì)胞,，得到的一些類似核移植胚胎也都發(fā)育到較高級階段。近年來,，人們嘗試了黃牛-水牛（Kitiyanant et al., 2000; Nguyen et al., 2000）,，小鼠-豬（Lee et al., 2001），小鼠-牛（Arat et al., 2001; Liu et al., 2001）,，以及豬-牛（Yoon et al., 2001）等動物種間體細(xì)胞核移植的研究,，都分別得到了體外發(fā)育的胚胎。目前,，Lanza等（2000b）的研究獲得了令人振奮的結(jié)果,。他們把一種野牛的皮膚成纖維細(xì)胞核移植到家牛的去核卵母細(xì)胞中，發(fā)育到了妊娠晚期并已分化成復(fù)雜的組織和器官的野牛胎兒,。接著,，Vogel（2001）報道將印度野牛的體細(xì)胞作供核移植到去核的家牛卵母細(xì)胞內(nèi)，最后出生了1頭發(fā)育正常的野牛,，但出生后2天就死了,，但這一結(jié)果無疑證明哺乳動物體細(xì)胞可以在異種卵母細(xì)胞內(nèi)完成核發(fā)育程序重編，使已分化的體細(xì)胞發(fā)生去分化并完成整個發(fā)育過程,。也預(yù)示著我國在體細(xì)胞克隆大熊貓,、獼猴及比格犬上有可能成功。雖然我國科學(xué)家陳大元等（1999）把大熊貓的體細(xì)胞核移到兔卵母細(xì)胞中,，重組胚能發(fā)育到囊胚階段,，但目前未能獲得的后代。這一事實說明,，種間核移植確有一定的難度,，只有在諸如核發(fā)育程序重排程度和可靠性,、供體細(xì)胞胞質(zhì)和受體胞質(zhì)（例如線粒體DNA）之間的相容性等問題弄清后，才有可能實現(xiàn)種間核移植,。