生物谷報(bào)道：來(lái)自冷泉港1月2日的消息，本月出版的“Cold Spring Harbor Protocols”提供了一些蛋白成像的新方法,，能幫助科學(xué)家們觀測(cè)染色體和胚胎中蛋白動(dòng)力學(xué),，這些方法還包括了如何將細(xì)菌lac操縱子多拷貝序列插入到哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色體中等,。而且這些方法都可以免費(fèi)在線獲得（www.cshprotocols.org）。

第一個(gè)指南手冊(cè),，鏈接為www.cshprotocols.org/cgi/content/full/2008/2/pdb.prot4903,，描述了如何將細(xì)菌lac操縱子多拷貝序列插入到哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色體中，這些指南還包括了如何穩(wěn)定重復(fù)子,，以及分離在目標(biāo)染色體位點(diǎn)進(jìn)行了標(biāo)記的特殊細(xì)胞克隆的一些實(shí)驗(yàn)技巧,。

一旦標(biāo)記細(xì)胞系建立起來(lái)了,，就能利用熒光標(biāo)記過(guò)的Lac抑制蛋白（這些熒光標(biāo)記結(jié)合在lac操縱子序列）觀測(cè)目標(biāo)染色體區(qū)域，從而科學(xué)家們就能觀測(cè)染色質(zhì)結(jié)構(gòu),，以及復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過(guò)程中染色體的活動(dòng),。

這些方法由伊利諾斯大學(xué)香檳分校（University of Illinois at Urbana-Champaign，生物谷注）的Andrew Belmont研究小組提供,，Belmont實(shí)驗(yàn)室和其它實(shí)驗(yàn)室利用這一方法研究了活細(xì)胞培養(yǎng)物,、酵母、不同多細(xì)胞生物,，比如線蟲(chóng),，果蠅和擬南芥中染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)和動(dòng)力學(xué)特征。

本期“Cold Spring Harbor Protocols”提供的第二個(gè)方法則說(shuō)明了如何在整個(gè)小鼠胚胎中進(jìn)行免疫組化（immunohistochemistry,，生物谷注）,，這種方法能幫助科學(xué)家們?cè)诎l(fā)育的特殊階段，研究一種蛋白的三維分布,，這可以用在檢測(cè)內(nèi)生性的蛋白,，以及轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物上。

免疫組化指南來(lái)自于在其它生物中,，包括非洲爪蟾和果蠅中用于檢測(cè)胚胎發(fā)育的方法,，這種方法描述了幾種化學(xué)和物理手段操作胚胎的技巧，幫助抗體——檢測(cè)目標(biāo)蛋白的存在——能有效的滲入到胚胎組織中,。

附：
免疫組化基礎(chǔ)知識(shí)

免疫組織化學(xué)的概念：
免疫組化是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑 (熒光素、

酶,、金屬離子,、同位素) 顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))，對(duì)其進(jìn)行定位,、定性及定量的研究,，稱為免疫組織化學(xué)。

免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的抗體有哪些,？
免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體,。單克隆抗體是一個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體，應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動(dòng)物制備,。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動(dòng)物后,，從動(dòng)物血中所獲得的免疫血清，是多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物,。

免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的組織和細(xì)胞標(biāo)本有哪些,？
實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類，前者包括石蠟切片（病理大片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片,、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片,。
其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本最常用、最基本的方法,，對(duì)于組織形態(tài)保存好,，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對(duì)照觀察,；還能長(zhǎng)期存檔,，供回顧性研究,；石蠟切片制作過(guò)程對(duì)組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,，但可進(jìn)行抗原修復(fù)，是免疫組化中首選的組織標(biāo)本制作方法,。

石蠟切片為什么要做抗原修復(fù),？有哪些方法？
石蠟切片標(biāo)本均用甲醛固定,，使得細(xì)胞內(nèi)抗原形成醛鍵,、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇，同時(shí)蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽,。所以要求在進(jìn)行IHC染色時(shí),，需要先進(jìn)行抗原修復(fù)或暴露，即將固定時(shí)分子之間所形成的交聯(lián)破壞,，而恢復(fù)抗原的原有空間形態(tài),。
常用的抗原修復(fù)方法有微波修復(fù)法，高壓加熱法,，酶消化法,，水煮加熱法等，常用的修復(fù)液是pH6.0的0.01 mol/L的檸檬酸鹽緩沖液,。

免疫組化常用的染色方法有哪些,？
根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標(biāo)法,，親和組織化學(xué)法,，后者是以一種物質(zhì)對(duì)某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法。這種方法敏感性更高,，有利于微量抗原(抗體)在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位,，其中生物素——抗生物素染色法最常用。

抗體交叉反應(yīng)的原因：
指抗體除與其相應(yīng)的抗原發(fā)生特異性反應(yīng)外還與其它抗原發(fā)生反應(yīng),。產(chǎn)生的原因有以下幾個(gè)方面：
1. 抗原特異性指用于免疫動(dòng)物的抗原性物質(zhì)中含有多種抗原分子,，它引起動(dòng)物產(chǎn)生針對(duì)多種抗原分子特異性的相應(yīng)抗體。任何其它物質(zhì)只要含有一種或多種與上述物質(zhì)相同的抗原分子，必將與上述多特異性的抗血清發(fā)生交叉反應(yīng),。
2. 共同決定簇即兩種抗原分子中都含有相同的抗原決定簇,。
3. 決定簇相似，兩種不同的抗原決定簇,，如果結(jié)構(gòu)大致相同,，由于空間構(gòu)象關(guān)系，某一決定簇的相應(yīng)抗體可以與大致相同的決定簇發(fā)生交叉反應(yīng),。當(dāng)然抗原一抗體之間構(gòu)象相似時(shí)的結(jié)合力小于吻合時(shí)的結(jié)合力,。

多抗和單抗特性比較：
1.均一性。一種單抗中,，每個(gè)抗體的化學(xué)結(jié)構(gòu)和氨基酸順序都相同,，只有一種Ig亞類。即單抗是一種純度很高的均一抗體,。而從不同動(dòng)物,，不同時(shí)期所得到的多抗，各有不同的化學(xué)組成,。多抗是多種種類和亞類Ig的混合物,。
2. 穩(wěn)定性。單抗的穩(wěn)定較差,，對(duì)PH變化敏感,，對(duì)熱不穩(wěn)定，提純過(guò)程中易變性,，而多抗的穩(wěn)定性則較好,。
3. 特異性。單抗是單一地針對(duì)抗原的某一決定簇,，所以用它進(jìn)行血清學(xué)反應(yīng)時(shí),，特異性強(qiáng)，敏感性高,，一般不發(fā)生交叉反應(yīng),。而多抗能與抗原上的多種抗原決定簇結(jié)合，所以特異性較差,，較易引起交叉反應(yīng),。
4.重復(fù)性。單抗的重復(fù)性好,，而多抗每批都不一樣,。
5. 沉淀反應(yīng)。多抗由于與抗原多價(jià)結(jié)合容易形成網(wǎng)絡(luò)樣沉淀,，而單抗只與抗原結(jié)合產(chǎn)生二聚體,，不能直接形成抗原抗體沉淀物。