生物谷報道：來自冷泉港1月2日的消息,，本月出版的“Cold Spring Harbor Protocols”提供了一些蛋白成像的新方法,，能幫助科學家們觀測染色體和胚胎中蛋白動力學,，這些方法還包括了如何將細菌lac操縱子多拷貝序列插入到哺乳動物細胞染色體中等。而且這些方法都可以免費在線獲得（www.cshprotocols.org）,。

第一個指南手冊,，鏈接為www.cshprotocols.org/cgi/content/full/2008/2/pdb.prot4903，描述了如何將細菌lac操縱子多拷貝序列插入到哺乳動物細胞染色體中,，這些指南還包括了如何穩(wěn)定重復子,，以及分離在目標染色體位點進行了標記的特殊細胞克隆的一些實驗技巧。

一旦標記細胞系建立起來了,，就能利用熒光標記過的Lac抑制蛋白（這些熒光標記結(jié)合在lac操縱子序列）觀測目標染色體區(qū)域，從而科學家們就能觀測染色質(zhì)結(jié)構(gòu),，以及復制和轉(zhuǎn)錄過程中染色體的活動,。

這些方法由伊利諾斯大學香檳分校（University of Illinois at Urbana-Champaign，生物谷注）的Andrew Belmont研究小組提供,，Belmont實驗室和其它實驗室利用這一方法研究了活細胞培養(yǎng)物,、酵母、不同多細胞生物,，比如線蟲,，果蠅和擬南芥中染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)和動力學特征。

本期“Cold Spring Harbor Protocols”提供的第二個方法則說明了如何在整個小鼠胚胎中進行免疫組化（immunohistochemistry,，生物谷注）,，這種方法能幫助科學家們在發(fā)育的特殊階段，研究一種蛋白的三維分布,，這可以用在檢測內(nèi)生性的蛋白,，以及轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物上。

免疫組化指南來自于在其它生物中,，包括非洲爪蟾和果蠅中用于檢測胚胎發(fā)育的方法,，這種方法描述了幾種化學和物理手段操作胚胎的技巧，幫助抗體——檢測目標蛋白的存在——能有效的滲入到胚胎組織中,。

附：
免疫組化基礎(chǔ)知識

免疫組織化學的概念：
免疫組化是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,，通過化學反應使標記抗體的顯色劑 (熒光素、

酶,、金屬離子,、同位素) 顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))，對其進行定位,、定性及定量的研究,，稱為免疫組織化學。

免疫組化實驗所用的抗體有哪些,？
免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體,。單克隆抗體是一個B淋巴細胞克隆分泌的抗體，應用細胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后,，從動物血中所獲得的免疫血清,，是多個B淋巴細胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。

免疫組化實驗所用的組織和細胞標本有哪些,？
實驗所用主要為組織標本和細胞標本兩大類,，前者包括石蠟切片（病理大片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片,、細胞爬片和細胞涂片,。
其中石蠟切片是制作組織標本最常用、最基本的方法,，對于組織形態(tài)保存好,，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對照觀察,；還能長期存檔,，供回顧性研究；石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,，但可進行抗原修復,，是免疫組化中首選的組織標本制作方法。

石蠟切片為什么要做抗原修復,？有哪些方法,？
石蠟切片標本均用甲醛固定，使得細胞內(nèi)抗原形成醛鍵,、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇,，同時蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽。所以要求在進行IHC染色時,，需要先進行抗原修復或暴露,，即將固定時分子之間所形成的交聯(lián)破壞，而恢復抗原的原有空間形態(tài),。
常用的抗原修復方法有微波修復法,，高壓加熱法，酶消化法,，水煮加熱法等,，常用的修復液是pH6.0的0.01 mol/L的檸檬酸鹽緩沖液。

免疫組化常用的染色方法有哪些,？
根據(jù)標記物的不同分為免疫熒光法,，免疫酶標法，親和組織化學法,，后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測方法,。這種方法敏感性更高,，有利于微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位，其中生物素——抗生物素染色法最常用,。

抗體交叉反應的原因：
指抗體除與其相應的抗原發(fā)生特異性反應外還與其它抗原發(fā)生反應,。產(chǎn)生的原因有以下幾個方面：
1. 抗原特異性指用于免疫動物的抗原性物質(zhì)中含有多種抗原分子，它引起動物產(chǎn)生針對多種抗原分子特異性的相應抗體,。任何其它物質(zhì)只要含有一種或多種與上述物質(zhì)相同的抗原分子,，必將與上述多特異性的抗血清發(fā)生交叉反應。
2. 共同決定簇即兩種抗原分子中都含有相同的抗原決定簇,。
3. 決定簇相似,，兩種不同的抗原決定簇，如果結(jié)構(gòu)大致相同,，由于空間構(gòu)象關(guān)系,，某一決定簇的相應抗體可以與大致相同的決定簇發(fā)生交叉反應。當然抗原一抗體之間構(gòu)象相似時的結(jié)合力小于吻合時的結(jié)合力,。

多抗和單抗特性比較：
1.均一性。一種單抗中,，每個抗體的化學結(jié)構(gòu)和氨基酸順序都相同,，只有一種Ig亞類。即單抗是一種純度很高的均一抗體,。而從不同動物,，不同時期所得到的多抗，各有不同的化學組成,。多抗是多種種類和亞類Ig的混合物,。
2. 穩(wěn)定性。單抗的穩(wěn)定較差,，對PH變化敏感,，對熱不穩(wěn)定，提純過程中易變性,，而多抗的穩(wěn)定性則較好,。
3. 特異性。單抗是單一地針對抗原的某一決定簇,，所以用它進行血清學反應時,，特異性強，敏感性高,，一般不發(fā)生交叉反應,。而多抗能與抗原上的多種抗原決定簇結(jié)合，所以特異性較差,，較易引起交叉反應,。
4.重復性,。單抗的重復性好，而多抗每批都不一樣,。
5. 沉淀反應,。多抗由于與抗原多價結(jié)合容易形成網(wǎng)絡(luò)樣沉淀，而單抗只與抗原結(jié)合產(chǎn)生二聚體,，不能直接形成抗原抗體沉淀物,。