2011年1月18日,， 杜立林實(shí)驗(yàn)室在 Nucleic Acid Research 在線發(fā)表了題為 A piggyBac transposon-based mutagenesis system for the fission yeast Schizosaccharomyces pombe 的文章，主要報(bào)道了一個(gè)用于裂殖酵母的高效插入誘變工具,。
piggyBac(PB)轉(zhuǎn)座子最初是從粉紋夜蛾Trichoplusia ni中分離出來的,，已經(jīng)在多種真核生物中被用作誘變工具。在這項(xiàng)工作中,，我們發(fā)現(xiàn)PB在裂殖酵母中具有轉(zhuǎn)座活性,。PB轉(zhuǎn)座離開后在原位置極少改變DNA序列，我們利用這一特點(diǎn)在裂殖酵母中開發(fā)了一個(gè)基于PB的誘變系統(tǒng),。在這一系統(tǒng)中,，PB的起始位置是在一個(gè)參與氨基酸合成的基因里，造成了細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)缺陷,；PB的轉(zhuǎn)座會(huì)回復(fù)該基因的功能,，這個(gè)特性方便了我們對(duì)于發(fā)生轉(zhuǎn)座的細(xì)胞的篩選。我們運(yùn)用高通量測(cè)序技術(shù)分析了大量的轉(zhuǎn)座子插入位置,，發(fā)現(xiàn)在該系統(tǒng)中,，PB轉(zhuǎn)座沒有明顯的染色體偏好性。利用此誘變系統(tǒng),，我們篩選到位于klp5, klp6和dam1的能夠增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)微管解聚藥物thiabendazole的抵抗性的PB插入突變,。在另一個(gè)遺傳篩選中，我們發(fā)現(xiàn)在wee1基因中插入PB能夠抑制溫度敏感突變cdc25-22的致死表型,。在這兩個(gè)篩選中,，我們得到了所有預(yù)期的突變基因，體現(xiàn)了該P(yáng)B誘變系統(tǒng)的實(shí)用價(jià)值。
我所研究生李俊是本文的第一作者,，其他貢獻(xiàn)者有張家民,，李欣，索芳,，張美俊,，侯文茹和韓敬華。杜立林是本文的通訊作者,。本文中樣品的高通量測(cè)序工作由我所測(cè)序中心完成,。此課題由科技部973和863項(xiàng)目以及北京市資助，在北京生命科學(xué)研究所完成,。（生物谷Bioon.com）
