調(diào)節(jié)受精、發(fā)育和成熟的微小RNA(miRNA)有希望成為疾病的生物標(biāo)志物,。他們可從象血液,、唾液和尿液一樣的常規(guī)收集液中收集到。但是,，許多因子干擾miRNA測(cè)試的精確性,。在期刊《分子診斷學(xué)》（Journal of Molecular Diagnostics）上在線出版的研究報(bào)道中，一組研究人員提供了收集與分析miRNA的具體操作,，明顯地改善了他們的診斷精確性,。
來(lái)自富蘭克林大學(xué)醫(yī)學(xué)與科學(xué)學(xué)院芝加哥醫(yī)學(xué)分院細(xì)胞與分子藥理學(xué)系首席研究人員Dominik M. Duelli博士報(bào)道，"我們的研究指出,，生物樣本固有的區(qū)別與用于收集分析它們的方法能顯著地影響microRNA的檢測(cè)與定量,。我們開發(fā)了克服這種妨礙活動(dòng)的措施，改善miRNA檢測(cè)敏感度達(dá)30倍,。
在人體中存在有1000多個(gè)miRNAs,。特異miRNAs的反常與疾病相關(guān)。測(cè)量體液中miRNAs的量能有助于疾病診斷或諸如懷孕的狀態(tài)診斷,。Duelli博士和他的同事們定量化了兩個(gè)miRNAs,，一個(gè)是miR-16，它發(fā)揮腫瘤抑制子的作用,，在包括乳腺癌的一些癌癥中異?；騿适В涣硪粋€(gè)是miR-223,，它涉及妊娠和其他狀態(tài),，及一些惡性疾病。
杜克大學(xué)的共同研究人員Sarah Linnstaedt博士補(bǔ)充到,，"一個(gè)廣泛應(yīng)用microRNA的根本挑戰(zhàn)是一直不能分離足夠的高品質(zhì)的分析材料,。我們的文章列出有效收集血漿樣本的方法，把我們向?qū)崿F(xiàn)miRNA疾病診斷學(xué)的目標(biāo)推近一步",。
作者發(fā)現(xiàn)血液收集管的選擇影響定量,。傳統(tǒng)的綠蓋肝素管幾乎完全干擾檢測(cè)?；疑w含抗凝劑氟化鈉與草酸鉀的管子提供最好的結(jié)果,。盡管血漿中豐富的miR-16約為miR-223的500倍，但二者的測(cè)定結(jié)果相同,，這就提示由收集方法的選擇所導(dǎo)致的檢測(cè)上區(qū)別會(huì)一樣影響其他miRNAs,。而且，收集血清miR-223給出了更多不定的結(jié)果,，意味著對(duì)于一些miRNAs首選分析血漿型,。
研究表明，干擾miRNAs檢測(cè)的血漿中天然成分可與miRNAs共純化,。作者鑒定了純化中的額外步驟,，即減少干擾的理想稀釋水平。Duelli 博士解釋說(shuō)"通過(guò)違反直覺地減少原材料,，抑制子被假定稀釋到干擾的閾值以下,。原材料的仔細(xì)滴定給出更精確的miRNAs定量值",。另一種措施，作者通過(guò)將一種可抑制血漿抑制子的酶與可提高miRNAs檢測(cè)敏感性約30倍的標(biāo)準(zhǔn)酶聯(lián)合來(lái)避免污染問(wèn)題,。
最后,，作者觀察到血漿提供者的不同得出不同的miRNA測(cè)量結(jié)果。Duelli博士說(shuō)："這些結(jié)果引伸出可能影響miRNA檢測(cè)與定量的可能性,，所謂的可能性就是能改變血液化學(xué)的因素,，包括飲食、運(yùn)動(dòng),、生物節(jié)律和季節(jié),。"
Duelli博士總結(jié)到，"這項(xiàng)工作的含意是,，如果沒有考慮我們已鑒定的變量,，人樣本miRNA的定量對(duì)于生物標(biāo)志物開發(fā)的目的是不可靠的”。（生物谷bioon.com）
doi:10.1016/j.jmoldx.2011.09.002
PMC:
PMID:
Plasma Components Affect Accuracy of Circulating Cancer-Related MicroRNA Quantitation
Dong-Ja Kim, Sarah Linnstaedt, Jaime Palma, Joon Cheol Park, Evangelos Ntrivalas, Joanne Y.H. Kwak-Kim, Alice Gilman-Sachs, Kenneth Beaman, Michelle L. Hastings, Jeffrey N. Martin, Dominik M. Duelli
Circulating microRNAs (miRNAs) have emerged as candidate biomarkers of various diseases and conditions including malignancy and pregnancy. This approach requires sensitive and accurate quantitation of miRNA concentrations in body fluids. Herein we report that enzyme-based miRNA quantitation, which is currently the mainstream approach for identifying differences in miRNA abundance among samples, is skewed by endogenous serum factors that co-purify with miRNAs and anticoagulant agents used during collection. Of importance, different miRNAs were affected to varying extent among patient samples. By developing measures to overcome these interfering activities, we increased the accuracy, and improved the sensitivity of miRNA detection up to 30-fold. Overall, the present study outlines key factors that prevent accurate miRNA quantitation in body fluids and provides approaches that enable faithful quantitation of miRNA abundance in body fluids.
