瓶端配液器 數(shù)字多道移液器:
移液器的運(yùn)用-疑似甲型H1N1確診須過四關(guān)
對于疑似甲型H1N1流感患者,,通過何種手段才能最終確診其感染了甲型H1N1流感病毒,?
昨日下午,北京市宣武區(qū)迎新街100號,,記者實(shí)地探訪了中國疾控中心病毒病所國家流感中心實(shí)驗(yàn)室,,工作人員再現(xiàn)了如何從疑似患者呼吸道內(nèi)獲取標(biāo)本并分離出病毒的基本片段,再通過特殊儀器下讀出病毒的基因序列,,最終與甲型H1N1流感病毒的基因序列圖進(jìn)行比照,,從而得出患者是否染疫的全過程。
1 運(yùn)送
4℃恒溫運(yùn)送病毒標(biāo)本
地點(diǎn):醫(yī)院至流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室
用于追索病毒的標(biāo)本來自疑似患者的呼吸道,,一般是液體,,即喉液或鼻液。每份液體標(biāo)本需求量為200微克以上,。
據(jù)國家流感實(shí)驗(yàn)室工作人員李曉丹介紹,,只有足夠的標(biāo)本量,才能保證分離到足夠的活病毒和用于核酸檢測的病毒基因片段,。
為了保證病毒的活性,,每份標(biāo)本從患者的鼻部或咽部取出后,必須立即裝進(jìn)防漏,、防爆,、防雨的特殊密閉容器中,。
李曉丹說,容器內(nèi),,要保證4攝氏度的恒溫,,“就像冰箱冷藏室”,一直從醫(yī)院堅(jiān)持到實(shí)驗(yàn)室,。之后,,經(jīng)專人送進(jìn)重重機(jī)關(guān)的P3實(shí)驗(yàn)室(生物防護(hù)三級實(shí)驗(yàn)室)。
2 提取
提取病毒分裝基因片段
地點(diǎn):生物防護(hù)三級實(shí)驗(yàn)室
P3實(shí)驗(yàn)室曾經(jīng)不止一次在抗擊SARS和禽流感的戰(zhàn)斗中嶄露頭角,。防控流感大流行,,及時發(fā)現(xiàn)甲型H1N1流感病毒的蹤跡,P3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的工作,,仍是基礎(chǔ)和關(guān)鍵,。
只有取得特定資格的工作人員,才能打開密碼鎖,,進(jìn)入P3實(shí)驗(yàn)室,。
工作人員需依次穿過一更衣室、二更衣室,、緩沖間和準(zhǔn)備間4個房間,,最終從頭武裝到腳。在裝戴好頭套,、連衣褲的隔離服,,口罩和腳套后,才能進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室開始工作,。
隨著深入,,氣壓也一層層降了下來,實(shí)驗(yàn)室里的氣壓就只有50-60帕左右(比正常氣壓低很多),。只有這樣,,才能保證里面的風(fēng)不會往外吹,里面的微生物和病毒,,不會跑到實(shí)驗(yàn)室外,。
據(jù)李曉丹介紹,檢測甲型H1N1流感病毒的工作,,將從兩方面同時開展:標(biāo)本的一部分用于提取活病毒,,留待培養(yǎng)研究。另一部分,,則用于分離出病毒中的核酸液,,也就是“飽含基因代碼的片段”,需要50微克以上,,分裝入試管后,,以備進(jìn)一步的檢測,。
3 檢測
擴(kuò)展基因代碼方便對比
地點(diǎn):生物防護(hù)二級實(shí)驗(yàn)室(PCR實(shí)驗(yàn)室)
試管中的基因片段隨后將送進(jìn)PCR實(shí)驗(yàn)室。
李曉丹說,,PCR儀是核酸檢測病毒的關(guān)鍵設(shè)備,。最近幾天,他們針對甲型H1N1流感開發(fā)的檢測試劑盒,,就將在這個環(huán)節(jié)發(fā)揮主要作用。
實(shí)驗(yàn)人員將試管內(nèi)的一組基因片段放入檢測試劑配置的反應(yīng)液中,,再置于PCR儀下,,大概兩個半小時左右,每個基因片段都被放大,,生成了大小不一的核酸擴(kuò)展物CDNA(基因片段擴(kuò)展物),。
同時,另一部分通過反應(yīng)液,,被分裝在PCR小試管內(nèi)的核酸RNA(核糖核酸),,則可以在特制模板中,通過與目標(biāo)病毒基因片段的定時定量比對,,由實(shí)驗(yàn)人員讀出結(jié)果:是否為甲型H1N1流感病毒,。
李曉丹說,為了確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確無誤差,,這個定時定量PCR檢測結(jié)果,,只作為整個甲型H1N1流感病毒追索結(jié)論的一個參考。
4 確診
電泳膠內(nèi)篩顯病毒“原形”
地點(diǎn):生物防護(hù)一級實(shí)驗(yàn)室(綜合實(shí)驗(yàn)室)
裝有不同基因片段擴(kuò)展物的微小試管被送進(jìn)綜合實(shí)驗(yàn)室,,這里的關(guān)鍵設(shè)備是盛滿了瓊脂糖凝膠,、兩頭插著正負(fù)電極的矩形電泳檢測儀。
利用移液器,,實(shí)驗(yàn)人員將試管中微量的無色透明液體染色后,,再放入充了電的膠“池”。
在電壓牽引推動下,,膠池的表面開始密集冒起小氣泡,,“那是病毒的基因擴(kuò)展物在向另一個方向走,個頭大的產(chǎn)物走得慢,,越是個頭小的產(chǎn)物走得越快,。”李曉丹說,瓊脂糖凝膠電泳儀就像一面篩子,,把病毒中每個基因片段都以特定的“大”,、“小”影像顯現(xiàn)出來。
當(dāng)然,,上述景象人的肉眼無法看到,。實(shí)驗(yàn)人員讓“膠池”充電40分鐘,,確保所有的擴(kuò)展物都“運(yùn)動”起來后,將“膠池”放進(jìn)另一個特制的方形“鐵柜”中,,這其實(shí)是一部紫外線下工作的“照相機(jī)”———凝膠成像儀,。
成像儀內(nèi),紫外線燈發(fā)光,,照射在凝膠上,,然后對膠中染色發(fā)光的擴(kuò)展物自動拍照,并輸出在連接的電腦屏幕上,。
李曉丹介紹,,電腦中還能同時調(diào)出甲型H1N1流感病毒基因序列圖,在同一個位置上,,受檢病毒的數(shù)個基因片段擴(kuò)展物大小與參照物完全相合,,就能夠最終判斷,標(biāo)本送檢患者感染了甲型H1N1流感病毒,。
反之,,排除感染可能。
李曉丹說,,從病毒標(biāo)本送至實(shí)驗(yàn)室到最終檢測出結(jié)果,,約需4—6小時。
甲型H1N1病毒檢測程序
醫(yī)生對疑似患者的鼻液或喉液取樣
送入流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室
提取多個基因片段,,對逐個基因片段進(jìn)行擴(kuò)展(放大)
擴(kuò)展物入膠染色,,在紫外線燈下發(fā)光成像
與電腦中儲存的目標(biāo)病毒基因片段對比,同一位置上,,大小是否完全一致
若一致則能夠最終判斷,,標(biāo)本送檢患者感染了甲型H1N1流感病毒
移液器的運(yùn)用-臨沂可快速檢測手足口病病毒
據(jù)介紹,為進(jìn)一步提高我市的傳染病防控能力,,切實(shí)提高傳染病病原體實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測水平,,市疾控中心經(jīng)市政府批準(zhǔn)投資 75萬 元 , 先 后 購 置 了 美 國ABI7500PCR儀,、美國GE自動凝膠成像儀,、德國HERAEUS高 速 冷 凍 離 心 機(jī) 、 韓 國MILLIPORE超純水儀,、芬蘭雷勃移液器儀器等設(shè)備,,建立起了全市疾控系統(tǒng)首家 PCR實(shí)驗(yàn)室。
PCR實(shí)驗(yàn)室的建立運(yùn)行,,極大提高了我市手足口病等傳染病診斷的及時性和準(zhǔn)確性,,對于有針對性地制定更加科學(xué)、有效、規(guī)范的傳染病防控措施,,進(jìn)一步提升我市的傳染病預(yù)防控制能力,,有效預(yù)防控制傳染病具有重要的指導(dǎo)性作用。
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