(1)混合培養(yǎng)基中的各成分,。先量取大量元素母液,,再依次加入微量元素母液,、鐵鹽母液,、有機(jī)成分,,然后加入植物激素及其他附加成分。
(2)溶化瓊脂,。稱取應(yīng)加的瓊脂和蔗糖,,將瓊脂浸泡到透明后,用蒸餾水加熱燒開熔化瓊脂,,待瓊脂完全溶化后,,把1加入,用pH試紙測(cè)pH值,,并用0.1mol的NaOH或HCl調(diào)pH為5.6-5.8,,最后加水定容至所需體積。
(3)分裝,。將熬好的培養(yǎng)基分裝于培養(yǎng)瓶中,,分裝時(shí)注意不要把培養(yǎng)基倒在瓶口上,以防引起污染,,然后用封口膜或瓶蓋封口,。
(4)滅菌。由于培養(yǎng)基內(nèi)有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),,極利細(xì)菌和真菌繁殖,,造成污染,影響組培的成功,,一般有高溫高壓消毒和過(guò)濾消毒兩種方法,。⒈高溫高壓消毒:一般用消毒鍋消毒,注意消毒鍋不能裝的過(guò)滿,,采用三次放氣滅菌法,,即0.05Mpa下放三次氣,在0.1Mpa維持15-20分鐘,。⒉過(guò)濾消毒:一些易受高溫破壞的培養(yǎng)基成分如IAA,、IBA、ZT等,,不宜用高溫高壓法消毒,,可用過(guò)濾消毒,可過(guò)濾消毒后再加入已高溫高壓消毒的培養(yǎng)基中,,過(guò)濾消毒應(yīng)在無(wú)菌室或超凈工件臺(tái)上進(jìn)行,,以避免污染培養(yǎng)基。
(2)溶化瓊脂,。稱取應(yīng)加的瓊脂和蔗糖,,將瓊脂浸泡到透明后,用蒸餾水加熱燒開熔化瓊脂,,待瓊脂完全溶化后,,把1加入,用pH試紙測(cè)pH值,,并用0.1mol的NaOH或HCl調(diào)pH為5.6-5.8,,最后加水定容至所需體積。
(3)分裝,。將熬好的培養(yǎng)基分裝于培養(yǎng)瓶中,,分裝時(shí)注意不要把培養(yǎng)基倒在瓶口上,以防引起污染,,然后用封口膜或瓶蓋封口,。
(4)滅菌。由于培養(yǎng)基內(nèi)有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),,極利細(xì)菌和真菌繁殖,,造成污染,影響組培的成功,,一般有高溫高壓消毒和過(guò)濾消毒兩種方法,。⒈高溫高壓消毒:一般用消毒鍋消毒,注意消毒鍋不能裝的過(guò)滿,,采用三次放氣滅菌法,,即0.05Mpa下放三次氣,在0.1Mpa維持15-20分鐘,。⒉過(guò)濾消毒:一些易受高溫破壞的培養(yǎng)基成分如IAA,、IBA、ZT等,,不宜用高溫高壓法消毒,,可用過(guò)濾消毒,可過(guò)濾消毒后再加入已高溫高壓消毒的培養(yǎng)基中,,過(guò)濾消毒應(yīng)在無(wú)菌室或超凈工件臺(tái)上進(jìn)行,,以避免污染培養(yǎng)基。