(1)混合培養(yǎng)基中的各成分。先量取大量元素母液,,再依次加入微量元素母液,、鐵鹽母液、有機(jī)成分,,然后加入植物激素及其他附加成分,。
(2)溶化瓊脂。稱取應(yīng)加的瓊脂和蔗糖,,將瓊脂浸泡到透明后,,用蒸餾水加熱燒開熔化瓊脂,待瓊脂完全溶化后,,把1加入,,用pH試紙測pH值,并用0.1mol的NaOH或HCl調(diào)pH為5.6-5.8,,最后加水定容至所需體積,。
(3)分裝。將熬好的培養(yǎng)基分裝于培養(yǎng)瓶中,,分裝時注意不要把培養(yǎng)基倒在瓶口上,,以防引起污染,然后用封口膜或瓶蓋封口,。
(4)滅菌,。由于培養(yǎng)基內(nèi)有豐富的營養(yǎng)物質(zhì),極利細(xì)菌和真菌繁殖,,造成污染,,影響組培的成功,一般有高溫高壓消毒和過濾消毒兩種方法,。⒈高溫高壓消毒:一般用消毒鍋消毒,,注意消毒鍋不能裝的過滿,采用三次放氣滅菌法,,即0.05Mpa下放三次氣,,在0.1Mpa維持15-20分鐘。⒉過濾消毒:一些易受高溫破壞的培養(yǎng)基成分如IAA、IBA,、ZT等,,不宜用高溫高壓法消毒,可用過濾消毒,,可過濾消毒后再加入已高溫高壓消毒的培養(yǎng)基中,,過濾消毒應(yīng)在無菌室或超凈工件臺上進(jìn)行,以避免污染培養(yǎng)基,。
(2)溶化瓊脂。稱取應(yīng)加的瓊脂和蔗糖,,將瓊脂浸泡到透明后,,用蒸餾水加熱燒開熔化瓊脂,待瓊脂完全溶化后,,把1加入,,用pH試紙測pH值,并用0.1mol的NaOH或HCl調(diào)pH為5.6-5.8,,最后加水定容至所需體積,。
(3)分裝。將熬好的培養(yǎng)基分裝于培養(yǎng)瓶中,,分裝時注意不要把培養(yǎng)基倒在瓶口上,,以防引起污染,然后用封口膜或瓶蓋封口,。
(4)滅菌,。由于培養(yǎng)基內(nèi)有豐富的營養(yǎng)物質(zhì),極利細(xì)菌和真菌繁殖,,造成污染,,影響組培的成功,一般有高溫高壓消毒和過濾消毒兩種方法,。⒈高溫高壓消毒:一般用消毒鍋消毒,,注意消毒鍋不能裝的過滿,采用三次放氣滅菌法,,即0.05Mpa下放三次氣,,在0.1Mpa維持15-20分鐘。⒉過濾消毒:一些易受高溫破壞的培養(yǎng)基成分如IAA、IBA,、ZT等,,不宜用高溫高壓法消毒,可用過濾消毒,,可過濾消毒后再加入已高溫高壓消毒的培養(yǎng)基中,,過濾消毒應(yīng)在無菌室或超凈工件臺上進(jìn)行,以避免污染培養(yǎng)基,。