原理簡介
BCA(bicinchoninic acid)法蛋白濃度定量試劑盒是在世界上常用的蛋白濃度檢測方法之一BCA法基礎(chǔ)上改進(jìn)而成。眾所周知,二價銅離子在堿性的條件下,,可以被蛋白質(zhì)還原成一價銅離子(biuret reaction),,一價銅離子和獨特的BCA Solution A(含有BCA)相互作用產(chǎn)生敏感的顏色反應(yīng),。兩分子的BCA螯合一個銅離子,,形成紫色的反應(yīng)復(fù)合物。該水溶性的復(fù)合物在562nm處顯示強烈的吸光性,,吸光度和蛋白濃度在廣泛范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系,,因此根據(jù)吸光值可以推算出蛋白濃度。
產(chǎn)品特點
1.步驟簡單,,45分鐘內(nèi)完成測定,,比經(jīng)典的Lowry法快4倍而且更加方便。
2.靈敏度高,,檢測濃度下限達(dá)到25μg/ml,,最小檢測蛋白量達(dá)到0.5μg,待測樣品體積為1-20μl ,。
3.BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的去污劑等化學(xué)物質(zhì)的影響,,可以兼容樣品中高達(dá)5%的SDS,5%的Triton X-100,,5%的Tween 20, 60, 80,。
4.在20-2000μg/ml濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。
5. 檢測不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬斯亮藍(lán)法蛋白定量,。
BCA蛋白質(zhì)定量檢測試劑
在蛋白質(zhì)的表達(dá)純化,,結(jié)構(gòu)和功能的研究工作中,蛋白質(zhì)的定量隨處可見,。但是,,什么是理想的蛋白質(zhì)定量方法?如何準(zhǔn)確、快速的對蛋白質(zhì)進(jìn)行定量,,對于不同的樣本,如何選取相應(yīng)的蛋白質(zhì)定量試劑和方案,?如何避免實驗中引入的其它物質(zhì)對蛋白質(zhì)定量的干擾,,PIERCE為這一切提供了可以信賴的解決方案。
PIERCE的BCA(bicinchoninic acid)蛋白質(zhì)檢測試劑是當(dāng)前比Lowry法更優(yōu)越的專用于檢測總蛋白質(zhì)含量的產(chǎn)品,。該方法以快速靈敏,、穩(wěn)定可靠且對不同種類蛋白質(zhì)變異系數(shù)甚小而深受專業(yè)人士的青睞。其中MicroBCA產(chǎn)品可檢測到0.5μg/ml的微量蛋白,,是目前已知的最靈敏的蛋白質(zhì)檢測試劑之一,。
主要特點:
· 準(zhǔn)確靈敏:BCA試劑的蛋白質(zhì)測定范圍是20-2000μg/ml,采用加強方法可檢測到
5μg/ml;MicroBCA試劑測定范圍是0.5-20μg/ml,。
· 快速:45分鐘內(nèi)完成測定,,比經(jīng)典的Lowry法快4倍而且更加方便。
· 經(jīng)濟(jì)實用:除試管外,,測定可在微孔板中進(jìn)行,,大大節(jié)約樣品和試劑用量。
· 不受樣品中離子型和非離子型去污劑影響,。
· 檢測不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考瑪斯亮藍(lán),。
基本原理:
堿性條件下,蛋白將Cu++還原為Cu+,, Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物,,測定其在562nm處的吸收值,并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比,,即可計算待測蛋白的濃度,。