細(xì)胞移植輔助治療腫瘤和白血病可取得較好療效,,但移植后發(fā)生抗宿主病,、感染、腫瘤復(fù)發(fā)仍然是導(dǎo)致干細(xì)胞移植治療失敗的主要因素,。朱教授等利用不同T淋巴細(xì)胞克隆具有各自不同的T細(xì)胞受體可變區(qū)基因重排方式的特點(diǎn),,用PCR大量擴(kuò)增其屬于不同家族的全部可變區(qū)基因、變性膠電泳形成基因指紋圖譜,,觀察8例患者異基因骨髓移植和自體外周血干細(xì)胞移植后不同時(shí)期的變化,,利用微衛(wèi)星多態(tài)性證實(shí)4例異基因骨髓移植后成活的淋巴細(xì)胞來(lái)源于供者。
研究結(jié)果顯示,,基因組DNA各個(gè)T細(xì)胞受體可變區(qū)重排基因在60 cm測(cè)序膠上,,電泳可以形成由近百條基因片段條帶組成的指紋圖譜。移植后新出現(xiàn)的條帶往往代表一個(gè)擴(kuò)增的淋巴細(xì)胞克隆,?;蛑讣y圖譜可反映干細(xì)胞移植后淋巴細(xì)胞克隆由少到多,由小到大的免疫重建過(guò)程,,移植后會(huì)出現(xiàn)一些擴(kuò)增的T淋巴細(xì)胞克隆,。患者預(yù)后與免疫重建過(guò)程相關(guān),,上述8例患者中,,5例患者獲得免疫重建,預(yù)后好,;3例患者免疫重建障礙,,則預(yù)后差,,半年后白血病或者淋巴瘤復(fù)發(fā),其中1例死亡,。
患者干細(xì)胞移植后擴(kuò)增的克隆與臨床關(guān)系顯示,,異基因移植后出現(xiàn)供者的T細(xì)胞克隆,并出現(xiàn)個(gè)別較大的克隆,。深入分析比較1例多發(fā)性骨髓瘤患者移植后擴(kuò)增的T細(xì)胞克隆發(fā)現(xiàn),,該T細(xì)胞克隆能識(shí)別自身的腫瘤細(xì)胞。結(jié)合臨床表現(xiàn)和檢測(cè)指標(biāo),,發(fā)現(xiàn)它與疾病緩解的時(shí)間同步,。將這個(gè)克隆的TCRγV基因序傳送到國(guó)際基因庫(kù)分析比較發(fā)現(xiàn),與這個(gè)克隆的DNA序列最相似的T細(xì)胞克隆中,,有2個(gè)克隆已知其識(shí)別功能,,它們識(shí)別的均是同種抗原的細(xì)胞。
研究人員將移植后患者新顯現(xiàn)的T細(xì)胞受體基因條帶切割下來(lái)測(cè)序的實(shí)際結(jié)果表明,,新條帶通常代表的是一個(gè)克隆,,這一條帶的濃度定量可以作為衡量克隆大小的尺度,濃度增高就是克隆擴(kuò)增的標(biāo)志,。這樣可以區(qū)分一些干細(xì)胞移植患者的擴(kuò)增淋巴細(xì)胞克隆,,進(jìn)一步了解這些克隆擴(kuò)增的意義。