以提高基因工程疫苗的免疫能力和安全性為目標(biāo),國家863計劃通過科研人員攻關(guān)建立了畜禽基因工程疫苗和免疫佐劑研發(fā)技術(shù)體系,;口蹄疫和禽流感等一類傳染病基因工程疫苗的研究取得了重大突破,引導(dǎo)了新一代基因工程疫苗的發(fā)展方向,,并為重大動物疫病的防制奠定了堅實的基礎(chǔ),。
在克隆抗原或疫苗研制用相關(guān)基因的基礎(chǔ)上,構(gòu)建了高效表達的穩(wěn)定載體,,建立并完善基因工程疫苗安全性評價體系和規(guī)?;a(chǎn)工藝。
(1)自主分離獲得禽源腺病毒,,在進行基因物理圖譜定位的基礎(chǔ)上,,構(gòu)建具有自主知識產(chǎn)權(quán)的轉(zhuǎn)移表達載體。
(2)gE-單基因缺失重組病毒疫苗株經(jīng)滅活并制成油乳劑滅活苗,,建立,、優(yōu)化、完善了重組病毒的技術(shù)平臺,,技術(shù)含量和應(yīng)用效果上的達到國內(nèi)外的領(lǐng)先水平,,并在中南、西南地區(qū)建造了GMP生產(chǎn)車間,,已獲得GMP證書及生產(chǎn)許可證,。
(3)構(gòu)建了穩(wěn)定、高效表達的A型口蹄疫病毒多基因重組腺病毒,,獲得了AsiaI型口蹄疫病毒多基因轉(zhuǎn)基因植物,,在酵母菌中成功地融合表達了O型口蹄疫VP1與細(xì)胞因子IFN,從而為口蹄疫防制提供了強大的技術(shù)儲備,。用青海血蜱和微小牛蜱的免疫基因進行原核表達或真核表達研究進展順利,,抗蜱亞單位疫苗的研制成功,將對有效防制家畜血液原蟲病意義重大,。
(4)完成了禽傳染性支氣管炎冠狀病毒S1,、M、N三個基因的真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建,,確定了含有真核表達質(zhì)粒的大腸桿菌的發(fā)酵工藝,,研制的DNA疫苗免疫攻毒保護率達到90%以上,,安全性為100%?;敬_定了疫苗的生產(chǎn)工藝,具有原始創(chuàng)新性,。
(5)建立了檢測血清抗體水平的ELISA方法,、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗、排卵減少率和綜合抗球蟲指數(shù),,有效防治了球蟲對雞的感染,。
(6)建立了快速、大批量體外篩選具有免疫刺激活性的CpG寡核苷酸(CpG ODN)的技術(shù)平臺,,攻克了串聯(lián)的,、多拷貝重復(fù)序列克隆技術(shù)難關(guān),建立了富含CpG重組質(zhì)?;蚬こ叹?50升高密度發(fā)酵工藝并自行創(chuàng)立了一種改進的堿裂解質(zhì)粒DNA大規(guī)模提取方法,。