以提高基因工程疫苗的免疫能力和安全性為目標(biāo),,國(guó)家863計(jì)劃通過(guò)科研人員攻關(guān)建立了畜禽基因工程疫苗和免疫佐劑研發(fā)技術(shù)體系;口蹄疫和禽流感等一類傳染病基因工程疫苗的研究取得了重大突破,引導(dǎo)了新一代基因工程疫苗的發(fā)展方向,,并為重大動(dòng)物疫病的防制奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ),。
在克隆抗原或疫苗研制用相關(guān)基因的基礎(chǔ)上,構(gòu)建了高效表達(dá)的穩(wěn)定載體,,建立并完善基因工程疫苗安全性評(píng)價(jià)體系和規(guī)?;a(chǎn)工藝。
(1)自主分離獲得禽源腺病毒,,在進(jìn)行基因物理圖譜定位的基礎(chǔ)上,,構(gòu)建具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的轉(zhuǎn)移表達(dá)載體。
(2)gE-單基因缺失重組病毒疫苗株經(jīng)滅活并制成油乳劑滅活苗,建立,、優(yōu)化,、完善了重組病毒的技術(shù)平臺(tái),技術(shù)含量和應(yīng)用效果上的達(dá)到國(guó)內(nèi)外的領(lǐng)先水平,,并在中南,、西南地區(qū)建造了GMP生產(chǎn)車間,已獲得GMP證書(shū)及生產(chǎn)許可證,。
(3)構(gòu)建了穩(wěn)定,、高效表達(dá)的A型口蹄疫病毒多基因重組腺病毒,獲得了AsiaI型口蹄疫病毒多基因轉(zhuǎn)基因植物,,在酵母菌中成功地融合表達(dá)了O型口蹄疫VP1與細(xì)胞因子IFN,,從而為口蹄疫防制提供了強(qiáng)大的技術(shù)儲(chǔ)備。用青海血蜱和微小牛蜱的免疫基因進(jìn)行原核表達(dá)或真核表達(dá)研究進(jìn)展順利,,抗蜱亞單位疫苗的研制成功,,將對(duì)有效防制家畜血液原蟲(chóng)病意義重大。
(4)完成了禽傳染性支氣管炎冠狀病毒S1,、M,、N三個(gè)基因的真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建,確定了含有真核表達(dá)質(zhì)粒的大腸桿菌的發(fā)酵工藝,,研制的DNA疫苗免疫攻毒保護(hù)率達(dá)到90%以上,,安全性為100%?;敬_定了疫苗的生產(chǎn)工藝,,具有原始創(chuàng)新性。
(5)建立了檢測(cè)血清抗體水平的ELISA方法,、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn),、排卵減少率和綜合抗球蟲(chóng)指數(shù),有效防治了球蟲(chóng)對(duì)雞的感染,。
(6)建立了快速,、大批量體外篩選具有免疫刺激活性的CpG寡核苷酸(CpG ODN)的技術(shù)平臺(tái),攻克了串聯(lián)的,、多拷貝重復(fù)序列克隆技術(shù)難關(guān),,建立了富含CpG重組質(zhì)粒基因工程菌150升高密度發(fā)酵工藝并自行創(chuàng)立了一種改進(jìn)的堿裂解質(zhì)粒DNA大規(guī)模提取方法,。