微生物學報Acta Microbiologica Sinica
48(3): 317~322; 4 March 2008
基金項目: 國家“973 項目”(2004CB719604); 國家自然科學基金(30470386)
*通訊作者,。Tel: +86-531-88362928; E-mail: [email protected]
作者簡介: 盛多紅(1972.), 男, 山東陽谷人, 博士, 主要從事微生物分子生物學研究,。E-mail: [email protected]
收稿日期: 2007-07-11; 修回日期: 2007-08-24
ISSN 0001-6209; CN11-1995/Q
盛多紅, 朱珊珊, 李銘峰, 焦建東, 倪金鳳, 申玉龍*
(山東大學微生物技術(shù)國家重點實驗室, 濟南 250100)
摘要: RecA/Rad51/RadA 家族蛋白是細胞內(nèi)重要的重組修復蛋白, 在功能上非常保守,。研究發(fā)現(xiàn)在細菌,、真核生物、甲烷古菌和嗜鹽古菌細胞內(nèi)RecA/Rad51/RadA 均可以受紫外線輻射誘導轉(zhuǎn)錄,。而對極端嗜熱古菌中的RadA 輻射可誘導性仍存在爭議,。通過體外表達極端嗜熱古菌Sulfolobus tokodaii的RadA 蛋白, 制備抗體, 利用免疫學方法并結(jié)合RT-PCR 分析, 對嗜熱古菌S. tokodaii 中RadA 的輻射誘導進行了研究。經(jīng)過100J/m2 和200J/m2 UV 輻照處理, radA 基因的轉(zhuǎn)錄分別上調(diào)了2 倍和3倍, 同時RadA 蛋白的表達分別上升了1.5 倍和1 倍,。實驗結(jié)果表明S. tokodaii 中RadA 可以被紫外線輻射誘導表達, 證實了極端嗜熱古菌S. tokodaii 細胞中存在DNA 損傷誘導反應(yīng)的觀點,。
關(guān)鍵詞: 嗜熱古菌; RadA; 輻射可誘導性; DNA 修復
中圖分類號: Q936 文獻標識碼: A 文章編號: 0001-6209 (2008) 03-0317-06
紫外線(UV)可以造成DNA 損傷, 包括堿基損傷、單鏈與雙鏈斷裂,、鏈間交聯(lián)及DNA 蛋白質(zhì)交聯(lián)等輻射損傷形式, 如得不到及時而有效的修復, 或發(fā)生錯誤修復, 就會危害細胞的生存, 并可能導致人類嚴重疾病,。對DNA 輻射損傷的修復涉及到多種修復蛋白, 其中同源重組修復蛋白RecA/Rad51 在這一過程中扮演重要角色[1,2]。RecA/Rad51 分別是細菌和真核生物重組修復的關(guān)鍵酶,。當DNA 受到損傷時, RecA/Rad51 的表達受到誘導, 因此, RecA/Rad51 的表達水平常被用作檢測UV 輻射的指標之一[3～5],。RadA 是古菌中RecA/Rad51蛋白同系物, 同樣具有DNA 重組活性, 在DNA 重組修復中起重要作用[6,7]。研究發(fā)現(xiàn), 和真核生物或細菌的RecA/Rad51 一樣, 甲烷古菌和嗜鹽古菌中的RadA同樣具有UV 輻射損傷誘導活性[8,9],。極端嗜熱古菌主要生活在熱泉和深?；鹕絿娍诟浇雀邷丨h(huán)境中,分屬于廣古菌和泉古菌。早在1996 年, Sandler 等[7]
報道生活于高溫環(huán)境下泉古菌Sulfolobus solfataricus中的RadA 不受UV 損傷誘導表達,。Komori 等[10]發(fā)現(xiàn)廣古菌Pyrococcus furiosus 的RadA 在細胞內(nèi)組成型表達, 不受UV 輻射的誘導, 他們對此的一種解釋是高溫誘導了RadA 的持續(xù)表達,。然而我們在研究另一個嗜熱泉古菌S. tokodaii 的損傷修復系統(tǒng)時發(fā)現(xiàn)其具有DNA 損傷誘導反應(yīng)。為了進一步探明S. tokodaii 細胞中RadA 的UV 損傷誘導情況, 本文利用大腸桿菌異源表達S. tokodaii 中的RadA 蛋白, 制備了RadA 抗體,。通過免疫學分析及RT-PCR 分析證實了S. tokodaii 中的RadA 可以被UV損傷誘導表達,。
全文下載：超嗜熱古菌Sulfolobus tokodaii RadA 蛋白的克隆表達及其輻射可誘導性
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