Enhancement by FK506 of Triptolide-induced Inhibition of Expression of COX-2 and iNOS in Human Rheumatoid Arthritis Synovial Fibroblasts
姚航平 邵雪婷 孫文佶 邵傳森 張立煌
摘 要：研究了FK506對雷公藤內(nèi)酯醇抑制類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞(RASF)增殖和表達(dá)環(huán)氧化酶-2(COX-2)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)及合成前列腺素E2(PGE2),、一氧化氮(NO)的影響, 探討了FK506聯(lián)合雷公藤抗類風(fēng)濕作用的機制.分離培養(yǎng)人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞, 用不同濃度的FK506處理后, 加或不加雷公藤內(nèi)酯醇(TP)和TNFα, 分別用[3H]-TdR法,、競爭ELISA和硝酸酶還原法,、半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法、細(xì)胞酶免疫法及Western印跡法檢測滑膜細(xì)胞的增殖活性,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液中PGE2和NO的水平,、滑膜細(xì)胞COX-2和iNOS mRNA表達(dá)水平及蛋白質(zhì)表達(dá)水平.同時提取各組細(xì)胞蛋白質(zhì), 測定其核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活性.結(jié)果表明, FK506(10～1000 nmol/L)及低濃度的TP(10 μg/L)單獨對TNFα活化的RASF表達(dá)COX-2、 iNOS及合成PGE2,、 NO均無明顯的抑制作用; FK506與低濃度的TP聯(lián)合作用后, 對活化的RASF具有不同程度的抑制作用, 并與聯(lián)合的FK506濃度(10～1000 nmol/L)呈明顯正相關(guān)性, 且兩者聯(lián)合對TNFα激活的RASF核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活性有明顯的抑制作用.實驗未觀察到FK506對TP抑制滑膜細(xì)胞增殖的影響.以上結(jié)果說明, FK506可顯著增強TP對滑膜細(xì)胞COX-2和iNOS的表達(dá)及其產(chǎn)物PGE2和NO合成的抑制作用, 這種作用可能通過增強TP對核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活性的抑制作用而實現(xiàn).
關(guān)鍵詞：FK506; 雷公藤內(nèi)酯醇; 關(guān)節(jié)炎, 類風(fēng)濕; 環(huán)氧化酶-2; 誘導(dǎo)型一氧化氮合酶
分類號：R593 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A
基金項目：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.39800135)
作者簡介：姚航平,聯(lián)系人: Tel, 0571-87217314; e-mail, [email protected]
作者單位：姚航平（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)研究所,杭州,310031）
邵雪婷（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院,杭州,310003）
孫文佶（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)研究所,杭州,310031）
邵傳森（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)研究所,杭州,310031）
張立煌（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)研究所,杭州,310031）
